Page 36 - 《中国药房》2021年第1期
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发现柴胡桂枝汤在现代临床可用于治疗呼吸系统类、神                            2 方法
        经系统类、消化系统类和运动系统类等疾病，如其在感                            2.1 柴胡桂枝汤挥发油的提取
                 [3]
          [2]
                         [4]
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        冒 、失眠 、抑郁症 、功能性消化不良 、颈椎病 等的                             取柴胡桂枝汤处方 10 倍量的药材，粉碎后过三号
        治疗中具有独特优势。另有报道发现，柴胡桂枝汤中桂                            筛，加入 8 倍质量水，按 2015 年版《中国药典》（四部）通
        枝的挥发性成分桂皮醛联合热疗，可通过调控活性氧和                            则 2204 挥发油测定法中甲法          [10] 提取该复方中的挥发
        丝裂原活化蛋白激酶家族来诱导非小细胞肺癌A549细                           油。加热回流提取 8 h 后，冷却，收集挥发油，经无水硫
                 [7]
        胞的凋亡 ；生姜中的8-姜辣素可通过表皮生长因子/信                          酸钠干燥后，称质量并计算其得率（挥发油质量/药材总
        号转导与转录活化因子/细胞外调节蛋白激酶通路来调                            质量×100％）为1.12％。
                                   [8]
        节结直肠癌细胞的增殖和迁移 ，而生姜中的 6-姜辣素                          2.2 溶液的制备
        可通过诱导细胞周期阻滞、活性氧的产生和线粒体膜电                            2.2.1  挥发油样品溶液        取挥发油样品适量，用三氯甲
                                               [9]
        位的破坏从而促进人胃癌（AGS）细胞的凋亡 。由此可                          烷稀释成质量浓度为65 g/L的溶液（以挥发油质量计），
        见，柴胡桂枝汤挥发油的单一成分具有一定的抗癌药                             作为样品溶液，待GC-MS进样分析。
        效。那么，柴胡桂枝汤挥发油是否具有体外抗癌作用值                            2.2.2  正构烷烃 C8～C36标准品溶液          取正构烷烃标准
        得探究，加之目前针对柴胡桂枝汤挥发油组成的基础研                            品 C8～C36适量，加三氯甲烷稀释成 5 mg/L 的标准品溶
        究较少，故本研究采用气相色谱-质谱法（GC-MS）对柴                         液，待GC-MS进样分析。
        胡桂枝汤挥发油的成分进行分析，结合 Kováts 指数（KI                      2.2.3  体外增殖试验挥发油母液            取挥发油样品适量，
        值）对挥发油组分进行准确定性，为柴胡桂枝汤挥发油                            用 DMSO 稀释，制备成质量浓度为 35 g/L（以挥发油质
        组成成分的研究提供基础数据，同时评价该挥发油对人                            量计）的溶液，作为体外抗增殖试验的母液。
        肺腺癌 A549 细胞体外增殖的抑制作用，旨在为柴胡桂                         2.3  柴胡桂枝汤挥发油的GC-MS分析
        枝汤的进一步开发利用提供参考。                                     2.3.1 GC 条件    石英毛细管色谱柱：Agilent HP-5 MS
        1 材料                                               （250 μ m × 0.25 μ m，30 m）；载 气 ：氦 气（纯 度 为
        1.1  仪器                                             99.999％）：载气流速：1.0 mL/min；载气压力：7.652 2
            7000B 型三重四极杆 GC-MS 联用仪（美国 Agilent               psi；隔膜吹扫速率：1 mL/min；进样口温度：250 ℃；升温
        公司）；AE240 型十万分之一电子天平（瑞士 Mettler To-                 程序：初始温度100 ℃并保持10 min，以2 ℃/min速率升
        ledo 公司）；立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械                         至 150 ℃并保持 15 min，再以 2 ℃/min 速率升至 280 ℃
        厂）；热电 Thermo MK3 酶标仪（上海赛默飞生物有限公                     并保持 18 min；进样量：1.0 μL；分流比：20 ∶ 1；溶剂延迟
        司）；HF90型CO2恒温培养箱（上海力申科学仪器有限公                        时间：3 min。
        司）。                                                 2.3.2 MS 条件     离子源：电子轰击源（EI）；离子源温
        1.2  药品与试剂                                          度：230 ℃；电离能量：70 eV；传输线温度：280 ℃；扫描
            柴胡（批号：17090609）、桂枝（批号：17092603）、黄               范围：质荷比（m/z）35～1 000。
        芩（批号：17041516）、甘草（批号：17082005）、生姜（批                 2.3.3  样品分析     在全扫描（SCAN）检测模式下，分别
        号：17030803）、人参（批号：17031503）、大枣（批号：                  取“2.2.1”项下挥发油样品溶液和“2.2.2”项下正构烷烃
        17052411）、半 夏（批 号 ：17071501）、白 芍（批 号 ：              C8～C36 标准品溶液，按“2.3.1”“2.3.2”项下条件进样分
        17072801）等饮片均购自山东省中医院，由山东中医药                        析，记录总离子流图。根据 Vanden Dool 和 Kratz 线性
        大学药学院李峰教授鉴定均符合 2015 年版《中国药典》                        程序升温的KI原理，利用公式求得各成分的KI值[KI＝
        （一部）标准；注射用顺铂（山东齐鲁制药有限公司，批                           100n+100（tx－tn ）/（tn+1－tn ），式中n为碳原子数，tx为被分
        号：H37021358，规格：20 mg）；正构烷烃混合标准品C8～                  析组分 x 的保留时间，tn、tn+1分别为碳原子数为 n 和 n+1
        C36 （美国 Sigma-Aidrich 公司，批号：11521014，纯度：≥           的正构烷烃标准品的保留时间]，并与NIST 11质谱库中
        98％）；MTT 试剂（江苏凯基生物技术有限公司，批号：                        检索得到的KI值进行比对，从而对挥发油成分进行定性
        14069927）；胎牛血清（FBS，美国 HyClone 公司，批号：                分析，最后通过峰面积归一化法计算各组分的相对
        LT22906）；DMEM 高糖培养基（美国 Gibco 公司，批号：                 含量。
        8118192）；二甲基亚砜（DMSO，北京索莱宝科技有限公                      2.4  柴胡桂枝汤挥发油对A549细胞体外增殖的抑制作
        司，批号：6768521）；其余试剂均为分析纯，水为自制双                       用考察
                                                                                                      4
        蒸水。                                                     将处于对数生长期的A549细胞制备成5×10 个/mL
        1.3  细胞                                             的单细胞悬液，以 100 μL/孔接种于 96 孔培养板中（取 2
            人肺腺癌细胞株A549购自山东省中医院。                            块培养板，分别用来考察顺铂和柴胡桂枝汤挥发油的体


        ·30 ·   China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 1                                    中国药房    2021年第32卷第1期
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