Page 67 - 《中国药房》2021年第4期
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2 方法与结果                                            数据库进行匹配。结果，供试品溶液在正、负离子模式
        2.1 色谱与质谱条件                                        下均有响应值较高的特征性吸收峰。从3种不同基原八
        2.1.1  色谱条件      以 Zorbax Eclipse-C18 （100 mm×2.1  爪金龙药材中共分离 47 个成分，鉴定出 17 个黄酮类化
        mm，1.8 μm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.1％甲酸水溶液                    合物和10个香豆素类化合物。其中，从朱砂根药材中分
       （B）为流动相进行梯度洗脱（0～2 min，95％B；2～7                      离29个成分，共鉴定出10个黄酮类化合物和7个香豆素
        min，95％B→70％B；7～14 min，70％B→22％B；14～18             类化合物；从百两金药材中分离 27 个成分，共鉴定出 8
        min，22％B→5％B；18～25 min，5％B→95％B），柱温为               个黄酮类化合物和4个香豆素类化合物；从红凉伞药材
        30 ℃，流速为0.3 mL/min，自动进样器温度为4 ℃，进样                  分离30个成分，共鉴定出13个黄酮类化合物和8个香豆
        量为2 μL。                                            素类化合物，结果见表1。
        2.1.2  质谱条件     离子源为ESI，扫描模式为正、负离子                 2.5 黄酮及其苷类化合物的鉴定及裂解规律
        模式，加热器温度为 325 ℃，鞘气压力为 45 arb，辅助气                        据文献报道，八爪金龙药材中黄酮类化学成分含量
                                                                [18]
        压力为 15 arb，吹扫气压力为 1 arb，电喷雾电压为 3.5                 较高 。本研究从朱砂根、百两金、红凉伞药材中共鉴
        kV，毛细管温度为330 ℃，透镜电压为55％；扫描模式为                      定出17个黄酮及其苷类化合物，包括9个黄酮醇类、2个
        一级全扫描（Full scan，m/z 100～1 500）、数据依赖性二              二氢黄酮类、3个黄烷-3-醇类及3个其他类化合物。
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        级质谱扫描（dd-MS ，Top N＝10），分辨率为 70 000（一               2.5.1  黄酮醇及其苷类化合物的裂解规律                  通过对准
                                                                           +
        级质谱）、17 500（二级质谱），碰撞模式为高能量碰撞                       分子离子峰[M+H] 及[M－H] 进行分析发现，苷类化合
                                                                                     －
        解离。                                                物主要在糖苷键处发生断裂，形成失去1个或多个糖的
                                                                                [21]
        2.2 溶液的制备                                          次级苷或苷元碎片离子 ，苷类含有的糖基主要是葡萄
        2.2.1  供试品溶液      取朱砂根、百两金、红凉伞药材鲜                  糖、鼠李糖、芸香糖、甘露糖和半乳糖。在正、负离子模
        品，自然晾干，切片，各取250 g，分别加10倍量（mL/g）水                   式下，共鉴定出9个黄酮醇类成分，分别为槲皮素3-O-鼠
        煎煮 2 h，共 2 次，趁热滤过，合并提取液，浓缩，真空干                     李糖苷 7-O-葡糖苷、杨梅素、芦丁、毛里求斯排草素、山
        燥，得各药材提取物。分别取上述各药材提取物 0.5 g，                       柰酚、槲皮素、异鼠李素、槲皮苷、美恩西汀                [22]  。
        精密称定，置于具塞锥形瓶中，加甲醇20 mL，密塞，称定                           在正离子模式下，该类化合物主要产生了丢失相应
                                                                                                 +
                                                                                +
        质量，超声（功率180 W，频率40 kHz）处理40 min，放冷，                糖基的[M+H－C9H8O3] 、[M+H－C6H10O4] 、[M+H－
                                                                           +
        再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取                          C6H10O4－C6H10O5] 碎片离子。
        续滤液 5 mL，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇定容，摇匀，经                       以保留时间为 6.282 min 的化合物为例，其获得 m/z
                                                                        +
        0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。                             611.160[M+H] 的一级质谱信号，二级质谱出现脱去1分
                                                                                                      +
        2.2.2  对照品溶液      精密称取岩白菜素对照品 10 mg，               子鼠李糖的碎片离子 m/z 465.102[M+H－C6H10O4] 和脱
        置于 10 mL 量瓶中，加甲醇定容，制得质量浓度为 1                       去 1 分 子 芸 香 糖 的 碎 片 离 子 m/z 303.050[M + H －
                                                                   +
        mg/mL 的对照品贮备液。精密量取上述对照品贮备液                         C12H20O9] ，根据“2.3”项下数据库得到分子式 C27H30O16，
        500 μL，置于10 mL量瓶中，加甲醇定容，即得。                        再结合文献[23]，推测该化合物为芦丁。
        2.3  化学结构数据库建立                                         以保留时间为 6.707 min 的化合物为例，其获得 m/z
                                                                        +
            一级质谱数据参考 ChemSpider 化学结构与文献数                   317.065[M+H] 的一级质谱信号，二级质谱出现 m/z
                                                                                                  +
                                                                             +
        据库（http：//www.chemspider.com/），二级质谱数据参考            302.042[M+H－CH3] 、153.018[M+H－C9H8O3] 的碎片离
        mzCloud（https：//www.mzcloud.org/）、mzVault（https：//  子峰，根据“2.3”项下数据库得到分子式C16H12O7，再结合
        www.mzcloud.org/）等未知物鉴定的新型数据库，结合                   文献[24]，推测该化合物为异鼠李素。
        PubChem 数据库（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）与        以保留时间为 6.514 min 的化合物为例，其获得 m/z
                                                                        +
        国内外相关文献       [12－20] ，构建八爪金龙的化学结构数据库              287.055[M+H] 的一级质谱信号，二级质谱出现 m/z
       （可能含有的化学成分及其代谢物），主要包括中英文名                           153.018[C8H8O3] 、137.023[C8H8O2] 、121.029[M + H －
                                                                                          +
                                                                         +
                                                                       +
        称、分子式、相对分子量、结构式、分子离子以及合理的                          CO－C8H10O2] 的碎片离子峰，根据“2.3”项下数据库得
        碎片离子、理论上精确的同位素质量和美国化学文摘服                           到分子式 C15H10O6，再结合文献[25]，推测该化合物为山
        务社为化学物质制定的登记号（CAS）等信息。                             柰酚。
        2.4 八爪金龙药材中黄酮类、香豆素类化合物分析                               以保留时间为 6.513 min 的化合物为例，其获得 m/z
                                                                        +
            取“2.2.1”项下3种供试品溶液各适量，按“2.1”项下                  741.223[M+H] 的一级质谱信号，二级质谱出现依次脱
        色谱与质谱条件进样分析，得3种不同基原八爪金龙的                           去 3 分 子 糖 基 的 碎 片 离 子 峰 m/z 595.166[M + H －
                                                                  +
                                                                                                  +
        总离子流图（见图1）。根据得到的质谱信息、精确质量、                         C 6H 10O 4] 、449.108[M+H－C 6H 10O 4－C 6H 10O 4] 、287.055
                                                                                          +
        碎片离子和保留时间，同时与“2.3”项下所建的化学结构                        [M+H－C6H10O4－C6H10O4－C9H8O3] ，根据“2.3”项下数
        中国药房    2021年第32卷第4期                                               China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 4  ·445 ·
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