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min，冷却至室温后，再次称定质量，加 50％乙醇补足减
        失质量，以16层锥形滤纸（底部塞有脱脂棉）滤过，取续                            758.58
        滤液，即得供试品溶液，于4 ℃保存，备用。
                                                              547.33
        2.2 色谱条件
                                                             mV
            色谱柱：Shim-pack GIST C18 （4.6 mm×250 mm，5          U，  336.08
        µm）；流动相：乙腈（A）-0.05％磷酸水溶液（B），梯度洗                       124.83
        脱（0 min，3％A；8 min，10％A；20 min，25％A；30 min，
                                                             －86.42
        36％A；60 min，36％A）；柱温：30 ℃；流速：0.5 mL/min；                  0    8.70  17.39  26.09  34.79  43.49  52.18  60.88
        检测波长：203 nm；进样量：20 µL。                                                       t，min
                                                                                A. 2年生三七花样品
        2.3 方法学考察
        2.3.1  精密度试验      取“2.1.1”项下人参皂苷Rb3单一对
                                                              617.83
        照品溶液（该成分在三七花中含量相对较高，故用来进
        行方法学考察，下同）适量，按“2.2”项下色谱条件连续进                          442.15
        样测定 6 次，记录色谱图。结果，各色谱峰峰面积的                            mV  266.47
        RSD≤0.35％、保留时间的RSD≤0.38％（n＝6），表明仪                    U，
        器精密度良好。                                                90.79
        2.3.2  稳定性试验      取供试品溶液（批号：S3-1）适量，                 －84.89
                                                                  0    8.70  17.39  26.09  34.79  43.49  52.18  60.88
        分别于室温下放置 0、8、16、24 h 时，按“2.2”项下色谱条                                           t，min
        件进样测定，记录色谱图。结果，在 26～45 min 保留时                                          B. 3年生三七花样品
        间内（这一时间段色谱图上特征峰出峰较多，下同），各
        色 谱 峰 峰 面 积 的 RSD≤0.35％ 、保 留 时 间 的 RSD≤               611.74
        0.30％（n＝4）；同时，采用《中药色谱指纹图谱相似度评                         437.32
        价系统（2012 版 A）》进行相似度分析，结果不同时间点                        mV
        各色谱图的相似度≥0.97，表明供试品溶液在室温条件                           U，  262.91
        下放置24 h内稳定性良好。                                         88.50
        2.3.3  重复性试验      取三七花样品粉末（批号：S3-1）1
                                                             －85.92
        g，平行 6 份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，再按                          0    8.70  17.39  26.09  34.79  43.49  52.18  60.88
                                                                                     t，min
       “2.2”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果，在                                               C. 4年生三七花样品
        26～45 min 保留时间内，各色谱峰峰面积的 RSD≤                          注：19.人参皂苷 Re；21.人参皂苷 R1；28.人参皂苷 Rb1；31.人参皂
        0.30％、保留时间的RSD≤0.22％（n＝6）；同时，采用《中                  苷Rc；32.人参皂苷Rb2；33.人参皂苷Rb3；37.人参皂苷Rd
        药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版A）》进行相似                            Note：19. ginsenoside Re；21. ginsenoside R1；28. ginsenoside Rb1；
        度分析，结果不同样品各色谱图的相似度≥0.98，表明本                        31. ginsenoside Rc；32. ginsenoside Rb2；33. ginsenoside Rb3；37. ginsen-
        方法重复性良好。                                           oside Rd
        2.4  不同年限三七花 HPLC 指纹图谱生成与相似度                        图1   不同生长年限三七花样品的HPLC对照指纹图谱
        分析                                                 Fig 1  HPLC control fingerprints of P. notoginseng
            取不同生长年限的 30 批三七花样品粉末各 1 g，按                           flowers with different growing years
       “2.1.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2”项下色谱条                     间相似度≥0.825，2 年生与 4 年生样品之间相似度≥
        件进样测定，记录色谱图。将不同批次三七花样品的色                           0.817，3 年生与 4 年生样品之间相似度≥0.865。这表
        谱图 AIA 格式文件导出，依次全谱导入《中药色谱指纹                        明，不同生长年限三七花样品中化学成分类别大体接
        图谱相似度评价系统软件（2012 版 A）》中，生成指纹图                      近，但仍存在一定差异。
        谱的共有模式（R），即对照指纹图谱（见图1），再经软件                        2.5  不同生长年限三七花样品 HPLC 指纹图谱特征峰
        处理后建立不同生长年限三七花各 10 批样品的叠加指                         的指认
        纹图谱（见图2），同时进行相似度分析。                                    根据采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
            相似度分析结果显示，2年生、3年生、4年生三七花                       （2012版A）》对不同生长年限三七花各10批样品的色谱
        样品的指纹谱图在同年限 10 批间进行比较的相似度分                         图处理分析后生成的各生长年限三七花样品的对照指
        别≥0.823、≥0.847、≥0.830，平均相似度分别为 0.881、              纹图谱（见图1），确认了各生长年限三七花样品的36个
        0.952、0.945。这表明，同一生长年限的三七花样品之间                     共有色谱峰，并通过比各单一对照品溶液的主峰保留时
        的化学成分类别较为一致，相对较稳定。不同生长年限                           间，指认了不同生长年限三七花中共有的人参皂苷 Re、
        样品之间进行比较的结果显示，2 年生与 3 年生样品之                        R1、Rb1、Rc、Rb2、Rb3等 6 个共有成分以及 3 年生三七花


        中国药房    2020年第31卷第8期                                              China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 8  ·971  ·
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