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表3 黄芪发酵前后8种成分含量测定结果                           与2015版《中国药典》（一部）（后文简称“药典”）中黄芪
        Tab 3 Contents of 8 components in A. membranaceus  项下黄芪皂苷Ⅳ含量标准（≥0.040％） 相比偏低。笔
                                                                                             [1]
               before and after fermentation               者分析原因可能是本研究的提取方法与药典的提取方
                          含量（x±s，n＝3，mg/g）                 法不同所致，由于药典方法中氨水洗涤会造成其他皂苷
        待测成分                                     变化率，％
                       黄芪            发酵黄芪                  类成分向黄芪皂苷Ⅳ的转化，使黄芪皂苷Ⅳ含量偏高，
        毛蕊异黄酮苷      0.376 9±0.012 2  0.005 6±0.000 6 ＊  －98.51
        芒柄花苷        0.169 9±0.005 0  0.006 1±0.000 7 ＊  －96.41  如果应用到本研究中将无法解释黄芪皂苷Ⅳ含量增加
        毛蕊异黄酮       0.201 7±0.009 5  0.010 6±0.002 4 ＊  －94.74  的原因，故本研究选择了较为通用的甲醇回流提取方
        芒柄花素        0.144 4±0.002 0  0.005 2±0.000 2 ＊  －96.40  法。结果显示，本研究中黄芪皂苷Ⅳ的含量测定结果与
        黄芪皂苷Ⅳ       0.126 9±0.009 2  0.493 9±0.005 5 ＊  289.20  文献[32]的测定结果较一致。
        异黄芪皂苷Ⅱ      0.119 0±0.002 3  0.143 1±0.003 9 ＊  20.25
        环黄芪醇        0.916 7±0.022 5  0.228 7±0.004 4 ＊  －75.05  本研究结果显示，发酵黄芪中 4 种黄酮类化合物的
        异黄芪皂苷Ⅰ      0.061 8±0.009 6  0.409 4±0.005 0 ＊  562.46  含量较未发酵黄芪均显著降低。文献研究表明，黄芪经
                             ＊
           注：与黄芪（未发酵）比较，P＜0.05                             解淀粉芽孢杆菌液体发酵后毛蕊异黄酮、芒柄花素的含
                                          ＊
           Note：vs. A. membranaceus（non-fermentation），P＜0.05          [33]
                                                           量显著降低 ，这与本研究结果相似——4 种皂苷类成
        苷、芒柄花素具有体外抗乳腺癌的药理作用                  [20-21] ；黄芪皂  分除环黄芪醇外，其他3种成分的含量均显著增加。侯
        苷Ⅳ具有抑制非小细胞肺癌（A549 细胞）的生长和增                         美如等 研究发现，黄芪经解淀粉芽孢杆菌固体发酵
                                                                  [34]
                       [23]
                                               [25]
          [22]
                                [24]
        殖 、抗心力衰竭 、抗衰老 、保护心肌细胞 等多种                          后，黄芪皂苷Ⅳ的含量仅增加了37.95％。但本研究中，
        作用；异黄芪皂苷Ⅱ具有抗炎 作用；环黄芪醇具有激                           发 酵 后 黄 芪 的 主 要 活 性 成 分 黄 芪 皂 苷 Ⅳ 增 加 了
                                  [26]
                              [27]
        活端粒酶的活性、抗衰老 等作用；异黄芪皂苷Ⅰ具有                           289.20％。本课题组前期已证实经九州虫草双向固体发
        抗炎 、改善胰岛素抵抗和治疗糖尿病 的作用。因此，                          酵后的黄芪发酵物对 A549 细胞生长、增殖的能力显著
            [28]
                                         [29]
        本研究选择毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄                          增强，因此笔者推测黄芪皂苷Ⅳ含量的增加可能是发酵
        花素4种黄酮类成分及黄芪皂苷Ⅳ、异黄芪皂苷Ⅱ、环黄                          黄芪对A549细胞的抑制作用增强的原因之一。
        芪醇、异黄芪皂苷Ⅰ 4种皂苷类成分同时作为指标性成                              环黄芪醇是黄芪皂苷Ⅳ合成的前体化合物 。本
                                                                                                     [35]
        分来探究双向固体发酵对黄芪有效活性成分的影响。                            研究中，黄芪在发酵后其环黄芪醇的含量显著下降，而
        3.2  色谱条件的优化                                       黄芪皂苷Ⅳ的含量显著增加，因此笔者推测环黄芪醇有
            因皂苷类化合物没有共轭双键，用紫外检测器检测                         可能在发酵过程中转化成了黄芪皂苷Ⅳ。本研究结果
        的灵敏度较低，故 DAD 不适合用于黄芪中皂苷类化合                         表明，发酵前后黄芪中总皂苷含量几乎一致，但存在皂
        物的检测。与DAD检测器的原理不同，ELSD检测器是                         苷类化合物之间相互转化，如黄芪皂苷Ⅳ、异黄芪皂苷
        质量型检测器，具有通用性好、响应信号不受其官能团                           Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅱ的含量显著增加，其中异黄芪皂苷Ⅱ
        影响的特性，适合用于检测皂苷类等没有紫外吸收的化                           增加了20.25％、异黄芪皂苷Ⅰ增加了562.46％。结合各
        合物，但其具有灵敏度低、检测下限高的缺点 。因此，                          成分的药理活性，笔者推测发酵黄芪的抗肿瘤、抗衰老、
                                               [30]
        本研究选择DAD来检测样品中的黄酮类化合物，ELSD                         抗炎等作用也会显著增加，故可以采用九州虫草-黄芪
        检测器来检测皂苷类化合物。在前期研究中，笔者比较                           双向固体发酵技术改变黄芪中活性成分的含量，生产出
        了不同流动相系统（甲醇-水、甲醇-0.1％甲酸水溶液、乙                       具有抗肿瘤、抗衰老等生物活性的产品。
        腈-水、乙腈-0.1％甲酸水溶液等）的分离效果，发现0.1％                         综上所述，本研究建立了同时测定黄芪经九州虫草
        甲酸水溶液可明显改善色谱峰峰形，而乙腈-0.1％甲酸                         双向固体发酵前后 8 种成分含量测定的 HPLC-DAD-
        水溶液明显比甲醇-0.1％甲酸水溶液分离度更好，因此                         ELSD法。结果表明，经九州虫草发酵后，黄芪中黄酮类
        本研究最终选择乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相系统。                         成分毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的
        此外，通过优化雾化器和蒸发管的温度、干燥气流速等，                          含量均显著下降；皂苷类成分除环黄芪醇含量显著下降
        提 高 了 皂 苷 类 化 合 物 的 检 测 灵 敏 度 ，最 终 建 立 了           （降幅 75.05％）外，黄芪皂苷Ⅳ、异黄芪皂苷Ⅱ、异黄芪
        HPLC-DAD-ELSD法同时测定黄芪发酵前后8种成分的                      皂苷含量均显著增加。九州虫草双向固体发酵可显著
        定量方法。与王亚丽等 建立的类似成分含量测定方                            改变黄芪中有效成分含量，但在此过程中具体产生了何
                             [31]
        法相比，本方法在缩短了检测时间的同时还获得了较好                           种新物质及其发生的机制还有待于进一步研究。
        的分离度，节约了分析的时间成本，为多指标控制发酵                           参考文献
        黄芪的质量提供了方法基础。                                      [ 1 ]  国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S]. 2015年
        3.3  九州虫草双向固体发酵对黄芪中 8 种成分含量的                            版.北京：中国医药科技出版社，2015：302-303．
        影响                                                 [ 2 ]  薛倩倩，刘晓节，李科，等.黄芪药材化学成分差异的研究
            本研究测定了黄芪经九州虫草双向固体发酵前后8                              进展[J].山西医科大学学报，2018，49（10）：1259-1263.
        种成分的含量变化，其中发酵黄芪中黄芪皂苷Ⅳ的含量                           [ 3 ]  聂娟，谢丽华，马港圆，等.中药黄芪的化学成分及药理作


        中国药房    2020年第31卷第23期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 23  ·2845 ·
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