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乳腺癌是女性癌症病死率最高的疾病，我国乳腺癌                         剂（批号：P1051）、RIPA 细胞裂解液（批号：P0013K）、
        的发病率在女性恶性肿瘤中位列第 1 位                [1-2] 。引起乳腺     BCA 蛋白定量试剂盒（批号：P0012）均购自上海碧云天
        癌的危险因素有很多，包括遗传因素、激素水平异常、吸                          生 物 技 术 有 限 公 司 ；彩 色 预 染 蛋 白 Marker（批 号 ：
                    [3]
        烟史和饮酒史 。乳腺癌的发病机制仍然是未知的，其治                          P9001）、ECL 化学发光显色液（批号：P10100）均购自苏
        疗一般采用化疗、放疗和生物免疫治疗，但目前尚无明                           州新赛美生物科技有限公司；兔抗 Caspase-3 一抗（批
                    [4]
        确的治疗靶点 。此外，目前使用的治疗方案也存在着                           号 ：380189）、兔 抗 Cleaved Caspase-3 一 抗（批 号 ：
                 [3]
        许多副作用 。因此，近年来学者们致力于发现具有治疗                          341052）、兔抗 Bax 一抗（批号：612259）、兔抗 Bcl-2 一抗
        乳腺癌潜力的新靶点药物。相关研究发现，从中药中分                           （批号：310004）及兔抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）
        离提取的天然产物可作为抗癌新药的重要来源，目前已                           一抗（批号：384404）均购自成都正能生物技术有限责任
        有大量植物化学成分被成功地用于治疗各种癌症和其                            公司；辣根过氧化物酶（HRP）标记山羊抗兔免疫球蛋白
        他疾病   [5-7] 。                                      G（IgG）二抗（英国 Abcam 公司，批号：ab6789）；其余试
            木香烃内酯是从传统中药木香中提取的一种倍半                          剂均为分析纯，水为超纯水。
        萜内酯，研究发现，其具有抗炎、抗真菌、抗癌等多种生                          1.3 细胞
        物活性 。另有相关研究报道证实，木香烃内酯可通过                               人乳腺癌 SK-BR-3 细胞系（编号：20161202-04）购
              [8]
        融 合 基 因 介 导 的 信 号 传 导 和 转 录 激 活 因 子 5（Bcr/         自上海中乔新舟生物技术有限公司，课题组前期对该细
        Abl-Stat5）途径促进伊马替尼诱导的慢性髓性白血病细                      胞系抽提的DNA进行STR位点及性别基因Amelogenin
        胞凋亡 ；其可通过调节核转录因子（NF-κB）信号通路                        检查，结果显示完全匹配，可进行后续研究。
              [9]
                                 [10]
        诱导肝癌 HepG2 细胞的凋亡 ；此外，其也被证明可以                       2 方法
                                                [11]
        抑制人肺鳞癌SK-MES-1细胞的细胞周期进程 。但目                        2.1  细胞培养
        前木香烃内酯是否对乳腺癌细胞具有抗癌活性尚不清                                将冻存的 SK-BR-3 细胞接种于含 12％胎牛血清、
        楚，基于此，笔者采用 CCK-8 法检测木香烃内酯对人乳                       100 U/mL青霉素及100 μg/mL链霉素的 DMEM高糖培
        腺癌SK-BR-3细胞增殖的影响，采用细胞划痕试验检测                        养基（即完全培养基）中，置于37 ℃、5％CO2细胞培养箱
        其对该细胞迁移能力的影响，采用Hoechst 33258荧光染                    中培养（培养条件下同），每 2～3 d 更换培养液 1 次，待
        色法观察其对该细胞凋亡的影响，采用 Western blotting                 细胞长满培养瓶底部80％～90％时进行传代，取对数生
        法检测其对该细胞中B淋巴细胞瘤因子2（Bcl-2）、Bcl-2                    长期细胞进行相关试验。
        相关 X 蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶 3（Caspase-3）和分                2.2  木香烃内酯对SK-BR-3细胞增殖的影响考察
        裂型 Caspase-3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达的影响，以               取对数生长期的SK-BR-3细胞，加入完全培养基制
        期研究木香烃内酯对 SK-BR-3 细胞增殖、迁移、凋亡的                      成细胞悬液，按 5×10 个/孔的密度接种于 96 孔培养板
                                                                              3
        影响及其作用机制，为治疗乳腺癌的新药开发提供参考。                          中，每孔100 μL。将细胞在37 ℃培养箱中培养24 h后，分
        1 材料                                               为空白对照组（含细胞但不含药物）和木香烃内酯10、20、
        1.1  仪器                                            30、40、50 μmol/L浓度组（浓度设置参考相关文献              [12-14] ）。
            Allegra -64R型台式高速冷冻离心机（美国Beckman               空白对照组加入完全培养基100 μL，木香烃内酯给药组
        公 司）；ELx800 型 酶 标 仪（美 国 Bio-Tek 公 司）；              分别加入终浓度为 10、20、30、40、50 μmol/L的木香烃内
        MCO-15AC 型细胞培养箱（日本 Sanyo 公司）；Chemi-                酯培养液，每孔总体积为 200 μL，每组设 5 个复孔。药
        Doc Touch 型化学发光成像系统（美国 Bio-Rad 公司）；                物分别作用 24、48、72 h 后，每孔加 10 μL CCK-8 溶液，
        DMi8A 型荧光倒置显微成像系统（德国 Leica 公司）；                    继续孵育 4 h后，采用酶标仪于450 nm 波长下测定各孔
        JA2003J型电子分析天平（宁波凯诺仪器有限公司）。                        吸光度（OD）值，计算细胞增殖抑制率[细胞增殖抑制率
        1.2 药品与试剂                                          （％）＝（空白对照组OD值－试验组OD值）/空白对照组
            木香烃内酯（成都曼思特生物科技有限公司，批号：                        OD值×100％]。
        A0302，纯 度 ：≥99％）；DMEM 高 糖 培 养 基（批 号 ：              2.3 木香烃内酯对SK-BR-3细胞凋亡的影响考察
                                                                                                  4
        C11995500BT）、胰酶（批号：25200-056）、胎牛血清（批                   取对数生长期的 SK-BR-3 细胞，以 1×10 个/孔的密
        号：A3160802）、青霉素-链霉素溶液（批号：15140-122）                度接种于12孔板中，每孔加入1 mL完全培养基，于细胞
        均购自美国 Gibco 公司；CCK-8 试剂盒（美国 APExBIO                培养箱中培养24 h后弃去培养基，将细胞分为空白对照
        公司，批号：K1018）；二甲基亚砜（DMSO，美国Sigma公                   组和木香烃内酯 10、20、30 μmol/L 浓度组[前期试验发
        司，批号：D2650）；Hoechst 33258染色液（批号：C0021）、            现木香烃内酯高浓度下（40～50 μmol/L）细胞大量死亡
        4％多聚甲醛（批号：P1110）均购自北京索莱宝科技有限                       漂浮，贴壁细胞较少，故选择 10、20、30 μmol/L 进行试
        公司；蛋白酶抑制剂（PMSF，批号：ST506）、磷酸酶抑制                     验]。空白对照组加入完全培养基 1 mL，试验组分别加


        中国药房    2020年第31卷第11期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11  ·1343  ·
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