Page 78 - 《中国药房》2021年第1期
P. 78

肺损伤的保护作用并探讨其可能机制，以期为临床治疗                            拉板，使大鼠吸入烟雾致伤 5 min；关闭开槽式拉板，取
        提供实验依据和新思路。                                         出大鼠置于空气流通处 5 min，当其呼吸和心率接近致
        1 材料                                                伤前水平后再次同法致伤，共重复操作3次，整个致伤过
        1.1 仪器                                              程约持续 30 min。A 组大鼠除不放松木屑外，其余步骤
            MHY-27127型烟雾发生器（北京美华仪科技有限公                      操作与上述致伤组别相同。
        司）；ABL-800 型血气分析仪（丹麦 Radiometer 公司）；                    参考相关文献      [8-10] ，将 D、E 组大鼠的给药剂量分别
        PARI Turbo BOY N 型系列雾化机（德国 PARI GmbH 公              设定为 9、18 mg/kg；参考相关文献        [9-10] ，腹腔注射依达拉
        司）；ELX800UV型酶标检测仪（美国BioTek公司）；Cen-                  奉 9 mg/kg 效果明显且具有剂量依赖性，故 C 组选择高
        trifuge5702 型离心机（德国 Eppendorf 公司）；CK40 型光           剂量 18 mg/kg。造模后 30 min，C 组大鼠腹腔注射依达
        学显微镜（日本 Olympus 公司）；KD-BM 型生物组织包                    拉奉 18 mg/kg，每间隔 70 min 重复 1 次，共 4 次；D、E 组

        埋机（浙江金迪科迪仪器设备有限公司）；RM2235 型石                        大鼠于自制密闭玻璃箱中分别用雾化机以 0.1 mL/min
        蜡切片机（德国Leica公司）。                                    雾化吸入依达拉奉 9、18 mg/kg（即将依达拉奉 1.8、3.6
        1.2 药品与试剂                                           mg分别溶于生理盐水1 mL中制成吸入用药液）10 min，

            依达拉奉原料药[双鹤药业（商丘）有限责任公司，                         每间隔60 min重复1次，共4次；A、B组大鼠不作任何处
        批号：19042011，纯度：99.7％]；苏木精-伊红（HE）染色液                 理。模型制作及给药过程中无大鼠死亡等意外情况
        （安徽雷根生物技术有限公司，批号：20191010）；免疫染                      发生。
        色强力通透液、脱氧核糖核苷酸末端转移酶反应液（北                            2.2 标本采集
        京 百 奥 莱 博 科 技 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 20191008、              各组大鼠末次给药后6 h，用血气针抽取颈动脉血1
        20191011）；大鼠白细胞介素6（IL-6）、IL-10、肿瘤坏死因                mL，用于血气分析；于大鼠正中线剖开胸腹部，取腹主
        子α（TNF-α）、胱天蛋白酶3（Caspase-3）酶联免疫吸附测                  动脉血约5 mL，以3 000 r/min离心15 min后，分离血清，
        定（ELISA）试 剂 盒（美 国 R&D 公 司 ，批 号 分 别 为                于－20 ℃冷冻保存，用于 TNF-α、IL-6、IL-10 含量的检
        20180505、20180308、20180401、20180305）；大鼠丙二醛          测；取血后，处死大鼠，迅速取出肺脏，选取左肺组织，
        （MDA）、髓 过 氧 化 物 酶（MPO）、超 氧 化 物 歧 化 酶                于－70 ℃冷冻保存，用于 MDA、MPO、SOD、Caspase-3
        （SOD）、考马斯亮蓝蛋白检测试剂盒（南京建成生物工                          含量的检测；选取右肺后叶组织，置于4％甲醛溶液中固
        程研究所，批号分别为 20171213、20171214、20171212、              定 24 h，用于病理检查和凋亡率检测；选取右肺前叶及
        20171224）；TUNEL 检测阳性对照制备试剂盒（南京凯                     中叶组织适量，用于肺湿干比（W/D）及肺组织含水率的
        基 生 物 科 技 发 展 有 限 公 司 科 技 发 展 公 司 ，批 号 ：            检测。
        20171020）；其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。                          2.3  指标检测
        1.3  动物                                             2.3.1  血气分析和W/D、肺组织含水率检测               取颈动脉
            清洁级雄性SD大鼠，60日龄，体质量约200 g，由中                     血样本，于取样后30 min内使用血气分析仪进行血气分
        国食品药品检定研究院提供，动物生产许可证号：SCXK                          析，并计算动脉氧合指数[即动脉氧分压和吸入氧浓度
        （京）2017-0005。所有大鼠均饲养于室温22～25 ℃的环                    比值（PaO2/FiO2 ）]。取右肺前叶及中叶组织适量，用滤
        境下，并自由饮食、饮水。适应性喂养1周后，进行后续                           纸拭干表面血渍和污物，称定湿质量，随后于80 ℃烘烤
        实验，并于实验前12 h禁食、自由饮水。                                48 h，再称定干质量，计算 W/D 和肺组织含水率：W/D＝
        2 方法                                                肺湿质量/肺干质量，肺组织含水率＝（肺湿质量－肺干
        2.1 分组、造模与给药                                        质量）/肺湿质量×100％。
            取大鼠 30 只，采用随机数字表法随机分为 5 组，即                     2.3.2  血清中 IL-6、IL-10、TNF-α含量检测        取血清标
        正常对照组（A组）、致伤空白组（B组）、致伤腹腔注射治                         本，采用双抗体夹心 ELISA 法以酶标仪于 450 nm 波长
        疗组（C组）和致伤低、高剂量雾化吸入治疗组（D、E组），                        处检测各组大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10含量，严格按
        每组6只。按如下步骤制作烟雾吸入性肺损伤模型：提                            照各试剂盒说明书操作。
        前在烟雾发生器内放入松木屑，打开电源，发烟15 min，                        2.3.3  肺组织中 MDA、MPO、SOD、Caspase-3 含量检
        打开致伤室进气口阀门和风扇，当报警器报警后关闭阀                            测   取左肺组织适量，用滤纸拭干表面血渍和污物，剪
        门；B、C、D、E 组大鼠腹腔注射盐酸氯胺酮（100 mg/kg）                   碎并充分研磨，按质量体积比 1 ∶ 9 的比例加入 4 ℃生理
        进行麻醉后，放入致伤室下层，打开致伤室中间开槽式                            盐水，制备组织匀浆。取匀浆液适量，以考马斯亮蓝蛋


        ·72 ·   China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 1                                    中国药房    2021年第32卷第1期
   73   74   75   76   77   78   79   80   81   82   83