Page 90 - 《中国药房》2021年第4期

cells at G0/G1 phase increased significantly，while that at S phase decreased significantly（P＜0.01）. The apoptotic rate increased
significantly（P＜0.01），and the nucleus showed dense pyknosis and apoptotic bodies. The rate of cell migration and healing was
significantly decreased（P＜0.01），and the number of invasive cells through basement membrane was significantly decreased（P＜
0.01）. The protein expression of p-JAK2， p-STAT3， Bcl-2， MMP-2， MMP-9， Pro-caspase-9 and Pro-caspase-3 were
down-regulated significantly while the expression of Bax，Cyt-c，Cleaved-caspase-9 and Cleaved-caspase-3 were up-regulated
significantly（P＜0.01）. CONCLUSIONS：GL63 may inhibit the proliferation，migration and invasion of RBE cells and promote its
apoptosis by inhibiting JAK2/STAT3 signal pathway.
KEYWORDS Bromophenylcurcumin； Cholangiocarcinoma； RBE cell； JAK2/STAT3 signal pathway； Migration； Invasion；
Apoptosis

胆管癌是一种来源于胆管上皮细胞的高度侵袭性 信教授合成并鉴定；膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化
[1]
恶性肿瘤，其发病率和病死率均呈上升趋势 。胆管癌 丙啶（Annexin Ⅴ-FITC/PI）细胞凋亡检测试剂盒购自上
的恶性程度高、发病隐匿、诊治困难，虽然外科根治性切 海碧云天生物技术有限公司；兔抗人 JAK2、磷酸化
除术为目前临床治疗胆管癌的首选，但患者术后预后较 JAK2（p-JAK2）、STAT3、磷酸化 STAT3（p-STAT3）、B 淋
差 ，所以寻找抑制胆管癌细胞增殖、侵袭的有效药物， 巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关x蛋白（Bax）、基质金属蛋
[2]
是目前临床亟待解决的主要问题。姜黄素是从姜科植 白酶2（MMP-2）、MMP-9、细胞色素 C（Cyt-c）、前体胱天
物中提取的一种植物多酚类物质，具有抗炎、抗氧化和 蛋白酶 9（Pro-caspase-9）、裂解 Caspase-9（Cleaved-cas-
抗肿瘤等多种生物学活性，但是临床研究显示由于其生 pase-9）、Pro-caspase-3、Cleaved-caspase-3、甘油醛-3-磷
理条件下的不稳定性，使得该成分的生物活性和药动学 酸脱氢酶（GAPDH）多克隆抗体（批号分别为 ab39636、
行为均不理想，从而造成其在抗癌治疗方面的应用受 ab195055、 ab137803、 ab131103、 ab59348、 ab53154、
限 [3－4] 。本研究选用了一种新的姜黄素衍生物——溴苯 ab97779、ab38898、ab90529、ab69541、ab2324、ab90437、
基姜黄素（GL63）为对象。与姜黄素相比，GL63 的水溶 ab49822、ab37168）和 MTT 试剂均购自英国 Abcam 公
性和稳定性大为提高，并具有较高的细胞通透性，体现 司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔 IgG 二抗（批号
出较高的生物利用度和较强的药理活性 。研究发现， sc-2025）购自美国 Santa Cruz 公司；胎牛血清购自美国
[5]
Janus激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子（STAT）信号 Gibco 公司；基质胶购自美国 BD 公司；细胞总蛋白质抽
[6]
通路与胆管癌的发生密切相关 。因此，本课题组通过 提试剂、蛋白定量试剂盒、结晶紫试液均购自北京索莱
体外研究观察 GL63 作用于人胆管癌细胞后对细胞凋 宝科技有限公司；ECL 发光检测试剂盒购自美国 Milli-
亡、迁移和侵袭行为的影响，同时通过JAK2/STAT3信号 pore 公司；Hoechst 33342 蓝色荧光染料购自美国 BioVi-
通路肿瘤相关蛋白探索其可能机制，以期为胆管癌的治 sion公司；0.25％胰酶购自武汉尚恩生物技术有限公司；
疗提供新的思路与药物选择。 其余试剂为分析纯，水为蒸馏水。
1 材料 1.3 细胞
1.1 主要仪器 人胆管癌 RBE 细胞株来自中国科学院北京细胞生
本研究涉及的主要仪器包括：NU-400-400E 型超净 物研究所。
工作台（美国 ShelLab 公司），FORM 361 型细胞培养箱 2 方法
（美国 Thermo Electronic 公司），TGL16 型高速离心机 2.1 GL63对RBE细胞增殖的影响考察
（长沙英泰仪器有限公司），TC20 型细胞计数仪、xMark 采用 MTT 法进行检测。取 RBE 细胞，以含 10％胎
型酶标仪（美国Bio-Rad公司），AE31型倒置相差显微镜 牛血清的 RPMI 1640 培养基（以下简称“完全培养基”）
及照相系统（德国Motic公司），CKX31型倒置荧光显微 于 5％CO2、37 ℃（以下培养条件相同）的培养箱中培
镜（日本 Olympus 公司），D2060R 型流式细胞仪（美国 养。当培养瓶底部贴壁细胞达90％以上时，用0.25％胰
Beckman Coulter 公司），HH-2 型数显恒温水浴锅（常州 酶消化后进行传代。将对数生长期细胞用培养基调整
5
亿通分析仪器制造有限公司），DYCZ-24DN型垂直电泳 为1×10 个/mL，按100 μL/孔接种于96孔板中，置于培养
仪（北京市六一仪器厂），BOX XR型凝胶成像分析系统 箱中继续培养12 h待细胞贴壁后，弃去培养基。将细胞
（英国 Syngene 公司），FA1004 型电子天平（上海越平科 分组并分别加入含有不同浓度 GL63[终浓度均为 0（空
学仪器有限公司）。 白对照，下同）、1.25、2.5、5、10、20、40 μmol/L；剂量根据
1.2 主要药品和试剂 文献[3－5]及本课题组前期预试验结果设置]的 RPMI
姜黄素原料药（批号 78246，纯度 99.5％）、RPMI 1640培养基（含0.1％二甲基亚砜），每组设3个复孔。培
1640 培养基均购自美国 Sigma 公司；GL63 原料药（纯 养48 h后，每孔加入MTT溶液（5 mg/mL）20 μL，避光继
度＞99.5％）由河北科技大学化学与制药工程学院刘守 续培养 4 h。培养完毕后，用酶标仪于 450 nm 波长下检

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