Page 31 - 《中国药房》2021年第6期

2.3 供试品溶液的制备
2 200
精密称取样品粉末（过五号筛）约0.5 g，置于具塞锥 2 000
1 800 11
形瓶中，精密加入 70％甲醇 15 mL，密塞，称定质量，超 1 600 12
声（功率 250 W，频率 40 kHz）处理 30 min，放冷，再次称 1 400
mV 1 200 3
定质量，用 70％甲醇补足减失的质量，摇匀，经 0.45 μm 电压， 1 000 2 4 5 6 10 13 14 15 17 19
微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 800 1 7 9 8 16 18
600
2.4 方法学考察 400
200
2.4.1 精密度考察 取“2.3”项下供试品溶液（编号Q1）
0
适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次，以连翘 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76 80
苷为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰面 时间，min
图1 8批青翘药材样品的HPLC叠加指纹图谱
积。结果，19 个共有峰相对保留时间和相对峰面积的
Fig 1 HPLC superimposed fingerprint of 8 batches of
RSD均小于3％（n＝6），表明本方法精密度良好。
green F. suspensa
2.4.2 稳定性考察 取“2.3”项下供试品溶液（编号Q1）
适量，分别于室温下放置 0、2、4、8、12、24 h 时按“2.1”项 1 300
1 200
1 100
下色谱条件进样测定，以连翘苷为参照，记录各共有峰 1 000
900
的相对保留时间和相对峰面积。结果，19个共有峰相对 mV 800 5 6 9 10 11 12 15
700
保留时间和相对峰面积的 RSD 均小于 3％（n＝6），表明 电压， 600 1 2 3 4 7 8 13 14 16 17 18 19
500
供试品溶液于室温下放置24 h内稳定性良好。 400
300
200
2.4.3 重复性考察 取药材样品（编号 Q1）适量，按 100
0
“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76 80
件进样测定，以连翘苷为参照，记录各共有峰的相对保 时间，min
留时间和相对峰面积。结果，19个共有峰相对保留时间 图2 6批老翘药材样品的HPLC叠加指纹图谱
和相对峰面积的 RSD 均小于 3％（n＝6），表明本方法重 Fig 2 HPLC superimposed fingerprint of 6 batches of
复性良好。 grown F. suspensa
2.5 青翘和老翘HPLC指纹图谱的建立 图谱的相似度为0.609，表明两者成分存在明显差异。8
2.5.1 指纹图谱的建立 取 8 批青翘（编号 Q1～Q8）和 批青翘与6批老翘药材样品的相似度结果见表2。
6批老翘（编号L1～L6）样品适量，按“2.3”项下方法制备 2.6 聚类分析
供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色 将8批青翘和6批老翘药材样品的19个共有峰峰面
谱图。以连翘苷为参照，采用《中药色谱指纹图谱相似 积导入 SPSS 23.0 软件，采用组间连接法以欧氏平方距
度评价系统（2012 版）》进行分析，采用中位系数法对各 离为测度进行聚类分析。结果，8 批青翘和 6 批老翘可
色谱峰进行多点校正并自动匹配生成对照谱图（R）和 聚为4类，其中L1～L6聚为一类、Q1聚为一类、Q2～Q6
HPLC叠加指纹图谱，详见图1、图2。 聚为一类、Q7～Q8聚为一类，详见图4。
2.5.2 共有峰的指认 对青翘和老翘药材样品指纹图 2.7 主成分分析
谱进行数据匹配，共有19个共有峰。通过与混合对照品 将8批青翘和6批老翘药材样品的19个共有峰峰面
色谱图（见图3，取“2.2”项下混合对照品溶液，按“2.1”项 积导入 SPSS 23.0 软件，对经标准化处理后的共有峰峰
下色谱条件进样所得）比对，指认出了其中6个共有峰，分 面积进行主成分分析。结果，以特征值＞1 为提取标
[21]
别为连翘酯苷A（11号峰）、芦丁（12号峰）、松脂素-β-D-葡 准 ，得到前3个成分（即主成分）的累积方差贡献率，为
萄糖苷（13号峰）、连翘苷（17号峰）、槲皮素（18号峰）和连 83.14％，表明这3个主成分可以代表青翘和老翘药材样
翘脂素（19号峰）。因17号峰（连翘苷）的含量相对较高且 品指纹图谱中19个共有峰的大部分信息，详见表3。
分离度较好，故以其为参照峰。 主成分载荷矩阵反映了各变量对主成分的贡献大
[17]
2.5.3 相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱相似度评 小和作用方向 。采用 SPSS 23.0 软件对 8 批青翘和 6
价系统（2012版）》进行相似度评价。结果，8批青翘药材 批老翘药材样品中的 19 个共有峰主成分进行载荷矩阵
样品的相似度分别为 0.867、0.983、0.968、0.982、0.982、 分析。结果，共有峰 3、7～8、13～17 对主成分 1 贡献较
0.980、0.867、0.937，6 批老翘药材样品的相似度分别为 大，且与其成正相关；共有峰5～6对主成分2贡献较大，
0.909、0.875、0.946、0.910、0.949、0.948；青翘与老翘药材 且与其成正相关；共有峰 19 对主成分 3 贡献最大，且与
样品的相似度为 0.351～0.767，且青翘与老翘对照指纹 其成负相关，详见表4。

中国药房 2021年第32卷第6期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 6 ·665 ·