Page 38 - 《中国药房》2020年23期
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Results of Western blotting assay showed that the expression levels of phosphorylated Tau protein（Thr205，Ser404 sites）were
        increased significantly （P＜0.01）. Compared with model group，the expression of Tau protein，phosphorylated Tau protein
        （Thr205，Ser404 sites） in the brain tissue of mice were decreased in positive control group and TSG groups；aggregation
        decreased，distribution narrowed and their relative expression were decreased significantly（P＜0.01）. Results of Western blotting
        assay showed that the expression levels of phosphorylated Tau protein（Thr205，Ser404 sites）were decreased significantly（P＜
        0.01）. Compared with positive control group，There was no significant difference in the distribution of Tau protein，phosphorylated
        Tau protein （Thr205，Ser404 sites） in the brain tissue of mice in TSG groups；the relative expression were not statistically
        significant（P＞0.05）；but Western blotting assay showed the expression levels of phosphorylated Tau protein（Thr205 site）in TSG
        medium-dose and high-dose groups as well as the expression levels of phosphorylated Tau protein（Ser404 site）in TSG groups
        were decreased significantly （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：TSG can play an anti-AD effect on AD model mice by
        down-regulating the expression of phosphorylated Tau protein（Thr205，Ser404 sites）in brain tissue.
        KEYWORDS Alzheimer’s disease；Stilbene glycoside；3×Tg-AD mice；Tau protein；Phosphorylation；Thr205 site；Ser404 site


            阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）也称老年              有限公司）。
        痴呆，是一种常见的不可逆转的中枢神经退行性疾                              1.2 药品与试剂
        病 。《2018 年世界阿尔茨海默病报告》指出：AD 在全球                          TSG（成 都 克 洛 玛 生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 ：
          [1]
        的患病人数已达5 000万，而且还在全球以每3秒就产生                         CHB180810，含量：≥70％）；石杉碱甲片（辰欣药业股份
        1 名患者的速度不断增加；预计到 2030 年，仅用于治疗                       有限公司，批号：191211202，规格：50 μg/片）；高效RIPA
        AD的总花费就将高达2万亿美元。然而，AD作为全球                           组织/细胞快速裂解液（美国 MedChemExpress 公司，批
        卫生医疗亟待攻克的一个重大疾病，其发病机制仍未完                            号：20190622）；磷酸蛋白酶抑制剂（北京康为世纪生物
        全阐释清楚，目前暂无药物可以有效预防或根治该                              科技有限公司，批号：01385/30429）；苯甲基磺酰氟
        病 [2-3] 。Tau 蛋白是一种重要的微管相关蛋白，其主要生                   （PMSF，批号：20190926）、牛血清白蛋白（BSA，批号：
        理功能是促进微管的组装与结合，以及参与神经元极性                            20200605）均购自北京索莱宝科技有限公司；兔抗小鼠
                    [4]
        的建立和维持 。越来越多的研究指出，Tau蛋白多个位                          Tau 蛋白多克隆抗体（批号：0083660）、辣根过氧化物酶
        点的异常磷酸化是介导 AD 患者认知障碍的关键原因，                         （HRP）标记的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗（批号：
        其中主要的位点包括Thr205、Ser404等          [5-7] 。            20000174）均购自美国 Proteinech Group 公司；兔抗小鼠
            二苯乙烯苷（TSG）是从何首乌中提取的一种重要                         磷 酸 化 Tau 蛋 白（Thr205 位 点）多 克 隆 抗 体（批 号 ：
                                             [8]
        化合物，具有抗衰老、神经保护等药理功效 。多项研究                           2001242）、兔抗小鼠磷酸化 Tau 蛋白（Ser404 位点）多克
        指出，TSG 能一定程度减少 AD 模型小鼠β-淀粉样蛋白                       隆抗体（批号：SG255476）均购自美国 Invitrogen 公司；
        产生和神经元凋亡，增加其突触可塑性，从而改善AD模                           10％PAGE凝胶快速制备试剂盒（批号：02431400）、Omi-
                                                                  TM
        型小鼠的认知与记忆能力，起到神经保护的作用                       [9-10] 。  ni-ECL 超 灵 敏 感 化 学 发 光 检 测 试 剂 盒（批 号 ：
        本课题组前期研究发现，TSG 能够通过抑制 AD 发病关                        02391063）、二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量试剂盒（批号：
        键蛋白——Tau 蛋白相关位点的磷酸化水平，从而达到                          013B1050）、5×蛋白快速封闭液（批号：0141189）均购自
        保护AD模型细胞的作用 。本研究拟在前期研究的基                            上海雅酶生物科技有限公司；Alexa Fluor 594 标记的山
                              [11]
        础上，选择高表达 Tau 基因 P301L 位点突变的 APP/PS1/                羊抗小鼠 IgG（H+L）高交叉吸附二抗（批号：S0006）、
        Tau 三转基因痴呆（3×Tg-AD）小鼠作为研究对象，开展                      DAPI 染料（批号：1387190）均购自美国 Thermo Fisher
        TSG 对 3 × Tg-AD 小 鼠 脑 组 织 中 Tau 蛋 白 磷 酸 化           Scientific 公司；其余试剂均为分析纯或实验室常用规
        （Thr205、Ser404 位点）影响的体内研究，进一步探索该                    格，水为蒸馏水。
        药物抗AD的可能机制。                                         1.3 动物
        1 材料                                                    本研究使用的动物包括高表达Tau基因P301L位点
        1.1 仪器                                              突变的APP/PS1/Tau三转基因痴呆（3×Tg-AD）小鼠和遗
             CM1650 型冷冻切片机（德国 Leica 公司）；D1MI-               传背景相近的 C57BL/6J 小鼠两种品系，均为雄性、SPF
        3000B 型荧光倒置显微镜[徕卡显微系统（上海）贸易有                        级。3×Tg-AD小鼠购自美国杰克逊实验室（健康证书编
        限公司]；Neofuge15R型高速冷冻离心机（上海力康生物                      号：1611A18008），6 周龄，体质量为（25.02±0.20）g，共
        医疗科技控股有限公司）；ME204E型电子天平[梅特勒-                        36 只；C57BL/6J 小鼠购自长沙市天勤生物技术有限公
        托利多仪器（上海）有限公司]；SpactraMax i3x 型多功能                  司[生产许可证编号：SCXK（湘）2016-0011]，6周龄，体质
        酶标仪（美国Molecular Devices公司）；Tanon-5200 multi         量为（25.20±0.16）g，共 6 只。所有小鼠购回后均饲养
        型全自动化学发光图像分析仪（广州誉维生物科技仪器                            于右江民族医学院SPF级动物实验中心（环境为相对湿


        ·2848 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 23                                 中国药房    2020年第31卷第23期
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