Page 85 - 《中国药房》2021年8期

1.02％磷酸二氢钾缓冲液（用磷酸调节 pH 值至 3.5）-乙 0.25
腈（85 ∶ 15，V/V）为流动相 A、1.02％磷酸二氢钾缓冲液 0.20 贝林司他 杂质A
0.15 杂质D
（用磷酸调节pH值至3.5）-乙腈（30 ∶ 70，V/V）为流动相B mAU 杂质F
进行梯度洗脱（洗脱程序见表1），流速为1.0 mL/min，柱 0.10 杂质B 杂质H 杂质G
0.05 杂质C
温为30 ℃，检测波长为220 nm，进样量为10 μL。
0
表1 贝林司他有关物质测定的流动相梯度洗脱程序 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
Tab 1 Gradient elution procedure of mobile phase for t，min
A.系统适用性混合溶液
determination of related substances in belino- 100
stat 80
起始时间，min 流动相A，％ 流动相B，％ mAU 60
0 100 0 40
10 100 0 20
15 80 20
0
20 80 20
30 0 100 0 10 20 30 40 50
t，min
45 0 100 B.空白溶液
50 100 0 图 1 系统适用性混合溶液和空白溶液的高效液相色
60 100 0
谱图
2.2 溶液的制备
Fig 1 HPLC chromatograms of system suitability
2.2.1 供试品溶液 取贝林司他原料药约 50 mg，置于
mixture and blank solution
100 mL量瓶中，加流动相B溶解并定容，摇匀，制成质量
（加5％H2O2溶液2 mL，于60 ℃下加热6 h）破坏试验，按
浓度为0.5 mg/mL的供试品溶液。
“2.2.1”项下方法制成供试品溶液后，再按“2.1”项下色谱
2.2.2 自身对照溶液 取“2.2.1”项下供试品溶液1 mL，
条件进样测定，记录峰面积，并与未破坏的供试品溶液
置于1 000 mL量瓶，加流动相B稀释并定容，摇匀，制成
进行对比。结果表明，在不同的破坏条件下，贝林司他
质量浓度为0.5 μg/mL的自身对照溶液。
与各降解物均能有效分离，其中贝林司他对温度、光照
2.2.3 杂质单一对照品溶液 取杂质 A、B、C、D、F、G、
均较稳定，对酸、碱、氧均较敏感，且其主要降解杂质均
H对照品适量，均用流动相B溶解、稀释，摇匀，制成质量
为杂质 D，详见图 2（以主成分为参照，根据相对保留时
浓度均为0.5 mg/mL的单一对照品溶液。
间判定各色谱峰的归属）。
2.2.4 系统适用性混合溶液 取“2.2.1”项下供试品溶
2.5 线性关系和校正因子考察
液和“2.2.3”项下杂质 A、B、C、D、F、G、H 的单一对照品
精密称取贝林司他原料药和杂质A、D、F、G、H对照
溶液各适量，用流动相 B 溶解、稀释，摇匀，制成贝利司
品各约 10 mg，置于 100 mL 量瓶，加甲醇溶解并稀释至
他质量浓度为 0.5 mg/mL，杂质 A、B、C、D、F、G、H 质量
刻度，混匀；移取上述溶液5 mL，置于100 mL量瓶，加流
浓度均为5 μg/mL的系统适用性混合溶液。
动相B稀释至刻度，得混合线性对照品贮备液。取贮备
2.3 系统适用性试验
精密量取系统适用性混合溶液和空白溶液（流动相 液适量，用流动相B稀释至各杂质含量分别为主成分的
B）适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。 0.02％、0.04％、0.08％、0.10％、0.12％、0.24％、0.30％，按
结果，杂质F、杂质B、贝林司他、杂质H、杂质D、杂质G、 “2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以各待测成
杂 质 C、杂 质 A 的 出 峰 时 间 依 次 为 16.123、18.475、 分质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进
19.222、21.699、29.609、35.165、38.227、42.317 min；以贝 行线性回归，以主成分为参比物质计算校正因子（即主
林司他峰计，各峰的相对保留时间分别为 0.84、0.96、 成分贝林司他的线性斜率/对应杂质的线性斜率）。贝林
1.00、1.13、1.54、1.83、1.99、2.20；分离度均大于 1.5，理论 司他和5个杂质的线性关系及校正因子见表2。
板数均大于80 000；空白溶液对测定无干扰，详见图1。 2.6 检测限与定量限考察
2.4 破坏试验 取“2.5”项下混合线性对照品贮备液以流动相 B 进
取贝林司他原料药适量，分别进行高温（100 ℃下放 行逐级稀释，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以信噪比
置 48 h）、光照[（5 000±500）lx 下放置 45 天]、酸（加 2 3 ∶ 1、10 ∶ 1分别计算检测限和定量限。结果，杂质A、D、
mol/L 盐酸溶液 2 mL，于 60 ℃下加热 1.5 h）、碱（加 2 F、G、H的检测限分别为0.250、0.590、0.490、0.600、0.500
mol/L 氢氧化钠溶液 2 mL，于 60 ℃下加热 1.5 h）、氧化 ng，定量限分别为0.500、1.170、0.980、1.200、1.000 ng。

中国药房 2021年第32卷第8期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 8 ·975 ·