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样品中的人参皂苷Rd。 Ⅱ类均为 4 年生三七花样品，第Ⅲ类均为 3 年生三七花
样品，而第Ⅰ、Ⅳ类多为2年生三七花样品以及少量3年
生、4年生三七花样品。
758.58
欧氏距离
547.33 0 5 10 15 20 25
S4-4
mV 336.08 S4-5
U， S2-7
S2-9
S2-6
124.83 S2-10
S2-4 Ⅰ
S2-8
－86.42 S2-5
0 8.70 17.39 26.09 34.79 43.49 52.18 60.88 S4-6
t，min S4-10
S4-8
A. 2年生三七花样品 S4-2
样品编号 S4-1 Ⅱ
S4-3
S4-7
617.83 S4-9
S3-1
S3-4
S3-5
442.15 S3-2
S3-8 Ⅲ
mV S3-9
S3-3
U， 266.47 S3-6
S2-2
S2-3
90.79
S2-1
S3-7
S3-10 Ⅳ
－84.89
0 8.70 17.39 26.09 34.79 43.49 52.18 60.88 图3 30批三七花样品的聚类分析树状图
t，min
B. 3年生三七花样品 Fig 3 Cluster analysis dendrogram of 30 batches of P.
notoginseng flowers
1 176.45
3 不同生长年限三七花样品中4种人参皂苷的含
860.75 量测定
mV 基于 30 批三七花样品的指纹图谱研究结果及已有
U， 545.04
相关对照品，本研究选择色谱峰面积相对较大、含量相
229.34
对较高的人参皂苷 Rb1、Rb2、Rb3、Rc 等 4 种成分进行含
－86.37 量测定，比较不同生长年限三七花样品中上述成分的含
0 8.70 17.39 26.09 34.79 43.49 52.18 60.88
t，min 量差异。
C. 4年生三七花样品 3.1 溶液的制备
图2 不同生长年限三七花样品的HPLC叠加指纹图谱 3.1.1 对照品溶液 精密称取人参皂苷 Rb1、Rb2、Rb3、
Fig 2 HPLC superimposed fingerprints of P. notogin- Rc 对照品各适量，加 50％乙醇溶解制成每 1 mL 分别含
seng flowers with different growing years 上述成分 0.551、0.475、0.510、0.530 mg 的单一对照品溶
由图 1 可见，2 年生三七花样品中大部分色谱峰面 液，4 ℃低温保存，备用。
积都较 3 年生、4 年生三七花样品小；2 年生、4 年生三七 3.1.2 供试品溶液 按照“2.1.2”项下方法制备供试品
花色谱图中都有很小的 5 号峰，而在 3 年生三七花中未 溶液，于4 ℃保存，备用。
见该色峰；与3年生三七花比较，4年生三七花色谱图中 3.2 色谱条件及系统适用性试验
6、7、18、32、37 号峰有变小的趋势。各年限三七花的成 采用“2.2”项下色谱条件进样测定。取“3.1.2”项下
分种类较为一致，而各成分峰面积大小存在明显差异，3 供试品溶液（批号：S3-1）进样测定，记录色谱图（见图
年生、4 年生三七花样品的对照指纹图谱中色谱峰数目 4），并与“3.1.1”项下单一对照品溶液和空白溶剂色谱图
较多、峰面积较大，而2年生三七花样品对照指纹图谱中 （图略）进行对比。结果，理论板数以人参皂苷 Rb3计不
色谱峰数目略少、峰面积较小。根据对照指纹图谱可以 低于 6 000，4 种待测人参皂苷的色谱峰分离度均大于
初步认为，3年生、4年生三七花样品中各成分含量相对 1.5，空白溶剂无干扰，表明本色谱条件系统适用性良好。
较高，2年生样品各成分含量略低。 3.3 方法学考察
2.6 不同生长年限三七花样品指纹图谱的聚类分析 3.3.1 线性关系与定量限考察 取“3.1.1”项下人参皂
采用SPSS 22.0软件对不同生长年限三七花样品的 苷 Rb1、Rb2、Rb3、Rc 各单一对照品溶液，经 0.45 µm 微孔
原始指纹图谱进行聚类分析，以平方欧式距离作为样品 滤膜滤过，按“3.2”项下色谱条件分别进样 4、8、12、16、
的测度，以 Ward 连接法进行聚类，结果见图 3。聚类分 20、24、28 µL，以峰面积（y）为纵坐标、进样量（x，µg）为
析结果显示，30 批三七花样品可聚为 4 个类别，其中第 横坐标进行线性回归。结果，上述4种人参皂苷在相应

·972 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 8 中国药房 2020年第31卷第8期