Page 78 - 《中国药房》2021年07期
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葛根为豆科植物野葛 Pueraria lobata（Willd.）Ohwi           S120167），3′-羟基葛根素、3′-甲氧基葛根素对照品（四川
        的干燥根，始载于《神农本草经》，历代本草均有记载，具                          省维克奇生物科技有限公司，批号分别为 wkq-00019、
                                           [1]
        有解肌退热、生津止渴、升阳止泻等功效 。现代研究表                           wkq-01640）；乙酸乙酯、正丁醇为分析纯，甲醇为色谱
        明，葛根含有葛根素、3′-羟基葛根素、3′-甲氧基葛根素、                       纯，其余试剂为分析纯或实验室常用规格，水为娃哈哈
        大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷、芒柄花苷等异                           纯净水。
                                               [5]
                                    [4]
        黄酮类活性成分         [2 － 3] ，具有抗癌 、保护心肌 、解酒保            2 方法与结果
          [6]
                   [7]
        肝 、降血脂 、降血糖 、抗衰老 等多种药理作用。近                          2.1 葛根抗氧化活性部位样品的制备
                            [8]
                                    [9]
        年来，研究发现，人体细胞在氧化还原代谢过程中可产                                参考文献[15]方法，取葛根药材 100 g，粉碎，过 100
        生少量自由基，当超过人体自身清除能力时，多余的自                            目筛，以 70％乙醇回流提取 3 次，每次 1.0 h；合并滤液，
        由基就会残留人体内，产生氧化应激，从而引起多种疾                            于 50 ℃条件下减压浓缩，得葛根醇提取物浸膏。取上
        病 [10－11] 。相关研究发现，葛根的多糖和总黄酮均具有明                     述浸膏，加适量水溶解，并用乙酸乙酯萃取3次；合并萃
        显的抗氧化活性，但研究主要集中在其有效物质的提取                            取液，于 50 ℃条件下减压浓缩，干燥，即得葛根抗氧化
                       [12]
        及活性研究方面 ，并未针对其具体的氧化活性部位进                            活性部位粉末[得率为 3％～4％（以生药量计）]，于 4 ℃
        行深入研究。                                              保存，备用。本研究以 20 批葛根药材分别制得 20 批葛
            中药是通过多种成分的协同作用来发挥疗效的，因                          根抗氧化活性部位样品（编号S1～S20）。
        此有必要对其药效确切的活性部位开展质量控制研                              2.2 葛根抗氧化活性部位HPLC指纹图谱研究
        究。指纹图谱因其整体性、全面性、关联性、层次性，能                           2.2.1  色谱条件      色谱柱为 SepaxBio-C18 （250 mm×4.6
        够较完整地获得中药的化学成分信息，常与化学计量学                            mm，5 μm）；流动相为甲醇（A）-水（B），梯度洗脱（0～10
        相结合以从多个方面评价中药的质量，且这种方法目前                            min，25％A；10～15 min，25％ A→27％A；15～25 min，
        已成为国际公认的控制中药质量的有效手段之一                      [13－14] 。  27％A→30％A；25～50 min，30％A→100％A；50～60
        本课题组前期筛选了葛根抗氧化活性部位，基于此，本                            min，100％ A→25％A）；流速为0.6 mL/min；检测波长为
        研究制备了20批葛根药材的抗氧化活性部位，以建立其                           250 nm；柱温为25 ℃；进样量为10 μL。
        高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，并结合聚类分析、主成                         2.2.2  溶液的制备 （1）混合对照品溶液：分别精密称
        分分析、正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）等化学计                        取葛根素、染料木素、染料木苷、大豆苷、大豆苷元、芒柄
        量法筛选葛根抗氧化作用的药效物质，以期为葛根抗氧                            花苷、3′-甲氧基葛根素、3′-羟基葛根素对照品各适量，置
        化活性成分的确定提供参考。                                       于同一量瓶中，加甲醇溶解制成质量浓度分别为0.071、
        1 材料                                                0.023、0.042、0.076、0.017、0.087、0.022、0.019 mg/mL 的
        1.1  主要仪器                                           混合对照品溶液。（2）供试品溶液：分别精密称取葛根抗
            本研究所用主要仪器有：Agilent1260型高效液相色                    氧化活性部位样品适量，加适量甲醇溶解，超声（功率为
        谱仪（美国Agilent公司）、KQ-250DB型数控超声波清洗                    200 W，频率为45 kHz）处理15 min，放冷，加甲醇稀释至
        器（昆山市超声仪器有限公司）、ALB-224型万分之一分                        刻度，摇匀，制成质量浓度为 2.02 mg/mL（以提取物计，
        析天平（德国Sartorius公司）、RT-12型粉碎机（河北本辰                   下同）的供试品溶液。
        科技有限公司）。                                            2.2.3  精密度试验       取“2.2.2（2）”项下供试品溶液适
        1.2  主要药品与试剂                                        量，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样测定6次。以峰11
            本研究所用 20 批葛根药材（编号 A1～A20）均购自                   （该峰峰形较好且分离度良好、峰面积稳定，故选此峰为
        北京本草方源药业集团有限公司（药材产地均为河南，                            参照峰，下同）的保留时间和峰面积为参照，记录各共有
        批号分别为 20190321、20190415、20190506、20190913、          峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，18个共有峰相
        20190930、20191010、20191020、20191108、20191123、       对保留时间的 RSD 均小于 0.4％（n＝6），相对峰面积的
        20191207、20191218、20200105、20200116、20200308、       RSD均小于3.0％（n＝6），表明仪器精密度良好。
        20200322、20200516、20200526、20200603、20200613、       2.2.4  重复性试验      取葛根抗氧化活性部位样品（编号
        20200625），经长春中医药大学人参科学研究院姜大成                        S19），共6份，按“2.2.2（2）”项下方法制备供试品溶液，按
        教授鉴定为豆科植物野葛 P. lobata（Willd.）Ohwi 的干               “2.2.1”项下色谱条件进行测定。以峰 11 的保留时间和
        燥根；所用主要试剂为葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料                           峰面积为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰
        木素、染料木苷、芒柄花苷对照品（中国食品药品检定                            面积。结果，18 个共有峰相对保留时间的 RSD 均小于
        研 究 院 ，批 号 分 别 为 S02M9B54875、P14M10F83057、          0.5％（n＝6），相对峰面积的 RSD 均小于 3.0％（n＝6），
        C06N6Y5504、H30A9Z69019、P09M8F31018、M02A11-          表明方法重复性良好。


        ·840 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 7                                    中国药房    2021年第32卷第7期
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