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表1 药材样品信息 乙酸酯 4 mg，于 90 ℃搅拌反应 30 min；冷却，加醋酸酐
Tab 1 Information of medicinal material samples 4.8 mL，于 90 ℃继续反应 30 min。反应液经 0.45 μm 微
编号 批号 产地 编号 批号 产地 孔滤膜滤过后，用氯仿定容至5 mL，即得各单糖质量浓
S1 20170211 黑龙江 S7 201805001 辽宁 度均为 1 mg/mL 的混合单糖对照品衍生化样品溶液，
S2 201509211 山东 S8 20180823 山东
S3 20170501 黑龙江 S9 20160801 山东 备用。
S4 20170803 山东 S10 20150922 辽宁 2.3 色谱条件
S5 20170901 河南 S11 20161207 吉林 色谱柱：HP-5毛细管色谱柱（3 m×320 μm，0.25 μm）；
S6 20180911 河北 S12 20180222 山东
检测器：火焰离子化检测器（FID）；进样口温度：250 ℃；
C10110127，纯 度 ：≥99％）、半 乳 糖 对 照 品（批 号 ： 检测器温度：300 ℃；升温程序：初始温度165 ℃，保持3
C10126514，纯度：≥99％）均购自上海麦克林生化科技 min，以 1 ℃/min 速度升温至 185 ℃，保持 3 min，最后以
公司；肌醇六乙酸酯对照品（单糖组成检测用内标，本实 2 ℃/min 速度升温至 210 ℃，保持 3 min；载气：氮气；氮
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验室自制 ，纯度：＞97％）；利巴韦林原料药（大连美仑 气流速：50 mL/min；氢气流速：30 mL/min；空气流速：50
生物技术有限公司，批号：J1202A，纯度：＞99％）；RP- mL/min；进样量：2.0 μL；进样方式：分流进样；分流比：
MI 1640细胞培养基、胰酶（美国Gibco公司，批号分别为 60∶1。
1662222、25300055）；胎牛血清（美国 Hyclone 公司，批 2.4 方法学考察
号：nxa0544）；MTT 试剂（美国 Ameresco 公司，批号： 2.4.1 精密度试验 取“2.2.2”项下金银花多糖衍生化
1046935）；其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 样品溶液（编号：S1），按“2.3”项下色谱条件连续进样 6
1.3 病毒 次，记录色谱图。以鼠李糖（3号峰）为参照，计算各共有
RSV标准病毒株由山东省立医院提供。 峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，12个共有峰相
1.4 细胞 对保留时间的 RSD 均小于 1％（n＝6），相对峰面积的
非洲绿猴肾细胞 Vero 由山东省医学科学院基础医 RSD均小于2％（n＝6），表明本方法精密度良好。
学研究所提供。 2.4.2 重复性试验 取“2.1”项下金银花多糖样品（编
2 方法与结果 号：S1）共 6 份，按“2.2.1”“2.2.2”项下方法制备多糖衍生
2.1 金银花多糖样品制备 化样品溶液，再按“2.3”项下色谱条件进样测定，记录色
称取金银花药材 50.0 g，加入 15 倍量（mL/g，下同） 谱图。以鼠李糖（3 号峰）为参照，计算各共有峰的相对
水，在 85 ℃下回流提取 2 h，重复 2 次。合并提取液，浓 保留时间和相对峰面积。结果，12个共有峰相对保留时
缩至一定体积，以3 500 r/min离心6 min，取上清液，加4 间的RSD均小于3％（n＝6），相对峰面积的RSD均小于
倍量无水乙醇，静置过夜；收集沉淀，加适量水复溶，再 4％（n＝6），表明本方法重复性良好。
用 4 倍量无水乙醇重复醇沉 1 次，收集沉淀。将上述沉 2.4.3 稳定性试验 取“2.2.2”项下金银花多糖衍生化
淀于 60 ℃真空干燥，即得金银花多糖样品（每 100 g 药 样品溶液（编号：S1），分别于室温放置 0、2、4、6、8、12、
材得金银花多糖样品5 g）。 24 h时按“2.3”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以
2.2 溶液的制备 鼠李糖（3 号峰）为参照，计算各共有峰的相对保留时间
2.2.1 多糖完全酸水解样品 精密称取按“2.1”项下方 和相对峰面积。结果显示，12个共有峰相对保留时间的
法制备的 S1～S12 金银花多糖样品各 10.00 mg，置于具 RSD 均小于 2％（n＝7），相对峰面积的 RSD 均小于 3％
塞试管中，加 2 mol/L 三氟乙酸溶液 6 mL，加塞封口，于 （n＝7），表明上述样品在室温放置24 h内稳定性良好。
110 ℃水解5 h后，于60 ℃下减压浓缩至干；残渣加少量 2.5 指纹图谱的建立及相似度分析
甲醇复溶，蒸干，重复5次操作，即得金银花多糖完全酸 取 12 批金银花药材，按“2.1”“2.2.1”“2.2.2”项下方
水解样品，备用。 法制备多糖及其衍生化样品溶液，再按“2.3”项下色谱条
2.2.2 多糖衍生化样品溶液 将“2.2.1”项下多糖完全 件进样测定，记录色谱图。将各样品的GC图谱导入《中
酸水解样品真空干燥 12 h 后，加盐酸羟胺 10 mg、吡啶 药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》中，设置S1
0.6 mL、肌醇六乙酸酯 1 mg，于 90 ℃搅拌反应 30 min； 样品的GC图谱为参照图谱，时间窗宽度为0.1 s，采用中
冷却，加醋酸酐 1.6 mL，于 90 ℃继续反应 30 min。反应 位数法生成对照图谱（R），进行全峰匹配，建立指纹图谱
液经 0.45 μm 微孔滤膜滤过后，用氯仿定容至 5 mL，即 （见图 1）。结果，共得到 12 个共有峰（色谱峰从左到右
得金银花多糖衍生化样品溶液，备用。 依次编号为 1～12 号）。将 GC 指纹图谱与混合单糖对
2.2.3 混合单糖对照品衍生化样品溶液 精密称取葡 照品衍生化样品的GC图谱（见图2）进行比对，根据保留
萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖、岩藻糖对照品 时间共指认出了 7 个色谱峰，其中 3 号峰为鼠李糖，4 号
各 5 mg，混合，加盐酸羟胺 30 mg、吡啶 1.8 mL、肌醇六 峰为阿拉伯糖，5 号峰为岩藻糖，9 号峰为甘露糖，10 号

中国药房 2020年第31卷第9期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 9 ·1063 ·