Page 33 - 《中国药房》2020年23期

检测；DAD 检测波长：260 nm；ELSD 参数：增益值为 4， 2.5.2 线性关系、检测限和定量限考察 精密吸取“2.1”
漂移管温度为 100 ℃，雾化器温度为 80 ℃，载气流速为 项下混合对照品溶液适量，分别用甲醇溶剂稀释成系
1.6 L/min。 列不同质量浓度的对照品溶液，每种化合物至少配制 6
2.5 方法学考察 个适当质量浓度的系列对照品溶液。各成分的线性关
2.5.1 专属性考察 取“2.1”项下混合对照品溶液及 系考察的质量浓度具体设置如下：毛蕊异黄酮苷为
“2.3”项下黄芪供试品溶液、发酵黄芪供试品溶液和空白 0.32、0.16、0.08、0.04、0.02、0.01、0.005、0.002 5、0.001 25
样品供试品溶液，分别按“2.4”项下色谱条件分析测定， mg/mL；芒 柄 花 苷 为 0.12、0.06、0.03、0.015、0.007 5、
记录色谱图。结果，各待测成分色谱峰与相邻峰间的分 0.003 75、0.001 88、0.000 94 mg/mL；毛蕊异黄酮为 0.1、
离度良好，分离度均大于1.5，理论板数按毛蕊异黄酮苷 0.05、0.025、0.012 5、0.006 25、0.003 13、0.001 56 mg/mL；
峰计不低于 7 000，且空白样品对待测成分的测定无干 芒柄花素为 0.128、0.064、0.032、0.001 6、0.008、0.004、
扰。色谱图见图1。 0.002、0.001 mg/mL；黄芪皂苷Ⅳ为 1、0.5、0.25、0.125、
0.062 5、0.031 25 mg/mL；异黄芪皂苷Ⅱ为 0.4、0.2、0.1、

612.48 0.05、0.025、0.012 5 mg/mL；环黄芪醇为 0.8、0.4、0.2、
456.99 2 0.1、0.05、0.025 mg/mL；异黄芪皂苷Ⅰ为 0.8、0.4、0.2、
mAU 301.50 3 4 0.1、0.05、0.025 mg/mL。各系列对照品溶液按“2.4”项下
146.01 1
－9.49 色谱条件分析测定，记录色谱图。其中，毛蕊异黄酮苷、
0 8.70 17.39 26.09 34.78 43.48 52.17 60.67 芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素以峰面积为纵坐标
t，min
A.混合对照品溶液（HPLC-DAD检测） （y）、质量浓度为横坐标（x，mg/mL）进行线性回归，计算
回归方程；黄芪甲苷、异黄芪皂苷Ⅱ、环黄芪醇、异黄芪
3
373.06
皂苷Ⅰ以峰面积的对数值为纵坐标（lgy）、质量浓度的对
279.75 4
1
mAU 186.43 2 数值为横坐标（lgx，mg/mL）进行线性回归，计算回归方
93.12 1 2 3 4 发酵黄芪样品 程。另取“2.1”项下混合对照品溶液适量，以甲醇溶剂
黄芪样品
－0.20 空白样品 逐级稀释后按“2.4”项下色谱条件进样测定，以信噪比
0 8.70 17.39 26.09 34.78 43.48 52.17 60.67
t，min 3 ∶1、10∶1分别计算检测限和定量限。结果显示，各待测
B.样品溶液（HPLC-DAD检测）
成分在其各自进样质量浓度范围内呈现良好的线性关
5
405.69 2
系（R 均大于 0.999 0），检测限和定量限均满足测定要
306.04
mAU 206.40 求，结果见表1。
2 3 表 1 各待测成分的回归方程、定量限及检测限测定
106.75 4
1 6 7 8
7.10 结果
0 8.70 17.39 26.09 34.78 43.48 52.17 60.67
t，min Tab 1 Determination results of regression equation，
C.混合对照品溶液（HPLC-ELSD检测）
quantification limit and detection limit of each
269.78 7 component
5
204.66 3 8 待测成分 回归方程 R 2 线性范围，mg/mL 检测限，ng 定量限，ng
mAU 139.54 1 4 毛蕊异黄酮苷 y＝24 266x－27.821 1.000 0 0.001 25～0.32 5.6 17.3
74.43 2 6 发酵黄芪 芒柄花苷 y＝40 106x－18.853 1.000 0 0.000 94～0.12 7.8 25.8
样品
5 6 8 黄芪样品
9.31 空白样品 毛蕊异黄酮 y＝68 144x－57.358 1.000 0 0.001 56～0.1 6.4 22.5
0 8.70 17.39 26.09 34.78 43.48 52.17 60.67 芒柄花素 y＝70 894x－50.899 1.000 0 0.001～0.128 4.3 14.9
t，min
D.样品溶液（HPLC-ELSD检测） 黄芪皂苷Ⅳ lgy＝1.828 6lgx+4.698 8 0.999 1 0.031 25～1 69.0 220.0
异黄芪皂苷Ⅱ lgy＝1.718 lgx+4.597 1 0.999 5 0.012 5～0.4 57.0 180.0
注：1.毛蕊异黄酮苷；2.芒柄花苷；3.毛蕊异黄酮；4.芒柄花素；5.黄
环黄芪醇 lgy＝1.318 4 lgx+3.972 0.999 8 0.025～0.8 98.0 326.0
芪皂苷Ⅳ；6.异黄芪皂苷Ⅱ；7.环黄芪醇；8.异黄芪皂苷Ⅰ 异黄芪皂苷Ⅰ lgy＝1.684 lgx+4.685 4 0.999 7 0.025～0.8 45.0 152.0
Note：1. calycosin glucoside；2. ononin；3. calycosin；4. formonone-
2.5.3 精密度试验 取“2.1”项下的混合对照品溶液适
tin；5. astragaloside Ⅳ；6. isoastragaloside Ⅱ；7. cycloastragenol；8. isoa-
量，按“2.4”项下色谱条件进样测定，连续测定6次，记录
stragaloside Ⅰ
图 1 混合对照品溶液、样品溶液及空白样品溶液的 色谱图并计算峰面积的RSD值，以考察日内精密度。每
HPLC-DAD-ELSD色谱图 天测定 2 次，连续测定 3 d，记录色谱图并计算峰面积的
Fig 1 HPLC-DAD-ELSD chromatograms of mixed RSD值，以考察日间精密度。结果显示，毛蕊异黄酮苷、
control solution，sample solution and blank 芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪皂苷Ⅳ、异黄芪
sample solution 皂苷Ⅱ、环黄芪醇、异黄芪皂苷Ⅰ的日内精密度 RSD 分

中国药房 2020年第31卷第23期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 23 ·2843 ·