Page 73 - 《中国药房》2021年8期

2.4 指纹图谱方法学考察
2.4.1 精密度试验 精密称取杜仲补天素丸（编号 S6）
4 g，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3”项下色
谱条件连续进样测定6次。以15号峰丹皮酚为参照，计
算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，22个
共有峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD 分别为
0.03％～1.77％（n＝6）和0.16％～2.93％（n＝6）。
2.4.2 重复性试验 精密称取杜仲补天素丸（编号S6）6
份，每份4 g，按“2.2”项方法制备供试品溶液，再按“2.3”
项下色谱条件进样测定。以15号峰丹皮酚为参照，计算
各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，22个共
有峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD 分别为
0.01％～0.19％（n＝6）和0.25％～2.75％（n＝6）。
2.4.3 稳定性试验 精密称取杜仲补天素丸（编号 S6）
4 g，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于室温下放
置0、4、8、12、16、20、24 h时按“2.3”项下色谱条件进样测
定。以15号峰丹皮酚为参照，计算各共有峰的相对保留
时间和相对峰面积。结果，22个共有峰的相对保留时间
和相对峰面积的 RSD 分别为 0.03％～2.79％（n＝7）和
0.48％～2.93％（n＝7）。
2.5 指纹图谱建立与相似度评价
2.5.1 指纹图谱建立与共有峰指认 分别取 12 批杜仲
补天素丸样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，再按
“2.3”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。将所得 12
批样品的色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系
统（2012 版）》进行分析，以 S6（分离度最好）为参照图
谱，采用中位数生成法，设置时间窗宽度为0.3 min，对色
谱峰进行多点校正和全峰匹配，得到HPLC叠加指纹图
谱和对照指纹图谱（R），详见图1。结果，保留时间稳定
的共有峰有22个，通过与混合对照品色谱图（以“2.3”项
下色谱条件分析所得，见图 2）比对，指认峰 1 为没食子
酸、峰 3 为绿原酸、峰 6 为甘草苷、峰 7 为金丝桃苷、峰 8
为毛蕊花糖苷、峰14为淫羊藿苷、峰15为丹皮酚。因峰
15 分离度好、峰面积较为稳定且保留时间适宜，因此确
定丹皮酚为参照峰，计算22个共有峰的相对保留时间及
相对峰面积，结果见表1、表2。
2.5.2 相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱相似度评
价系统（2012 版）》对 12 批杜仲补天素丸样品进行相似
度分析。结果，S1～S12 批样品与对照指纹图谱的相似
度分别为 0.976、0.998、0.998、0.998、0.999、0.960、0.998、
0.995、0.998、0.980、0.998、0.997，均不低于0.960，表明这
12批样品之间的化学成分基本一致，与对照指纹图谱有
很高的相似度。
2.6 化学模式识别
2.6.1 聚类分析 使用 SPSS 21.0 软件，运用组间对比
法对12批样品的共有峰峰面积数据进行聚类分析，以平
方 Euclidean 距离计算样品相似程度。结果，12 批样品
可聚为 4 类，其中 S1、S3～S5、S7、S9、S11 为一类，S2、
中国药房 2021年第32卷第8期
520
480
440
400
360
320
mV U， 280
240
200
160
120
80
40
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130
t，min
图1 12批杜仲补天素丸样品的HPLC叠加指纹图谱和
对照指纹图谱
Fig 1 HPLC superimposed fingerprints and control
fingerprints of 12 batches of Duzhong butiansu
pills
50
40
30
mV U， 20
10
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130
t，min
注：1.没食子酸；3.绿原酸；6.甘草苷；7.金丝桃苷；8.毛蕊花糖苷；
14.淫羊藿苷；15.丹皮酚
Note：1. gallic acid；3. chlorogenic acid；6. liquiritoside；7. hypero-
side；8. verbascoside；14. icariin；15. paeonol
图2 混合对照品溶液的高效液相色谱图
Fig 2 HPLC chromatogram of mixed control solution
表 1 12 批杜仲补天素丸样品 HPLC 指纹图谱共有峰
的相对保留时间
Tab 1 Relative retention time of common peaks in
HPLC fingerprints of 12 batches of Duzhong
butiansu pills
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12
1 0.093 5 0.087 1 0.087 3 0.086 2 0.088 6 0.087 5 0.086 1 0.086 0 0.086 0 0.091 7 0.089 1 0.086 0
2 0.170 9 0.164 1 0.164 1 0.164 4 0.164 3 0.164 7 0.164 4 0.164 4 0.164 4 0.170 3 0.165 5 0.163 9
3 0.269 9 0.265 9 0.265 9 0.266 1 0.266 1 0.265 5 0.266 2 0.266 2 0.266 2 0.269 7 0.266 7 0.265 6
4 0.409 2 0.408 4 0.408 5 0.408 5 0.408 5 0.407 3 0.408 4 0.408 6 0.408 6 0.409 1 0.408 5 0.408 2
5 0.464 7 0.462 7 0.462 8 0.462 9 0.463 0 0.462 0 0.462 9 0.463 0 0.462 9 0.464 9 0.463 0 0.462 4
6 0.486 7 0.485 3 0.485 5 0.485 5 0.485 6 0.484 8 0.485 3 0.485 6 0.485 5 0.487 3 0.485 6 0.485 2
7 0.511 0 0.509 2 0.510 4 0.510 4 0.510 4 0.510 0 0.510 1 0.510 5 0.510 5 0.511 8 0.510 5 0.510 1
8 0.530 5 0.530 2 0.530 3 0.530 3 0.530 3 0.529 7 0.529 8 0.530 4 0.530 3 0.530 8 0.530 4 0.530 0
9 0.582 1 0.581 9 0.581 9 0.582 0 0.582 0 0.581 7 0.581 7 0.582 1 0.582 1 0.582 9 0.582 2 0.582 0
10 0.627 7 0.627 4 0.627 5 0.627 6 0.627 5 0.627 2 0.627 3 0.627 8 0.627 6 0.628 7 0.628 0 0.627 8
11 0.722 8 0.723 0 0.723 0 0.723 4 0.723 2 0.722 9 0.722 8 0.723 2 0.723 1 0.724 4 0.723 4 0.723 5
12 0.759 7 0.759 8 0.759 8 0.760 2 0.760 0 0.759 9 0.759 8 0.760 0 0.759 9 0.761 2 0.760 3 0.760 3
13 0.944 0 0.944 7 0.944 6 0.944 7 0.944 7 0.945 1 0.945 0 0.945 2 0.945 2 0.944 9 0.945 9 0.946 0
14 0.966 2 0.967 0 0.967 0 0.967 0 0.966 9 0.967 4 0.967 3 0.967 5 0.967 4 0.967 3 0.968 2 0.968 4
15 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0
16 1.152 4 1.153 0 1.153 2 1.153 0 1.153 2 1.153 7 1.153 5 1.153 5 1.153 4 1.152 8 1.153 7 1.153 8
17 1.381 8 1.382 6 1.382 4 1.382 3 1.382 5 1.383 0 1.382 8 1.383 2 1.382 8 1.381 6 1.383 4 1.383 4
18 1.427 8 1.428 7 1.428 5 1.428 3 1.428 6 1.429 2 1.428 9 1.429 4 1.429 0 1.427 7 1.429 5 1.429 5
19 1.439 8 1.440 7 1.440 4 1.440 3 1.440 6 1.441 1 1.440 9 1.441 4 1.441 0 1.439 6 1.441 5 1.441 5
20 1.487 2 1.488 2 1.487 6 1.487 6 1.487 9 1.488 4 1.488 2 1.488 7 1.488 3 1.486 8 1.488 7 1.488 7
21 1.522 7 1.523 7 1.523 1 1.523 1 1.523 5 1.524 2 1.523 9 1.524 6 1.524 0 1.522 5 1.524 4 1.524 6
22 1.614 6 1.615 7 1.615 1 1.615 0 1.615 2 1.616 1 1.615 8 1.616 6 1.616 1 1.614 3 1.616 4 1.616 5
China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 8 ·963 ·