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股份有限公司淮海药厂，批号：180218142）；乙腈（批号： 峰面积。结果，相对保留时间的 RSD 均小于 1％（n＝
20181205，色谱纯）、水合氯醛（批号：20160705）均购自 6），相对峰面积的 RSD 均小于 3％（n＝6），表明本方法
国药集团化学试剂有限公司；二甲苯（重庆川东化工有限 重复性良好。
公司，批号：20160301，纯度：99％）；卡拉胶（上海伊卡生 2.3.4 HPLC 指纹图谱的生成 分别取 10 批金银花药
物技术有限公司）；其余试剂均为分析纯，水为纯净水。 材样品适量，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，再按
1.3 动物 “2.2”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。采用《中药
昆明种小鼠，清洁级，雌性，2 月龄，体质量（20±2） 色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》，以S2为参照
g，购自长沙市天勤生物技术股份有限公司，动物生产许 图谱（因 S2 图谱的色谱峰信号相对较强且峰形明显），
可证号：SCXK（湘）2014-0011。 设置时间窗宽度为0.1 s，采用多点校正法进行色谱峰匹
2 方法与结果 配，生成 10 批金银花药材样品的 HPLC 叠加指纹图谱，
2.1 溶液的制备 详见图 1；采用中位数法生成对照指纹图谱（R），详见
2.1.1 供试品溶液 取金银花药材适量，粉碎，过 40 目 图2。
筛，精密称取粉末 1.0 g，置于具塞锥形瓶中，加水 25 1 300 8
mL，称定质量，加热回流提取2 h，放冷至室温，再次称定 1 200 9
1 100
质量，用水补足减失的质量，摇匀，取上清液过 0.45 μm 1 000 1 2 3 5 6 7 10 11 12 13 14 15 16 17 18 1920 22 2324 25
21
900 4 S10
微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液，备用。 800 S9
mV 700 S8
2.1.2 对照品溶液 分别精密称取马钱苷、木犀草苷、 U， 600 S7
500 S6
绿原酸、异绿原酸 A、异绿原酸 B、异绿原酸 C、新绿原 400 S5
酸、金丝桃苷、芦丁对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成 300 S4
200 S3
上述成分质量浓度分别为 13.2、10.8、7.3、7.1、7.5、7.6、 100 S2
0 S1
12.8、18、15 μg/mL的单一对照品溶液，备用。 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76 80
t，min
2.2 色谱条件
图1 10批金银花药材的HPLC叠加指纹图谱
色谱柱：Diamonsil C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流
Fig 1 HPLC superposition fingerprints of 10 batches
动相：乙腈（A）-0.1％甲酸水溶液（B），梯度洗脱（0～18
of L. japonica
min，7％A→8％A；18～30 min，8％A→12％A；30～50
min，12％A→20％A；50～60 min，20％A；60～65 min， 600 8 9
500
20％ A→25％ A；65～70 min，25％ A→30％ A；70～80
400
min，30％A→7％A）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检 mV U， 300
测波长：238 nm；进样量10 μL。 200 7
11 19 25
2.3 指纹图谱的建立与分析 100 1 2 3 4 56 10 12 13 14 15 16 18 20 21 22 23 24
17
2.3.1 精密度试验 取同一批金银花药材（编号：S2）适 0 R
量，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2”项下 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76 80
色谱条件连续测定 6 次，记录峰面积。以绿原酸（即峰 t，min
图2 金银花药材的对照指纹图谱
9，分离度好且峰形对称）为参照，计算各共有峰的相对
Fig 2 Reference fingerprint of L. japonica
保留时间和相对峰面积。结果，相对保留时间的RSD均
小于1％（n＝6），相对峰面积的RSD均小于3％（n＝6）， 2.3.5 共有峰指认 由图 1 和图 2 可见，10 批金银花药
表明本方法精密度良好。 材样品含共有峰 25 个，通过与对照品（取“2.1.2”项下 9
2.3.2 稳定性试验 取同一批金银花药材（编号：S2）适 种单一对照品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，其
量，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，分别于室温下 叠加色谱图见图 3）比对，指认出其中 9 个成分，分别为
放置0、2、4、6、8、12、24 h时按“2.2”项下色谱条件进样测 新绿原酸（峰2）、绿原酸（峰9）、马钱苷（峰10）、芦丁（峰
定，记录峰面积。以绿原酸为参照，计算各共有峰的相 18）、金丝桃苷（峰 20）、木犀草苷（峰 21）、异绿原酸（峰
对保留时间和相对峰面积。结果，相对保留时间的RSD 22）、异绿原酸A（峰23）、异绿原酸C（峰25）。
均小于2.5％（n＝7），相对峰面积的RSD均小于3％（n＝ 2.3.6 相似度评价 将 10 批金银花药材样品的 HPLC
7），表明供试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。 指纹图谱导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
2.3.3 重复性试验 取同一批金银花药材（编号：S2）适 （2012 版）》进行相似度评价。结果，10 批样品的相似度
量，共 6 份，分别按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，再 在0.775～0.994范围内，详见表2。
按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以绿原酸 2.4 抗炎作用研究
峰（峰 9）为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对 2.4.1 金银花水提取液的制备 分别称取金银花药材

中国药房 2020年第31卷第20期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 20 ·2499 ·