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number of errors was increased significantly；4-HNE，8-OHdG and ROS contents，mRNA and protein expression of Bax were
increased significantly，and mRNA and protein expression of Bcl-2 was decreased significantly（P＜0.01）. Compared with model
group，the incubation period of avoiding darkness test was prolonged significantly in ginsenoside Rb3 group，β-asarone group，drug
combination group and positive control group，the number of errors was decreased significantly；4-HNE，8-OHdG，ROS contents，
mRNA and protein expression of Bax were decreased significantly，and mRNA and protein expression of Bcl-2 were increased
significantly，especially in drug combination group（P＜0.05 or P＜0.01）. But the incubation period of avoiding darkness test was
shortened significantly in Akt inhibitor group，and the number of errors was increased significantly；4-HNE，8-OHdG，ROS
contents，mRNA and protein expression of Bax were increased significantly，and mRNA and protein expression of Bcl-2 were
decreased significantly （P＜0.05）. CONCLUSIONS：Ginsenoside Rb3 combined with β-asarone has a protective effect on VD
model mice，and the effect was better than that of each compound alone. The mechanism of which may be associated with
anti-oxidative stress and anti-apoptosis of hippocampus.
KEYWORDS Ginsenoside Rb3；β-asarone；Vascular dementia；Oxidative stress；Apoptosis；Mice

血管性痴呆（Vascular dementia，VD）是一种由缺血 公司，批号：1706077，规格：5 mg]；LY294002[蛋白激酶B
性脑血管疾病所致脑组织局部脑血流量减少、缺氧等因 （Akt）抑 制 剂 ，美 国 Med Chem Express 公 司 ，批 号 ：
素所造成的中枢神经功能障碍性疾病，主要临床表现为 154447-36-6]；水合氯醛（国药集团化学试剂有限公司，
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认知功能障碍 。研究发现，VD和散发性阿尔茨海默病 批号：20170414）；4-羟基壬烯酸（4-HNE）酶联免疫吸附
[2]
的共同始动环节是慢性脑组织血液供应不足 。目前， 测定（ELISA）试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限
临床尚无理想的防治认知功能障碍的药物。中药复方 公司，批号：UK92FFJBWN）；8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）
由于具有多途径、多靶点的作用特点，对痴呆疾病的预 ELISA 试剂盒（武汉华美生物工程有限公司，批号：
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防和治疗具有一定的优势 ，故有潜在的开发价值。 C22013999）；活性氧（ROS）ELISA 试剂盒（南京草本源
人参发挥药效的主要物质基础是人参总皂苷，其中 生物科技有限公司，批号：07/2019）；Trizol试剂（美国In-
人参皂苷 Rb 类成分的含量较高。有研究发现，人参总 vitrogen 公司，批号：191012）；PrimeScript TM RT Reagent
皂苷具有提高学习记忆的能力 。石菖蒲临床广泛用于 Kit、SYBR Premix Ex Taq Ⅱ[宝生物工程（大连）有限公
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®
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中风后遗症、健忘等神经系统疾病的治疗 。β-细辛醚 司，批号：RR037A、RR820A]；B 细胞淋巴瘤 2（Bcl-2）及
作为石菖蒲挥发油的主要活性成分，具有保护心血管、 其X蛋白（Bax）、β-肌动蛋白（β-actin）基因引物由上海英
易透过血脑屏障等特点，在心脑血管疾病的防治中具有 潍捷基贸易有限公司合成；4％多聚甲醛（广州晶欣生物
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重要价值 。人参和石草蒲都是益智古方定志小丸的主 科技有限公司，批号：JX0100）；兔源 Bcl-2 克隆抗体（批
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要成分 。本课题组前期研究发现，人参总皂苷联合石 号：ab182858 和#3498S）、兔源 Bax 抗体（批号：#2772S）
菖蒲挥发油可有效改善痴呆模型小鼠的学习记忆能 多克隆、兔源GAPDH单克隆抗体（批号：5174S）、辣根过
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力 ；此外有研究证实，β-细辛醚可减缓痴呆模型小鼠的 氧 化 物 酶（HRP）标 记 的 山 羊 抗 兔 IgG 二 抗（批 号 ：
认知功能障碍 [9-10] ，人参皂苷Rb3对心脏血管再灌注和大 7074S）均购自美国 CST 公司；SABC-FITC 免疫组化试
脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用 [11-12] 。在上述研究 剂盒（武汉博士德生物工程有限公司，批号：SA1062）；生
的基础上，本文主要探索人参皂苷 Rb3与β-细辛醚联用 理盐水（辰欣药业股份有限公司，批号：1910242706）；蛋
对VD模型小鼠的改善作用，并初步研究其作用机制，以 白 裂 解 液（上 海 碧 云 天 生 物 技 术 有 限 公 司 ，批 号 ：
期为治疗VD的新药开发提供试验依据。 P0013B）；其余试剂均为分析纯，水为纯净水。
1 材料 1.3 动物
1.1 仪器 SPF级ICR小鼠70只，雄性，3月龄，体质量（25±2）
SBA-2 型小鼠避暗仪（中国医学科学院药物研究 g，由广东省医学动物实验中心提供，动物生产许可证号
所）；IKA T10 基础型分散机（德国 IKA 公司）；5804R 型 为SCXK（粤）2014-0035。所有小鼠均适应性饲养3 d再
高速冷冻离心机（德国 Eppendorf 公司）；ME403 型电子 进行后续实验。本实验方案通过广东省中医院实验动
天 平 [ 梅 特 勒 - 托 利 多 国 际 贸 易（上 海）有 限 公 司]； 物伦理委员会审核同意。
Biotek-EON 型酶标仪（美国 Bio Tek 公司）；CFX96 型荧 2 方法
光定量聚合酶链式反应（PCR）仪（美国 Bio Rad 公司）； 2.1 造模
TI2-E型全自动倒置荧光显微镜（日本Nikon公司）。 参考相关文献 按四血管阻断法复制VD模型。腹
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1.2 药品与试剂 腔注射 10％水合氯醛（350 mg/kg）进行麻醉，分离小鼠
人参皂苷Rb3对照品、β-细辛醚对照品（四川维克奇 双侧颈总动脉，用动脉夹阻断其血流 30 min，松开动脉
生物技术有限公司，批号：wkq18020701、wkq18042602，纯 夹恢复血流10 min，重复3次。于第1次阻断血流5 min
度均大于98％）；盐酸多奈哌齐片[卫材（中国）药业有限 后，断尾放血约0.3 mL。于第3次缺血再灌注后30 min，

·1968 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 16 中国药房 2020年第31卷第16期