Page 86 - 2020年19期

结果显示，与阴性对照组比较，阳性对照组和Ⅰ、 各色谱峰保留时间和色谱峰面积的RSD均小于3％，表
Ⅳ、Ⅵ部位组（70％乙醇提取总部位、乙酸乙酯萃取部 明供试品溶液在室温条件下放置24 h较稳定。
位、水提取部位）小鼠耳肿胀度均显著降低（P＜0.01 或 2.3.4 指纹图谱的建立 取“2.3.1”项下的混合对照品
P＜0.05）；其中，在各极性部位中，70％乙醇提取总部位 溶液和Ⅰ～Ⅵ部位供试品溶液，按“2.3.2”项下色谱条件
的耳肿胀抑制率最高（54.07％），其次为乙酸乙酯萃取部 进样分析，采集色谱图。将色谱图“cdf”格式文件导入
位（30.54％）、水提取部位（30.45％），提示上述 3 个部位 《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》中，生成
的体内抗炎效果较强，详见表1。 指纹图谱。结果，共确定了5个共有峰，详见图1（图中，
表1 藤茶不同极性部位对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 R表示共有模式，S1～S2分别表示Ⅰ～Ⅵ部位供试品溶
（x±±s，n＝10） 液）。
Tab 1 Effects of different polar parts of A. grosseden-
750
tata on xylene-induced ear swelling in mice（x±± 700
650
600 R
s，n＝10） 550 S6
500
450
组别 耳肿胀度，mg 肿胀抑制率，％ mV U， 400 S5
350
阴性对照组 9.82±0.99 300 S4
250
阳性对照组 1.59±0.45 ＊＊ 83.81 200 S3
150
Ⅰ部位组 4.51±0.78 ＊＊ 54.07 100 S2
50
Ⅱ部位组 8.86±3.18 9.76 0 S1
Ⅲ部位组 8.67±1.51 11.71 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64
Ⅳ部位组 6.82±1.15 ＊ 30.54 t，min
Ⅴ部位组 8.69±3.55 11.51 图1 藤茶不同极性部位的HPLC指纹图谱
Ⅵ部位组 6.83±1.93 ＊ 30.45 Fig 1 HPLC fingerprint of different polar parts of A.
注：与阴性对照组比较，P＜0.05， P＜0.01 grossedentata
＊
＊＊
＊
＊＊
Note：vs. negative control group，P＜0.05， P＜0.01
2.3.5 HPLC 指纹图谱特征峰的标定 取“2.3.1（1）”项
2.3 藤茶不同极性部位的HPLC指纹图谱建立
下混合对照品溶液，按“2.3.2”项下色谱条件进样分析并
2.3.1 溶液制备 （1）混合对照品溶液：精密称取杨梅
采集色谱图，然后与“2.3.4”项下得到的色谱图共有峰进
素、二氢杨梅素对照品各适量，置于同一量瓶中，加入甲
行比对。结果显示，2号峰为双氢杨梅素，5号峰为杨梅
醇溶解制成每1 mL含杨梅素56.7 μg、二氢杨梅素103.2
素。混合对照品溶液和藤茶极性部位供试品溶液的高
μg 的混合对照品溶液。（2）藤茶不同极性部位供试品溶
效液相色谱图见图2（其中，供试品溶液以Ⅰ部位供试品
液：分别称取藤茶Ⅰ～Ⅵ部位样品各适量，置于不同量
瓶中，加入甲醇溶解制成质量浓度分别为 3.00、3.37、 溶液为代表进行峰位比对，其余部位供试品样品图略）。
6.02、3.05、9.10、3.02 mg/mL（以干膏量计）的供试品 0.12
0.10 2
溶液。 AU 0.08 5
0.06
0.04
2.3.2 色 谱 条 件 色 谱 柱 ：Poroshell 120 EC-C18 （4.6 0.02 0
mm×250 mm，4.0 μm）；流动相：乙腈（A）-0.1％磷酸水溶 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64
t，min
液（B），梯度洗脱（0～20 min，10％A→15％A；20～40 A.混合对照品溶液
min，15％A→19％A；40～66 min，19％A→32％A；66～ 0.12 5
0.10
67 min，32％A→10％A）；流速：1 mL/min；柱温：25 ℃； AU 0.08
0.06
0.04 2
检测波长：365 nm；进样量：5 μL。 0.02 0 1 3 4
32 36
2.3.3 方法学考察 （1）精密度试验：取“2.3.1（2）”项下 0 4 8 12 16 20 24 28 t，min 40 44 48 52 56 60 64
的Ⅰ部位供试品溶液，按“2.3.2”项下色谱条件连续进样 B.Ⅰ部位供试品溶液
分析6次，记录各色谱峰保留时间和峰面积。结果，各色 注：2.双氢杨梅素；5.杨梅素
谱峰保留时间和峰面积的RSD均小于1％，表明方法精 Note：2. dihydromyricetin；5. myricetin
图2 混合对照品溶液和藤茶极性部位供试品溶液的高
密度良好。（2）重复性试验：取“2.1.2”项下的Ⅰ部位萃取
效液相色谱图
物样品共 6 份，精密称定，按“2.3.1（2）”项下方法配制供
Fig 2 HPLC chromatograms of mixed control solu-
试品溶液，再按“2.3.2”项下色谱条件进样分析，记录各
tion and test solution of different polar parts of
色谱峰保留时间和峰面积。结果，各色谱峰保留时间和
A. grossedentata
峰面积RSD均小于3％，表明方法重复性良好。（3）稳定
性试验：取“2.3.1（2）”项下的Ⅰ部位供试品溶液，于室温 2.4 藤茶不同极性部位 HPLC 指纹图谱与抗炎活性的
条件下放置0、2、4、8、12、24 h后再按“2.3.2”项下色谱条 灰色关联度分析
件进样分析，记录各色谱峰保留时间和峰面积。结果， 2.4.1 数据集建立 以藤茶6个不同极性部位（Ⅰ～Ⅵ）
·2384 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19 中国药房 2020年第31卷第19期