Page 95 - 《中国药房》2021年第4期

表 3 不同浓度 GL63 对 RBE 细胞中 JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9 蛋白表达水平
的影响（x±±s，n＝3）
Tab 3 Effects of different concentrations of GL63 on the protein expression of JAK2，p-JAK2，STAT3，
p-STAT3，Bcl-2，Bax，MMP-2 and MMP-9 in RBE cells（x±±s，n＝3）
组别 JAK2/GAPDH p-JAK2/GAPDH STAT3/GAPDH p-STAT3/GAPDH Bcl-2/GAPDH Bax/GAPDH MMP-2/GAPDH MMP-9/GAPDH
空白对照组 1.09±0.02 1.24±0.19 0.90±0.01 1.21±0.25 0.64±0.04 0.21±0.05 1.22±0.28 0.50±0.08
5 μmol/L GL63组 1.09±0.01 0.65±0.17 ＊＊ 0.90±0.01 0.84±0.26 ＊＊ 0.46±0.08 ＊＊ 0.34±0.05 ＊＊ 0.64±0.17 ＊＊ 0.23±0.05 ＊＊
10 μmol/L GL63组 1.09±0.01 0.45±0.14 ＊＊ 0.90±0.02 0.48±0.24 ＊＊ 0.35±0.09 ＊＊ 0.45±0.04 ＊＊ 0.49±0.08 ＊＊ 0.19±0.02 ＊＊
20 μmol/L GL63组 1.09±0.01 0.08±0.04 ＊＊ 0.91±0.01 0.17±0.03 ＊＊ 0.18±0.03 ＊＊ 0.52±0.05 ＊＊ 0.25±0.02 ＊＊ 0.17±0.01 ＊＊
＊＊
注：与空白对照组比较， P＜0.01
Note：vs. blank control group， P＜0.01
＊＊
表 4 不同浓度 GL63 对 RBE 细胞中 Cyt-c、Pro-cas- 而促使 Caspase-9 和 Caspase-3 激活而转化为活性状态
pase-9、Cleaved-caspase-9、Pro-caspase-3、Cleaved- （Cleaved-caspases），最终导致细胞凋亡 。线粒体通过
[24]
caspase-3蛋白表达水平的影响（x±±s，n＝3） 激活细胞死亡起始因子 Caspase-9 介导凋亡信号转导，
Tab 4 Effects of different concentrations of GL63 on 激活的 Caspase-9 激活切割执行者 Caspase-3，然后活化
the protein expression of Cyt-c，Pro-caspase-9， 的 Caspase-3 会裂解聚二磷酸腺苷核糖聚合酶，进而导
Cleaved-caspase-9，Pro-caspase-3 and Cleaved- 致细胞凋亡 。本研究显示，GL63 处理可以降低 RBE
[25]
caspase-3 in RBE cells（x±±s，n＝3） 细胞中JAK2和STAT3蛋白磷酸化水平，诱导Bcl-2蛋白
Pro-caspase-9/ Cleaved-caspase-9/ Pro-caspase-3/ Cleaved-caspase-3/ 表达下调和Bax蛋白表达上调；同时，GL63能升高Cyt-c
组别 Cyt-c/GAPDH
GAPDH GAPDH GAPDH GAPDH 表达水平，使 Pro-caspase-9 和 Pro-caspase-3 蛋白表达下
空白对照组 0.26±0.07 0.93±0.07 0.19±0.04 1.10±0.26 0.11±0.03 调、Cleaved-caspase-9 和 Cleaved-caspase-3 蛋白表达上
5 μmol/L GL63组 0.35±0.05 ＊＊ 0.74±0.07 ＊＊ 0.29±0.04 ＊＊ 0.80±0.08 ＊＊ 0.23±0.04 ＊＊
10 μmol/L GL63组 0.44±0.06 ＊＊ 0.56±0.06 ＊＊ 0.38±0.06 ＊＊ 0.51±0.09 ＊＊ 0.28±0.06 ＊＊ 调，提示 Caspase-9 和 Caspase-3 被激活。这也证明，
20 μmol/L GL63组 0.82±0.07 ＊＊ 0.37±0.07 ＊＊ 0.45±0.06 ＊＊ 0.41±0.06 ＊＊ 0.41±0.03 ＊＊ GL63可同时通过线粒体介导的内源性途径来诱导RBE
＊＊
注：与空白对照组比较， P＜0.01 细胞发生凋亡。
＊＊
Note：vs. blank control group， P＜0.01
综上所述，GL63能通过抑制JAK2/STAT3信号通路
时认为，GL63对RBE细胞的增殖具有抑制作用，其机制
来实现对人胆管癌RBE细胞增殖、迁移和侵袭的抑制并
可能是通过抑制JAK2/STAT3信号通路来介导的。 诱导其发生凋亡；其具备成为有效治疗或预防胆管癌的
肿瘤患者预后较差的重要原因是肿瘤细胞发生侵 药物的潜能。
袭和远处转移，所以降低胆管癌细胞的迁移、侵袭能力
参考文献
是预防其转移的有效手段。MMP被公认为是能够在肿
[ 1 ] CARPINO G，CARDINALE V，RENZI A，et al. Activa-
瘤细胞侵袭过程中破坏组织屏障细胞外基质的蛋白内 tion of biliary tree stem cells within peribiliary glands in
切酶 。MMP-2和MMP-9表达水平的升高提示肿瘤细 primary sclerosing cholangitis[J]. J Hepatol，2015，63（5）：
[15]
胞侵袭能力增强 ，因此抑制 MMP 蛋白的表达被认为 1220-1228.
[16]
是预防癌症转移的早期靶点 [17－18] 。本研究通过划痕实 [ 2 ] NAKAGOHRI T，ASANO T，KINOSHITA H，et al. Ag-
验和 Transwell 小室侵袭实验发现，GL63 可以有效地抑 gressive surgical resection for hilar-invasive and periphe-
制RBE细胞迁移和侵袭。与空白对照组比较，经不同浓 ral intrahepatic cholangiocarcinoma[J]. World J Surg，
度 GL63 处理后，RBE 细胞中 MMP-2 和 MMP-9 蛋白的 2003，27（3）：89-93.
表达水平均显著降低，且有随着药物浓度升高而降低的 [ 3 ] ANAND P，KUNNUMAKKARA AB，NEWMAN RA，
趋势。这提示GL63可能通过抑制MMP-2和MMP-9的 et al. Bioavailability of curcumin：problems and promi-
ses[J]. Mol Pharm，2007，4（6）：807-818.
表达从而抑制RBE细胞的迁移和侵袭。
[ 4 ] QIU CY，HU Y，WU K，et al. Synthesis and biological
已有研究表明，不同药物对 JAK2/STAT3 信号通路
evaluation of allylated mono-carbonyl analogues of cur-
[19]
的调节可通过内源性线粒体途径诱导细胞凋亡 。
cumin（MACs）as anti-cancer agents for cholangiocarci-
Bcl-2 蛋白家族是细胞凋亡研究中最重要的癌基因之
noma[J]. Bio Med Lett，2016，26（24）：5971-5976.
一，在线粒体介导的内源性凋亡通路中起着重要的作 [ 5 ] LIANG G，SHAO L，WANG Y，et al. Exploration and syn-
用，其包括抑制凋亡蛋白 Bcl-2 和诱导凋亡蛋白 Bax 两 thesis of curcumin analogues with improved structural sta-
大类 [20－21] 。内源性线粒体途径是在Bcl-2蛋白家族的调 bility both in vitro and in vivo as cytotoxic agents[J].
节下在线粒体水平上启动的 。当外源刺激激活线粒 Bioorg Med Chem，2009，17（6）：2623-2631.
[22]
体中的 Bcl-2 和 Bax 时，线粒体的膜通透性将发生变 [ 6 ] SMIRNOVA OV，OSTROUKHOVA TY，BOGORAD RL.
化 ；随后，线粒体中的 Cyt-c 大量释放到细胞质中，进 JAK/STAT pathway in carcinogenesis：is it relevant to
[23]

中国药房 2021年第32卷第4期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 4 ·473 ·