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的要求。                                               二醛混合液灌流固定，断头取脑组织，以蔗糖沉糖后行
        2 方法                                               10 μm冰冻切片。切片采用牛血清白蛋白封闭1 h，滴加
        2.1 分组、给药与造模                                       p-p38 MAPK（稀释比例为1 ∶ 100）、p-NF-κB p65（稀释比
            将 78 只 SD 大鼠采用抽签法随机分为假手术组、模                    例为1 ∶ 200）一抗工作液，于4 ℃孵育过夜；次日取出，恢
        型组、丁苯酞对照组（阳性对照，10 mL/kg） 和人参皂苷                     复至室温后，以磷酸盐缓冲液（PBS）漂洗 3 次，每次 5
                                            [9]
        Rg1低、中、高剂量组（10、20、40 mg/kg）      [10-11] ，每组 13 只。  min；滴加二抗工作液（稀释比例为1 ∶ 200），于37 ℃下孵
        各给药组大鼠腹腔注射相应药物，假手术组和模型组大                           育 30 min，PBS 漂洗 3 次，每次 5 min；加入 DAPI 染色剂
        鼠腹腔注射等体积生理盐水，每天 1 次，连续 7 d。给药                      复染细胞核，在 37 ℃下孵育 5 min 后，PBS 漂洗 3 次，每
        结束后，除假手术组外，其余各组大鼠均采用右侧大脑                           次 5 min。以荧光淬灭剂封片，在荧光显微镜下观察并
                            [12]
        中动脉栓塞法（MCAO） 复制局灶性CIRI模型：异氟烷                       拍照（目标蛋白的阳性表达呈黄绿色荧光；细胞核呈蓝
        气体麻醉大鼠后，沿颈旁正中切口，分离颈部动脉，分别                          色荧光，用以定位细胞位置）。每只大鼠选取5张切片，
        找 到 颈 总 动 脉（CCA）、颈 外 动 脉（ECA）、颈 内 动 脉              在高倍镜（×400）下计数阳性表达细胞数，取平均值。
       （ICA），用动脉夹夹闭 ICA；在 ECA 剪一切口，插入线                     2.6.2  采用Western blotting法检测    每组取剩余3只大
                                                           鼠，10％水合氯醛麻醉，通过心脏经生理盐水灌流后断
        栓，沿着ICA走向在ICA内缓慢推进直至感觉有少许阻
                                                           头取脑，于脑模上冠状切取部分脑组织，加入RIPA裂解
        力为止（从 ECA 与 ICA 分叉处起始插入约 22 mm，此时
                                                           液，超声粉碎，在4 ℃下以12 000 r/min离心25 min，取上
        已插至大脑前动脉端，阻断了大脑中动脉血流）；栓塞 2
                                                           清液，采用 BCA 法测定蛋白含量后，制成含蛋白 2.5
        h后拔出线栓，再灌注24 h。假手术组大鼠不插入线栓，
                                                           µg/mL的组织提取液。取20 µL组织提取液行十二烷基
        其他操作步骤相同。
                                                           硫酸钠-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳，然后在 300
        2.2  大鼠神经功能缺损评分
                                                           mA、25 ℃条件下转移 80 min 至聚偏氟乙烯（PVDF）膜
            造模结束并待大鼠苏醒后，每组随机取5只大鼠，参
                                                           上；将膜置于含1％牛血清白蛋白封闭液中，摇床上振摇
                                  [13]
        照改良神经功能缺损评分标准 对其进行评分，评分越
                                                           1.5 h进行封闭；然后分别加入p-p38 MAPK（稀释比例为
        高则表明神经功能缺损越严重。
                                                           1 ∶ 1 000）、p-NF-κB p65（稀释比例为1 ∶ 2 000）和GAPDH
        2.3  大鼠脑梗死情况检测
                                                           （稀释比例为 1 ∶ 5 000）抗体，于 4 ℃孵育过夜；以 TBST
            采用TTC染色法检测。每组随机取4只大鼠，断头
                                                           清洗 3 次，加入相应的二抗（稀释比例均为 1 ∶ 2 000），室
        取脑组织，置于冰上脑模内，沿冠状切面以脑腹侧视交
                                                           温下振摇1.5 h；再次用TBST清洗3次后，以ECL进行发
        叉为中点切第 1 片，连续切 5 片，每片厚约 2 mm。将切
                                                           光显色，采用 Image J 1.36b 软件测定条带吸光度。以
        片置于 1％TTC 染色液中，在 37 ℃染色 20 min 左右，以
                                                           GAPDH 为内参，根据目的蛋白条带与内参蛋白条带吸
        10％福尔马林固定后拍照，并采用Image J 1.36b软件计
                                                           光度的比值表示目的蛋白的表达水平。
        算大鼠脑梗死体积占对侧半球体积的百分比（即脑梗死
                                                           2.7  统计学方法
        体积百分比）。
                                                               采用 SPSS 22.0 统计软件进行数据分析。结果以
        2.4  大鼠脑含水量检测
                                                           x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，当方差齐
                               [14]
            采用脑组织干湿重法 检测。每组随机取 3 只大                        性时组间两两比较采用LSD检验，当方差不齐时组间两
        鼠，断头取脑后称定湿质量，之后将脑组织在烘箱中                            两比较采用Tamhane’s T2检验。P＜0.05表示差异具有
       （105 ℃）干燥72 h，再次称定质量。计算脑含水量[脑含                      统计学意义。
        水量（％）＝（湿质量－干质量）/湿质量×100％]，以此反                      3 结果
        映脑水肿情况。                                            3.1 大鼠神经功能缺损评分结果
        2.5 大鼠血清中IL-1β、IL-6含量检测                                与假手术组比较，模型组和各给药组大鼠神经功能
            采用 ELISA 法检测。每组随机取 3 只大鼠，10％水                  缺损评分均显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，各给
        合氯醛麻醉后，将其于仰卧位行心脏取血（取血后放回                           药组大鼠神经功能缺损评分均显著降低（P＜0.05或P＜
        用于后续实验），血样以 1 500 r/min 离心 20～30 min，取             0.01）。与人参皂苷 Rg1低剂量组比较，人参皂苷 Rg1高
        上清液，于－20 ℃保存，备测。按照ELISA试剂盒说明                       剂量组大鼠神经功能缺损评分显著降低（P＜0.05）。与
        书方法操作，检测血清中IL-1β、IL-6含量。                           丁苯酞对照组比较，人参皂苷 Rg1各剂量组大鼠神经功
        2.6  大鼠脑组织中 p-p38 MAPK、p-NF-κB p65 蛋白表             能缺损评分差异均无统计学意义（P＞0.05）。各组大鼠
        达情况检测                                              神经功能缺损评分结果见表1。
        2.6.1  采用免疫组织化学法检测             每组随机取 3 只大          3.2 大鼠脑梗死体积百分比测定结果
        鼠，10％水合氯醛麻醉后，通过心脏经 4％多聚甲醛-戊                            除假手术组大鼠脑组织呈均匀红色、无梗死灶外，


        中国药房    2020年第31卷第11期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11  ·1289  ·
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