Page 79 - 《中国药房》2021年07期

2.2.5 稳定性试验 取“2.2.2（2）”项下供试品溶液（编 220
号S19）适量，分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h后，按 200
180
“2.2.1”项下色谱条件进样测定。以峰 11 的保留时间和 160
峰面积为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰 140
mV 120
面积。结果，18 个共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 U， 100
1.3％（n＝6），相对峰面积的 RSD 均小于 3.0％（n＝6）， 80
60
表明供试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。
40
2.2.6 葛根抗氧化活性部位HPLC指纹图谱的生成 分 20
别取 20 批葛根抗氧化活性部位样品适量，按“2.2.2（2）” 0
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60
项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进 t，min
样测定。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》 注：2. 3′-羟基葛根素；3. 葛根素；4. 3′-甲氧基葛根素；5. 大豆苷；
（2012版）对20批样品的HPLC图谱进行处理，采用平均 7. 染料木苷；11. 芒柄花苷；13. 大豆苷元；16. 染料木素
Note：2. 3′-hydroxypuerarin；3. puerarin；4. 3′-methoxypuerarin；5.
数法，将时间窗设置为 0.1 min，以编号 S10 样品的色谱
daidzin；7. genistein；11. formononetin；13. daidzein；16. genistein
图为参照图谱，经多点校正后，进行色谱峰的匹配，生成 图2 混合对照品的HPLC图谱
对照谱图（R），得到葛根抗氧化活性部位 HPLC 叠加指 Fig 2 HPLC fingerprint of mixed control
纹图谱，详见图1。
2.3 葛根抗氧化活性部位的药效物质筛选
1 700
1 600 2.3.1 聚类分析 以 20 批葛根抗氧化活性部位的
1 500
1 400 HPLC指纹图谱中18个共有峰的峰面积为原始数据，采
1 300
1 200 用 SPSS 21.0 软件对原始数据进行标准化，以组间均联
1 100
1 000 R 法结合平方欧氏距离对 20 批葛根抗氧化活性部位样品
mV 900 S20
S19
U， 800 S18 进行聚类分析。结果，当平方欧氏距离为 15 时可将 20
S17
S16
700 S15
S14
600 S13 批样品聚为 2 类：样品 S1、S3、S4、S6、S8、S18、S19 聚为
S11
500 S12
S10
400 S9 S8 一类；样品 S2、S5、S7、S9～17、S20 号聚为一类，详见
300 S7 S6
200 S5 S4 图3。
100 S3 S2
0 S1 2.3.2 主成分分析 以葛根抗氧化活性部位的HPLC指
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 纹图谱中18个共有峰的峰面积为变量，建立20×18的原
t，min
图1 20批葛根抗氧化活性部位样品的HPLC叠加指纹 始数据矩阵，并使用多元统计软件 SIMCA 14.1 对 20 批
图谱 葛根抗氧化活性部位进行主成分分析，计算其主成分得
Fig 1 HPLC superimposed fingerprint for 20 batches 分。结果，20 批葛根抗氧化活性部位可聚为 2 类：样品
S1、S3、S4、S6、S8、S18、S19 聚为一类；样品 S2、S5、S7、
of antioxidant fraction of P. lobata
S9～S17、S20聚为一类。这与聚类分析结果相一致。20
2.2.7 共有峰的指认及相关分析 取“2.2.2（1）”项下混
批葛根抗氧化活性部位的主成分得分图见图4。
合对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样，记录色谱
以 18 个共有峰为变量，使用 SIMCA 14.1 软件进行
图，详见图2。将图1与图2比对可知，20批葛根抗氧化
分析，筛选出贡献最大的 2 个主成分，贡献率之和为
活性部位样品共含18个共有峰，其中峰2为3′-羟基葛根 77.169％（即这 2 个主成分能反映葛根抗氧化活性部位
素、峰 3 为葛根素、峰 4 为 3′-甲氧基葛根素、峰 5 为大豆 的基本特征），并得到20批葛根抗氧化活性部位的主成
苷、峰 7 为染料木苷、峰 11 为芒柄花苷、峰 13 为大豆苷 分荷载图，详见图 5（图中每个点代表 1 个色谱峰，表示
元、峰 16 为染料木素。20 批葛根抗氧化活性部位共有 每个色谱峰对主成分综合作用的贡献；距离载荷图原点
峰的相对保留时间和相对峰面积见表1、表2。 越远的点，其变量权重越大，即表明化学成分与样品质
2.2.8 相似度评价 将 20 批葛根抗氧化活性部位样品 量的相关性越强 [16－17] ）。由图5可知，对主成分1影响较
的HPLC指纹图谱导入《中药色谱指纹图谱相似度评价 大有峰2（3′-羟基葛根素）、峰3（葛根素）、峰10、峰11（芒
系统》（2012 版）进行相似度评价。结果，20 批葛根抗氧 柄花苷）、峰13（大豆苷元），对主成分2影响较大有峰8、
化活性部位样品的HPLC指纹图谱与对照图谱（R）的相 峰9。
似度均大于 0.99，表明各批样品的化学成分一致性较 2.3.3 OPLS-DA 为了更好地分析样品间的差异，使用
好，详见表3。 SIMCA14.1 软 件 对 20 批 葛 根 抗 氧 化 活 性 部 位 进 行

中国药房 2021年第32卷第7期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 7 ·841 ·