Page 32 - 《中国药房》2021年第1期

2.4 血清和肝组织生化指标检测 2.6 统计学方法
取血清样品和冻存的肝组织样品各适量，按照试剂 采用 GraphPad Prism 5.0 软件对数据进行统计分
盒方法（酶法）以酶标仪检测各组小鼠血清中AST、ALT 析。所有数据均以 x±s 表示，组间比较采用非配对 t 检
水平以及血清和肝组织中 TC、TG 水平，严格按照相应 验。P＜0.05表示差异有统计学意义。
试剂盒说明书操作。 3 结果
2.5 肝组织中 NF-κB p65、TNF-α、IL-6 蛋白表达情况 3.1 雷公藤红素对小鼠肝脏形态及肝组织病理学变化
的检测 的影响
采用 Western blotting 法检测。取冻存的肝组织适 正常对照组小鼠肝脏表面光滑，鲜红，有光泽；HE
量，加入适量蛋白裂解液和蛋白酶抑制剂，超声（频率： 染色显示，肝细胞排列整齐且形态正常；油红 O 染色未
20 kHz，功率：750 W）10 s破碎，冰浴裂解0.5 h，以1 000 见脂滴聚集。模型组小鼠肝脏体积明显缩小，表面粗
r/min 离心 8 min，取上清液，用 BCA 蛋白定量试剂盒测 糙，颜色泛黄，无光泽，缀有褐色斑点；HE 染色显示，其
定蛋白含量。取蛋白于95 ℃加热变性5 min，取变性后 肝组织中可见炎性细胞浸润，同时可见许多大的脂肪空
的蛋白样品120 μg行SDS-PAGE后，转移至PVDF膜上， 泡聚集，脂肪化严重；油红O染色显示，其肝组织中有大
用 5％脱脂牛奶封闭 1 h；分别加入 NF-κB p65、TNF-α、 量脂滴聚集。与模型组比较，经雷公藤红素预处理后，
IL-6 一抗（稀释度均为 1 ∶ 1 000），于 4℃孵育过夜；用 各药物组小鼠肝脏表面光滑、红润，无褐色斑点；HE 染
TBST溶液清洗8 min×3次，加入二抗（稀释度为1∶3 000） 色显示，其肝组织炎性细胞浸润和脂肪空泡均有所减
和 GAPDH 抗体（稀释度为 1 ∶ 8 000），室温孵育 1 h；用 少或缩小；油红 O 染色显示，其肝组织中脂滴覆盖面积
TBST溶液清洗8 min×3次，经ECL化学发光液显色后， 有所缩小，详见图1。
于成像分析系统上成像并使用 Image J 1.8.0 软件分析。 3.2 雷公藤红素对小鼠血清AST、ALT水平的影响
以目标蛋白与内参（GAPDH）条带的灰度值比值作为目 与正常对照组比较，模型组小鼠血清中 AST、ALT
标蛋白的表达水平。上述操作重复3～5次。 水平均显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，各药物组小

正常对照组 模型组 雷公藤红素低剂量组 雷公藤红素高剂量组
A. 肝脏形态

正常对照组 模型组 雷公藤红素低剂量组 雷公藤红素高剂量组
B. HE染色显微图（×100）

正常对照组 模型组 雷公藤红素低剂量组 雷公藤红素高剂量组
C. 油红O染色显微图（×200）
图1 雷公藤红素对小鼠肝脏形态及肝组织病理学变化的影响
Fig 1 Effects of celastrol on morphology and pathological changes of liver tissue in mice

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