Page 50 - 《中国药房》2020年第24期

was used to detect the number of 53BP1 foci in cells after appropriare time of intervention following radiation；the number of
53BP1 foci were compared among different time points（0.5，2，12，24 h）. RESULTS：Compared with blank group，OD values of
BMSCs were decreased significantly in radiation group（P＜0.05 or P＜0.01）. Compared with radiation group，the OD values of
BMSCs were significantly increased when 50 μ g/mL astragalus polysaccharide，astragalus saponin and astragalus flavonoids
continuously intervened radiation for 2-3 days，there was significant difference in other groups at some time point（P＜0.05 or P＜
0.01）. After consideration，drug concentration was determined to be 50 μg/mL，and the continuous intervention time was 2 days
after radiation. Compared with blank group，the micronucleus cell rate and cell micronucleus rate of radiation group，astragalus
polysaccharide group，astragalus saponin group and astragalus flavonoids group increased significantly，and the number of 53BP1
focus cluster in radiation group and astragalus polysaccharide group increased significantly（P＜0.01）. Compared with radiation
group and astragalus flavonoids group，the micronucleus cell rate，cell micronucleus rate and the number of 53BP1 focus cluster
（continued intervention for 0.5，2，12 h）in the astragalus polysaccharide group and astragalus saponin group were significantly
reduced，and the micronucleus cell rate and cell micronucleus rate in the astragalus polysaccharide group were significantly lower
than astragalus saponin group （P＜0.05）. 53BP1 focus cluster could not be detected 24 h later （P＜0.05）. CONCLUSIONS：
Astragalus polysaccharide and astragalus saponin both have protective effects on BMSCs DNA damage induced by radiation，and
the protective effect of astragalus polysaccharide is better than that of astragalus saponin；astragalus flavonoids has no protective
effect on radiation-induced DNA damage.
KEYWORDS Astragalus polysaccharide； Astragalus flavonoids； Astragalus saponin； Ionizing radiation； Bone marrow
mesenchymal stem cells；DNA damage

放疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一，放疗在杀伤 BX51TRF 型荧光显微镜（日本 Olympus 公司）；SKY-
肿瘤组织的同时，不可避免地会对正常组织造成损伤， 111Z型超净工作台（苏州净化设备有限公司）。
产生放疗毒性 [1-2] 。已有研究表明，电离辐射（Ionizing 1.2 药品与试剂
radiation，IR）可通过多种机制破坏细胞，其中最重要的 黄芪多糖、黄芪皂苷、黄芪黄酮（上海源叶生物科技
是造成细胞DNA损伤，当损伤无法修复时，则可引发细 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 ZD1219LA18、B20563、
[3]
胞癌变 。骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchy- J20F7T9819，均为混合物）；0.25％胰蛋白酶（美国 Hy-
mal stem cells，BMSCs）是具有自我更新和多向分化潜 clone 公司，批号：J150037）；CCK-8 试剂盒（上海东仁化
能的细胞，参与多种组织的修复。当辐射肿瘤组织时， 学科技有限公司，批号：JQ878）；4′，6-二脒基-2-苯基吲
该组织周围会聚集大量的BMSCs；受辐射影响，BMSCs 哚（DAPI，上海浩然生物技术有限公司，批号：H-1200）；
可引发多种生物学反应，包括活性氧（ROS）生成、细胞 兔源p53结合蛋白1（53BP1）多克隆抗体、山羊抗兔免疫
[4]
凋亡和增殖抑制等，甚至会发生BMSCs恶性转化 。研 球蛋白 G（IgG）（DyLight 594）二抗（美国 Abcam 公司，
®
究表明，IR 会诱导 BMSCs DNA 损伤，其中细胞凋亡、 批号分别为 GR89172-5、G1101）；细胞松弛素 B 和吖啶
细胞周期紊乱、衰老和细胞因子分泌等分子机制均可 橙染料（北京索莱宝科技有限公司，批号分别为C8080、
影 响 BMSCs 的辐射反应 ，因此，防护 IR 致 BMSCs A8120）、Triton-X 100试剂（上海生工生物工程股份有限
[5]
DNA损伤至关重要。中医认为，辐射可导致机体耗气伤 公司，批号：0694）；卡诺固定液（实验室自制）；其余试剂
阴，而运用补气类中药黄芪可有效改善辐射导致的细胞 均为实验室常用规格，水为超纯水。
损伤 。黄芪最主要的活性成分为黄芪多糖、黄芪皂苷 1.3 细胞
[6]
和黄芪黄酮，研究表明其具有增强机体免疫、抗应激、抗 人源 BMSCs（批号：7500）及其专用培养基（批号：
[7]
肿瘤、延缓衰老、抗辐射等多种药理作用 ，但目前尚不 0074）均购自美国ScienCel公司。
明确何种成分可以有效改善IR所造成的DNA损伤。基 2 方法
于此，本研究拟着重比较黄芪的3种主要活性成分黄芪 2.1 细胞培养
多糖、黄芪皂苷、黄芪黄酮对 IR 致 BMSCs DNA 损伤的 用专用培养基将 BMSCs 接种于 60 mm 培养皿中，
防护作用，旨在为临床 BMSCs 的辐射防护用药提供 置于37 ℃、5％CO2培养箱中培养，每3 d换液1次，待细
依据。 胞融合度达到 85％时，用 0.25％胰蛋白酶消化传代，取
1 材料 第5代细胞用于试验。
1.1 仪器 2.2 辐射细胞模型建立
MCO-15AC 型 CO2 培 养 箱（日 本 Sanyo 公 司）； 用 X 射线直接辐照 BMSCs 建立辐射模型，剂量率
X-RAD225 型 X 射线辐射仪（美国 Faxitron 公司）；Infi- 为 200 cGy/min（225.0 kV，13.3 mA），总剂量 2 Gy，时间
nite M200 Pro 型 全 波 长 酶 标 仪（瑞 士 Tecan 公 司）； 1 min，距辐射源距离为70 cm。

·2988 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 24 中国药房 2020年第31卷第24期