Page 53 - 《中国药房》2021年第1期
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含量的主要因素进行分析，为该药材资源的后续研究和                           波长处测定各对照品溶液的吸光度。以齐墩果酸的质
        开发利用奠定基础。                                          量浓度（y，μg/mL）为纵坐标、吸光度（x）为横坐标进行
        1 材料                                               线 性回归，得回归方程为 y＝0.020 3x+0.000 1（R ＝
                                                                                                         2
        1.1 仪器                                             0.999 7）。结果表明，齐墩果酸的质量浓度在 4.00～
            Evolution 300型紫外-可见分光光度计[赛默飞世尔                 24.00 μg/mL内与吸光度呈良好的线性关系。
        科技（中国）有限公司]；OSB-2200 型旋转蒸发仪（日本                     2.3.2  精密度试验       精密吸取对照品贮备液 0.50 mL，
        EYELA 株式会社）；BT 25S 型电子分析天平（d＝0.01                  置于 25 mL 量瓶中，按“2.3.1”项下方法操作，在 546 nm
        mg，德国 Sartorius 公司）；XMTD-6000 型三用电热恒温              波长处连续测定 6 次吸光度。结果，吸光度的 RSD＝
        水箱（北京市长风仪器仪表公司）。                                   0.08％（n＝6），表明仪器精密度良好。
        1.2 药品与试剂                                          2.3.3  稳定性试验       精密吸取“2.2.2”项下同一供试品
            山茱萸全叶采自河南省南阳市西峡县山茱萸 GAP                        溶液0.10 mL，按“2.3.1”项下方法“以空气泵吹干……精
        种植基地，经河南中医药大学董诚明教授鉴定为真品，                           密加入乙酸乙酯16.00 mL，摇匀”步骤操作，室温条件下
        晒干后于阴凉干燥处保存，备用；齐墩果酸对照品（成都                          分别于显色后 0、30、60、90、120、150 min 时，在 546 nm
        曼思特生物科技有限公司，批号：MUST-12041606，纯                     波长处测定吸光度。结果，吸光度的 RSD＝0.96％（n＝
        度：≥98％）；95％医用乙醇（卫辉市众诚消毒制剂有限                        6），表明供试品溶液在制备后室温放置 150 min 内稳定
        公司）；香草醛（分析纯，天津市光复精细化工研究所）；                         性良好。
        冰醋酸（分析纯，天津大茂化学试剂厂）；高氯酸（分析                          2.3.4  重复性试验       精密称取山茱萸叶粗粉 5.0 g，共 6
        纯，天津政成化学制品有限公司）；甲醇（色谱纯，天津四                         份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1”
        友精细化学品有限公司）；乙酸乙酯（分析纯，天津富宇                          项下方法“以空气泵吹干……精密加入乙酸乙酯 16.00
        精细化工有限公司）；水为蒸馏水。                                   mL，摇匀”步骤操作，显色后立即在 546 nm 波长处测定
        2 方法与结果                                            吸光度，根据标准曲线法计算总三萜含量。结果，含量
        2.1  总三萜含量测定方法的确定                                  的RSD＝0.66％（n＝6），表明该方法重复性良好。
            根据 2020 年版《中国药典》（一部）中三萜含量测定                    2.3.5 加样回收率试验 精密吸取“2.3.4”项下制备的供
                                             [14]
                            [1]
        的方法与对照品的选择 ，并结合相关文献 ，确定本研                          试品溶液（总三萜质量浓度分别为 1 407.34、1 412.72、
        究以齐墩果酸为对照品，采用紫外-可见分光光度法在                           1 414.64、1 420.88、1 422.34、1 427.76 μ g/mL）各 0.10
        546 nm波长处测定山茱萸叶中总三萜的含量。                            mL，分置于 6 个 25 mL 量瓶中，分别加入对照品贮备液
        2.2  溶液的制备                                         各0.20 mL，按“2.3.1”项下方法操作，测定并计算加样回
        2.2.1  对照品贮备液的制备           精密称取齐墩果酸对照              收率。结果，平均加样回收率为 98.8％，RSD＝0.69％
        品 20.00 mg，置于 25 mL 量瓶中，用甲醇溶解并定容，得                 （n＝6），表明该方法准确度良好。
        到质量浓度为800.00 μg/mL的齐墩果酸对照品贮备液。                     2.4  山茱萸叶总三萜含量的测定
        2.2.2  供试品溶液的制备          取山茱萸叶，粉碎，称取粗                  精密吸取供试品溶液 0.20 mL 至 25 mL 量瓶中，按
        粉 5.00 g，置于 500 mL 圆底烧瓶中，加入 70％乙醇 200             “2.3.1”项下方法“以空气泵吹干……精密加入乙酸乙酯
        mL，静置10 min使其充分溶胀。待溶胀完全后，将圆底                       16.00 mL，摇匀”步骤操作，作为待测样品溶液。以相应
        烧瓶置于500 mL加热套中，加热至沸腾，加热回流提取                        试剂为空白，在546 nm波长处测定待测样品溶液的吸光
        30 min。提取完毕后将提取液静置、冷却、过滤除杂。滤                       度，并根据标准曲线法计算山茱萸叶总三萜的含量。
        液以水浴浓缩干燥并用 70％乙醇分散后转移至 50 mL                       2.5 单因素试验初步筛选总三萜提取工艺
        量瓶中，定容，得到供试品溶液。                                        结合文献方法       [16-18] 初步筛选影响总三萜含量的因
        2.3 方法学考察                                          素，发现乙醇体积分数、液料比、提取时间、提取次数等4
        2.3.1  标准曲线的绘制         分别吸取齐墩果酸对照品贮                个因素对总三萜含量影响较大，故以总三萜含量为指
        备液 0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60 mL 至 25 mL 量瓶     标，以乙醇体积分数（30％、50％、70％、90％）、液料
        中，以空气泵吹干，放冷；精密加入 5.0％香草醛-冰醋酸                       比[10 ∶ 1、20 ∶ 1、30 ∶ 1、40 ∶ 1（mL/g）]、提取时间（30、60、
        溶液（现用现配）0.80 mL、高氯酸3.20 mL，摇匀，70 ℃水                90、120 min）、提取次数（1、2、3、4 次）为因素，在固定其
        浴加热15 min后再于冰水浴中静置5 min；取出，精密加                     余3个因素的条件下进行单因素试验，以确定各因素的
        入乙酸乙酯16.00 mL，摇匀，得到质量浓度分别为4.00、                    优化区间，详见图1。
        8.00、12.00、16.00、20.00、24.00 μg/mL 的系列齐墩果酸         2.5.1  乙醇体积分数的影响           从图 1A 可以看出，随着
        对照品溶液。以相应试剂为空白，照 2020 年版《中国药                       乙醇体积分数的增加，山茱萸叶总三萜含量先上升后下
        典》（四部）通则0401紫外-可见分光光度法 ，在546 nm                    降，在乙醇体积分数达到 70％时，山茱萸叶总三萜含量
                                            [15]

        中国药房    2021年第32卷第1期                                                China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 1  ·47 ·
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