Page 42 - 《中国药房》2021年第6期

After precipitated with methanol，the metabolites of samples were analyzed and identified by UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS and
mass loss filtration（MDF）. Its metabolism pathway was speculated. RESULTS：In the blood，urine，bile，heart，liver，spleen，
lung，kidney，stomach samples，6，7，11，1，5，1，3，4，4 metabolites were detected，including two phase Ⅰ（hydrolysis，
hydrogenation and hydroxylation）metabolites，18 phase Ⅱ（glucuronic acid binding and sulfation）metabolites. There were 12
glucuronic acid binding products. CONCLUSIONS：Most of the metabolites of THSG are found in bile，mainly glucuronic acid
binding products of phase Ⅱ metabolite THSG； main metabolic pathways involve glucose hydrolysis， hydrogenation，
hydroxylation，glucuronic acid binding and sulfation.
KEYWORDS Tetrahydroxystilbene glucoside；UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS；Mass defect filter；Metabolite；Rats

二苯乙烯苷（Tetrahydroxystilbene glucoside，THSG） 1.2 主要药品与试剂
为多羟基茋类化合物，化学名为 2，3，5，4′-四羟基二苯 THSG 对照品（批号 HSW191102，纯度≥99.5％）购
乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷，是中药何首乌中的特有成 自桂林益天成生物科技有限公司，顺式二苯乙烯苷对照
[1]
分 。现代研究表明，THSG 具有抗衰老、降低胆固醇、 品（cis-THSG，批号 P27A11F107214，纯度≥98％）购自
提高免疫功能、防治动脉硬化、保肝、抗肿瘤等多重药理 上海源叶生物科技有限公司，肝素钠购自上海如吉生物
作用 [2－3] 。但THSG单体的体内代谢途径尚不清晰，故有 科技有限公司，甲醇、乙腈（色谱级）均购自德国Merck公
必要对其代谢产物和代谢途径进行分析鉴定，为 THSG 司，甲酸（色谱级）购自美国Thermo Fisher Scientific公司；
的药效物质基础研究及代谢机制研究提供依据。 其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为超纯水。
目前，液相色谱-串联质谱技术（LC-MS/MS）在探讨 1.3 动物
药物代谢特征、确定药物代谢物结构和代谢途径等领域 SPF 级 SD 大鼠，雄性，体质量（220±20）g，购自南
中被广泛应用，已成为药物代谢分析研究的首选手段之 方医科大学实验动物中心，动物生产许可证号为SCXK
一 [4－6] 。超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨 （粤）2016-0041。
质谱联用技术（UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS）具有灵 2 方法
敏度高、分辨率高、快速准确等特点，在鉴定和辨识复杂 2.1 溶液的配制
生物样品的微量药物代谢产物时具有极大优势 。近年 称取 THSG 对照品适量，加水溶解，稀释制成质量
[7]
来，许多质谱数据挖掘技术如提取离子流技术、中性丢 浓度为60 mg/mL的溶液，振荡混匀，避光，备用。
失过滤技术、产物离子过滤技术等得到较大程度的开发 2.2 分组与给药
和应用 。其中，质量亏损过滤技术（MDF）是一种基于 将 18 只雄性 SD 大鼠随机分为血浆组（n＝3）、尿液
[8]
高分辨质谱数据的过滤技术，是以母体药物和核心亚结 组（n＝3）、胆汁组（n＝3）和组织组（n＝9）。实验前，所
构作为过滤模板，对复杂生物基质中药物代谢产物进行 有大鼠均于SPF级屏障环境适应性饲养1周，自由摄食、
快速检测的方法，能够有效去除干扰离子，在一定程度 饮水；给药前禁食12 h，各组大鼠均单次灌胃THSG溶液
上可以排除假阳性结果，从而提高目标筛选的准确 200 mg/kg 。
[12]
性 。由于MDF在代谢产物分析中的独特优势，使其得 2.3 生物样品采集与处理
[9]
以快速发展，越来越多地被应用于药物代谢分析研究 2.3.1 血浆 分别在给药后 10、30 min 和 1、1.5、2、4 h
中 [10－11] 。基于此，本文采用 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap 时采集血浆组大鼠眼眶血 0.3 mL，置于涂有肝素钠的
MS和MDF技术分析THSG在大鼠体内的代谢产物，推 1.5 mL离心管中，于4 ℃下以3 000 r/min离心10 min，分
测代谢途径，为进一步阐明其药效物质基础和药理作用 离血浆，合并同一只大鼠不同时间点的血浆样品，混匀，
机制提供参考。 于－80 ℃冰箱中保存。
1 材料 2.3.2 尿液 尿液组大鼠饲养于代谢笼中，收集给药后
1.1 主要仪器 0～6 h的尿液，于－80 ℃冰箱中保存。
本研究所用主要仪器包括 Q Exactive Plus 组合型 2.3.3 胆汁 给药后，胆汁组大鼠腹腔注射乌拉坦（1
TM
四极杆 Orbitrap 质谱仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公 g/kg）麻醉，通过胆管插管手术收集给药后 0～4 h 的胆
司）、Ultimate 3000 型 UHPLC 系统（美国 Dionex 公司）、 汁，于－80 ℃冰箱中保存。
LSE型涡旋混合器（美国Corning公司）、LK/CSJ-20型超 2.3.4 组织 组织组大鼠分别于给药后30 min和1、2 h
声清洗器（成都老肯科技股份有限公司）、5430R型高速 腹腔注射 10％水合氯醛（0.04 mL/kg）麻醉，每个时间点
冷冻离心机（德国Eppendorf公司）、RODI-220B1型纯水 各3只，分离心、肝、脾、肺、肾、胃，用生理盐水洗净，滤纸
机（广州誉维生物科技仪器有限公司）、BT-125D型十万 吸干水分，于－80 ℃冰箱中保存。
分之一电子天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公 2.4 样品预处理
司]等。 2.4.1 血浆样品 取血浆样品40 μL，加入4倍体积的甲醇

·676 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 6 中国药房 2021年第32卷第6期