Page 58 - 《中国药房》2020年23期
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导致内环境紊乱并促使细胞死亡，而细胞自噬主要依赖
          p-NF-κB p65                              60 kDa
                                                            于自噬相关基因编码的蛋白调控 。LC3是自噬膜表面
                                                                                        [17]
                                                            标记分子，其水平的改变能在一定程度上反映细胞的自
           NF-κB p65                               65 kDa
                                                            噬状态及水平      [16-17] 。本研究结果表明，与正常对照组比
                                                            较，损伤模型组细胞中LC3阳性表达的相对荧光强度显
            GAPDH                                  36 kDa
                                                            著升高；与损伤模型组比较，姜黄素各剂量组细胞中
                 正常对照组 损伤模型组 姜黄素低     姜黄素中   姜黄素高           LC3阳性表达的相对荧光强度显著降低，并有一定的剂
                                剂量组   剂量组    剂量组
        图3    各组细胞中p-NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达的               量依赖趋势。这提示 H2O2诱导的心肌细胞凋亡可能与
              电泳图                                           细胞自噬密切相关；姜黄素能够抑制这种自噬，进而减
        Fig 3 Electrophoretic maps of protein expression of  少细胞的凋亡。
               p-NF-κ B p65 and NF-κ B p65 in cells of each     NF-κB 信号通路存在于哺乳动物体内的多种组织
               group                                        细胞中，能够选择性地与B细胞κ轻链增强子结合，进而
                                                            调控与炎症反应和免疫应答相关基因的表达 。NF-κB
                                                                                                  [18]
        致脑等多个组织、器官发生供血不足，进而引起其缺血
                                 [8]
        性损伤，导致患者病死率升高 。                                     信号通路的激活与细胞外多种信号因子的变化有关，而
                                                            细胞外信号因子则与细胞膜上的受体结合，开启了一连
            姜 黄 素 是 从 姜 科 植 物 郁 金 Curcuma aromatica
                                                            串下游的反应，即在细胞因子、辐射、重金属、病毒等多
        Salisb.的块根、姜黄 C. longa L.的根茎、莪术 C. zedoaria
                                                            种外界因子的刺激下，NF-κB 信号通路会被激活，进而
        （Berg.）Rosc.的根茎和天南星科植物菖蒲 Acorus cala-
                                                            调控其上下游相关细胞通路及蛋白的表达 。然而，
                                                                                                  [19]
        mus L.的根茎中提取分离得到的单体化合物 。现代药
                                               [5]
                                                            NF-κB信号通路的错误调节会引发自身免疫性疾病、慢
        理研究表明，姜黄素具有抗炎、抗氧化、调脂、抗病毒、抗
                                                            性炎症等的发生，如系统性红斑狼疮和膝骨关节炎滑膜
        感染、抗肿瘤、抗凝、抗肝纤维化、抗动脉粥样硬化等多
                                                            炎的发生机制就与 NF-κB 信号通路激活及相关蛋白水
        种药理作用      [6，9] 。近年来研究报道，姜黄素对脓毒症、心
                                                            平异常升高有关       [20-21] 。NF-κB信号通路的异常激活与心
        肌缺血再灌注损伤、氧化应激损伤等多种原因引起的心
                                                            肌细胞损伤的发病机制密切相关，例如韩笑等 的研究
                                                                                                    [22]
        肌细胞损伤有明显的改善作用              [10-12] ，提示姜黄素对心肌
                                                            表明，缺血再灌注损伤模型大鼠心肌NF-κB信号通路被
        细胞损伤的药理作用及机制值得进一步深入探讨。
                                                            激活，加重了大鼠心肌组织的炎症反应及病理损伤，而
            H2O2诱导的心肌细胞氧化损伤是目前实验室常用
                                                            抑制 NF-κB 信号通路的激活则能减轻其心肌细胞的损
        的一种心肌细胞损伤造模方法。H2O2作为易穿透细胞
                                                            伤；宋光兰等 报道了花旗松素能通过抑制NF-κB信号
                                                                       [23]
        膜的活性氧成分，由于其性质稳定且易得，是细胞损伤
                                                            通路来改善缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤。由此
                         [13]
        模型常用的诱导剂 。H2O2诱导的损伤模型是研究体
                                                            可见，NF-κB 信号通路在心肌细胞损伤的发生、发展中
        外细胞损伤最常用的模型，可最大程度地模拟体内细胞
                                                            扮演着重要角色。有研究指出，NF-κB p65 mRNA 和
        损伤的病理生理过程 。本研究选用来源于胚胎期大
                           [14]
                                                            NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白的表达水平均能够直接反
        鼠心脏组织的 H9c2 细胞作为研究对象，探讨姜黄素对
                                                            映NF-κB信号通路的表达状态，p-NF-κB p65/NF-κB p65
        H2O2致心肌细胞损伤的抗凋亡作用。SOD活性和MDA
                                                            比值则能够表示 NF-κB p65 的磷酸化水平，上述指标的
        含量可反映细胞氧化损伤水平及对氧化应激的自我调                             异常升高均能直接反映出 NF-κB 信号通路的异常激
        节能力，SOD 活性降低、MDA 含量升高，则表示心肌细                        活 。本研究结果表明，与正常对照组比较，损伤模型
                                                              [24]
                           [15]
        胞自我修复能力降低 。本研究结果表明，与正常对照                            组细胞中 NF-κB p65 mRNA 和 NF-κB p65、p-NF-κB p65
        组比较，损伤模型组细胞存活率和 SOD 活性均显著降                          蛋白的表达水平以及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均显
        低，细胞凋亡率和MDA含量均显著升高；与损伤模型组                           著升高；与损伤模型组比较，姜黄素各剂量组上述指标
        比较，姜黄素各剂量组细胞存活率和SOD活性均显著升                           均显著降低。这表明姜黄素改善 H2O2致心肌细胞损伤
        高，细胞凋亡率和 MDA 含量均显著降低。这提示姜黄                          的机制可能与调节NF-κB信号通路密切相关。
        素能够改善H9c2细胞氧化应激损伤，抑制细胞凋亡，提                              综上所述，姜黄素能够提高 H2O2致损伤 H9c2 心肌
        高其存活率。                                              细胞的存活率，降低其凋亡率，并提高 SOD 活性、降低
            有研究指出，细胞自噬与细胞凋亡之间存有复杂的                          MDA 含量，其作用机制可能与调节心肌细胞 NF-κB 信
        交互调控关系，自噬作为一种程序性细胞死亡模式，也                            号通路有关。目前，临床上还没有疗效及机制确切的用
        参与了心肌细胞损伤的发生、发展 。在正常的生理状                            于治疗心肌细胞损伤的NF-κB信号通路抑制剂，故本研
                                      [16]
        态下，细胞维持低自噬状态和内环境稳态，自噬增强会                            究暂未设置阳性对照组。同时，由于研究时间及资金有


        ·2868 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 23                                 中国药房    2020年第31卷第23期
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