Page 32 - 《中国药房》2021年3期

3.4 TFDM 对 MIRI 模型大鼠心肌组织中 AMPK 蛋白 生物能量代谢的核心分子，可参与多种代谢的调节过
磷酸化及SIRT1、PGC-1α 蛋白表达的影响 程 [3，16] 。相关研究显示，心肌缺血再灌注后大鼠心肌组
与假手术组比较，模型组大鼠心肌组织中AMPK蛋 织明显受损，细胞处于缺血缺氧的应激状态，氧供缺乏，
白的磷酸化水平显著升高（P＜0.01），SIRT1、PGC-1α蛋 导致体内 ATP 生成不足、AMP 含量增加，从而使 AMPK
[17]
白表达水平均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；与模型组 被磷酸化激活 。活化的AMPK（即p-AMPK）可作用于
比较，TFDM组大鼠心肌组织中AMPK蛋白的磷酸化水 多种下游底物，抑制 ATP 的消耗，并启动生成 ATP 的途
平和 SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平均显著升高（P＜ 径以维持机体能量代谢平衡，增加细胞内NAD 的含量，
+
+
0.01）；与 TFDM 组 比 较 ，Compound C + TFDM 组 和 继而使依赖NAD 的SIRT1被激活而发挥其相应生物学
[18]
EX-527+TFDM组大鼠心肌组织中AMPK蛋白的磷酸化 效应 。AMPK和SIRT1分别可以通过磷酸化和去乙酰
水平和 SIRT1、PGC-1α 蛋白表达水平均显著降低（P＜ 化作用调控PGC-1α的表达；而PGC-1α可调节抗氧化酶
+
0.05 或 P＜0.01）。 各 组 大 鼠 心 肌 组 织 中 p-AMPK、 的活性，减少MDA 及活性氧（ROS）的含量，发挥抗氧化
AMPK、SIRT1、PGC-1 α 蛋 白 表 达 的 电 泳 图 见 图 2， 应激作用，从而保护心肌缺血性损伤 [19－21] 。
AMPK蛋白磷酸化水平及SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平 本研究结果显示，模型组大鼠心肌组织明显受损，
测定结果见表4。 病理形态学方面主要表现为心肌纤维排列紊乱、横向条
纹消失，细胞肿胀破裂、坏死，细胞核变形移位，表明
p-AMPK 62 kDa
MIRI 模型造模成功；而 TFDM 组大鼠心肌组织的上述
症状明显改善，且 TFDM 能明显提高大鼠心肌组织中
AMPK 62 kDa
ATP、NAD 的含量，降低ADP、AMP的含量，表明TFDM
+
SIRT1 110 kDa 可通过改善缺血心肌细胞ATP的能量代谢，从而保护受
损心肌。在心肌缺血缺氧时，AMPK 作为“细胞能量感
PGC-1α 91 kDa
[18]
应器”，可被迅速磷酸化从而发挥其调节作用 。本研
GAPDH 36 kDa 究发现，模型组大鼠心肌组织中AMPK mRNA的表达水
假手术组 模型组 TFDM组 Compound EX-527+ 平显著降低、AMPK 蛋白的磷酸化水平显著升高，这可
C+TFDM组 TFDM组
图2 各组大鼠心肌组织中p-AMPK、AMPK、SIRT1和 能是机体代偿性地产生了 p-AMPK，以维持能量稳定、
PGC-1α蛋白表达的电泳图 减少损伤；此外，SIRT1、PGC-1α mRNA及其蛋白的表达
Fig 2 Electrophoretograms of protein expression of 水平均显著下降，表明SIRT1、PGC-1α参与了MIRI模型
p-AMPK，AMPK，SIRT1 and PGC-1α in myo- 大鼠心肌损伤的过程。而与模型组比较，TFDM组大鼠
cardial tissue of rats in each group 心肌组织中AMPK mRNA表达水平、AMPK蛋白的磷酸
化水平进一步升高，同时 SIRT1、PGC-1α mRNA 及其蛋
表 4 各组大鼠心肌组织中 AMPK 蛋白磷酸化水平以
白表达水平也均显著升高，这说明TFDM可激活AMPK
及SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平测定结果（x±±s，
通路，并上调SIRT1、PGC-1α mRNA及其蛋白的表达。
n＝10）
另外，本研究进一步发现，给予抑制剂Compound C
Tab 4 Phosphorylation levels of AMPK protein and
和 EX-527 后，可显著逆转 TFDM 对上述指标的调节作
the protein expressions of SIRT1 and PGC-1α
用。Compound C 是 AMPK 的抑制剂，有学者在前期动
in myocardial tissue of rats in each group（x±±
物实验和细胞试验中已验证过其安全性和有效性，有一
s，n＝10）
定研究基础 ；EX-527 是 SIRT1 的抑制剂，其不影响细
[15]
组别 p-AMPK/AMPK SIRT1/GAPDH PGC-1α/GAPDH 胞生长、细胞活力和p53调控的基因的表达，对SIRT1具
假手术组 0.97±0.14 0.65±0.13 0.95±0.06
[20]
模型组 1.41±0.17 ＊＊ 0.37±0.05 ＊＊ 0.78±0.07 ＊ 有较高的选择性 。本研究采用这2个通路抑制剂分别
TFDM组 1.99±0.20 ## 0.92±0.06 ## 1.01±0.07 ## 进行处理，首先能够更加明确、直观地反映 TFDM 对
Compound C+TFDM组 1.25±0.11 ΔΔ 0.36±0.06 ΔΔ 0.77±0.13 ΔΔ AMPK/SIRT1/PGC-1α信号转导通路的影响；其次是预
EX-527+TFDM组 1.16±0.16 ΔΔ 0.77±0.06 Δ 0.56±0.08 ΔΔ
测AMPK和SIRT1在对PGC-1α活性的调节中谁占据主
＊
##
＊＊
注：与假手术组比较，P＜0.05， P＜0.01；与模型组比较，P＜
0.01；与TFDM组比较，P＜0.05，P＜0.01 导作用。本研究结果提示AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通
Δ
ΔΔ
＊
Note：vs. sham operation group， P＜0.05， P＜0.01；vs. model 路参与了 TFDM 给药后对 MIRI 模型大鼠的保护作用，
＊ ＊
group，P＜0.01；vs. TFDM group，P＜0.05，P＜0.01 但 AMPK 和 SIRT1 在此作用机制中谁占主导位置尚未
##
ΔΔ
Δ
4 讨论 得得到明确结论。
AMPK 属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是一种调节 综上所述，TFDM 在 MIRI 过程中可以激活 AMPK/
·282 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 3 中国药房 2021年第32卷第3期