Page 43 - 《中国药房》2021年第6期
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涡旋混匀以沉淀蛋白，于 4 ℃下以 15 000 r/min 离心 30               动态排除时间为10.0 s。
        min，取上清液5 μL进行分析。                                  2.7 数据处理方法
        2.4.2  尿液/胆汁样品      取尿液/胆汁样品100 μL，加入3                 将样品质谱数据文件导入 Compound Discovery 2.1
        倍体积的甲醇涡旋混匀以沉淀蛋白，于4 ℃下以15 000                       软件，以THSG和THSG苷元（THS）为过滤模板，分别设
        r/min离心30 min，取上清液5 μL进行分析。                        定质量范围和质量亏损范围为 50 Da 和 50 mDa，误差
        2.4.3  组织样品     取各组织样品，加入3倍量（g/mL）生                值＜3 ppm，通过与空白生物样品比较，排除内源性因素
        理盐水，在冰浴下匀浆，超声（功率280 W，频率40 kHz）                    干扰，得到处理数据集。结合体内药物代谢规律，根据精
        10 min，于 4 ℃下以 15 000 r/min 离心 30 min，取上清液         确相对分子质量的高分辨质谱信息、碎片离子信息并结
        100 μL，再加入3倍体积的甲醇涡旋混匀以沉淀蛋白，于                       合相关文献，筛选代谢产物相关信息，推测代谢途径 。
                                                                                                      [13]
        4 ℃下以 15 000 r/min 离心 30 min，取上清液 5 μL 进行          3 结果
        分析。                                                3.1 THSG对照品的质谱裂解规律
        2.5 液相条件                                               在负离子模式下，THSG 的准分子离子峰[M－H]                  －
            以Acquity UPLC HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）     为m/z 405.119 45，推测分子式为C20H22O9，二级质谱图中
        为色谱柱，以 0.1％甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相                      出现碎片离子 m/z 243.066 13、137.023 19、149.022 84、
        进行梯度洗脱（0～2 min，10％B→15％B；2～4 min，                  215.070 13、225.054 76、173.059 37、93.032 98。其中，主
        15％B→20％B；4～8 min，20％B→30％B；8～10 min，              要碎片离子m/z 243.066 13（C14H12O4 ）系由THSG脱去一
        30％ B→40％ B；10～11 min，40％ B→60％ B；11～12            分子葡萄糖残基（C6H10O5 ）形成THS碎片离子峰，结合文
        min，60％B→70％B），流速为0.2 mL/min，柱温为35 ℃，              献[14]报道，可推测THSG的质谱裂解途径，详见图1。
        自动进样器温度为4 ℃，进样量为5 μL。                                  由图 1 可见，THSG 中碎片离子 m/z 225.054 76、
        2.6  质谱条件                                          215.070 13分别由m/z 243.066 13丢失1分子H2O、1分子
            以组合型四极杆 Orbitrap 质谱仪进行检测；离子源                   CO 形成，由于 THS 中没有直接脱去 H2O 和 CO 的基团，
        为加热型电喷雾离子源，离子源温度为 350 ℃；碰撞能                        推测 THS 可能由于羟基取代苯环首先发生重排成醌式
        量为 25、35、45 eV；鞘气流速为 40 arb；辅助气为 15 arb；           结构后，再脱去小分子基团形成较为稳定的碎片离子。
        喷雾电压为2.5 kV；辅助气温度为350 ℃；采集模式为负                     m/z 149.022 84 为脱去苯环后所形成的碎片离子，m/z
        离子模式，质谱检测模式为全扫描/数据依赖二级扫描                           137.023 19为THS发生醌式重排后双键位置断裂且多个
       （Full mass/dd-MS）；Full mass 分辨率为 70 000，监测离         羰基基团脱去 CO 后形成的碎片离子。m/z 215.070 13
                       2
                                        2
        子扫描范围为m/z 100～1 200；dd-MS 分辨率为17 500，              脱去1分子C2H2O中性分子形成m/z 173.059 37。





                                                      THSG
                                                      m/z 405.119 45



                                                重排                 重排
                                                      THS
                                    m/z 243.066 13                                       m/z 137.023 19
                  m/z 225.054 76                      m/z 243.066 13      m/z 243.066 13
                                                       重排




                                         m/z 149.022 84
                                                         m/z 243.066 13






                                    m/z 173.059 37                       m/z 93.032 98
                                                         m/z 215.070 13
                                             图1   THSG的质谱裂解途径
                                Fig 1  Mass spectrometry fragmentation pathway of THSG


        中国药房    2021年第32卷第6期                                               China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 6  ·677 ·
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