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表7 醇沉工艺正交试验设计与结果 稳定、可行。
Tab 7 Orthogonal experiment design and results of 2.5 药效学实验比较柏金颗粒提取工艺醇沉处理前后
ethanol precipitation technology 的差异

因素 测定结果 取小鼠40只，随机分为阴性对照组、模型组、阳性对
试验号
A，g/mL B，％ C，h D（空白） 浸膏得率，％ 岩白菜素含量，mg/g 照组、水提物组、水提醇沉物组，每组 8 只。按照“2.2.3”
1 1 1 1 1 12.72 3.594
2 1 2 2 2 12.26 3.238 下方法进行造模和给药。其中，水提物组灌胃剂量为
3 1 3 3 3 10.65 2.972 4.52 g/kg，水提醇沉物组大鼠灌胃剂量为2.39 g/kg（均以
4 2 1 2 3 11.64 3.584 提取物计算，按不同工艺得率换算后相当于等量生药
5 2 2 3 1 10.88 3.104
6 2 3 1 2 11.03 3.641 材），灌胃体积均为 10 mL/（kg·d）。同法测定大鼠血清
7 3 1 3 2 11.21 3.261 中尿酸水平并进行统计学比较，结果见表9。
8 3 2 1 3 11.19 3.541
9 3 3 2 1 10.67 3.699 表9 醇沉前后所得提取物对高尿酸模型小鼠血清尿酸
浸膏得率 x1 11.88 11.86 11.65 11.42 水平的影响（x±±s，n＝8）
11.18 11.44 10.52 11.50
x2 Tab 9 Effects of the extracts on serum uric acid levels
11.02 10.78 10.91 11.16
x3
R 0.854 1.074 0.734 0.340 in hyperuricemia model mice before and after
3.268 3.480 3.692 3.466
岩白菜素含量 x1 ethanol precipitation（x±±s，n＝8）
3.443 3.294 3.507 3.380
x2
3.500 3.437 3.112 3.366 组别 小鼠血清尿酸水平，μmol/L 组别 小鼠血清尿酸水平，μmol/L
x3 ##
R 0.094 0.117 0.121 0.060 阴性对照组 37.956±37.956 水提物组 45.742±38.929
模型组 88.008±25.860 ＊＊ 水提醇沉物组 38.790±51.721 ##
表8 醇沉工艺正交试验方差分析结果 阳性对照组 25.304±18.491 ##
Tab 8 Variance analysis results of orthogonal test of 注：与阴性对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.01
##
＊＊
ethanol precipitation technology Note：vs. negative control group， P＜0.01；vs. model group，P＜
##
＊＊
项目 方差来源 偏差平方和 自由度 均方 F P 0.01
浸膏得率 A 1.234 2 0.617 6.469 ＞0.05 由表9可知，与阴性对照组比较，模型组小鼠血清尿
B 1.758 2 0.879 9.215 ＞0.05 酸水平显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组小
C 0.925 2 0.463 4.848 ＞0.05
D（误差） 0.191 2 0.095 1.000 ＞0.05 鼠血清尿酸水平均显著降低（P＜0.01），且水提物组与
岩白菜素含量 A 0.088 2 0.044 5.010 ＞0.05 水提醇沉物组小鼠尿酸水平比较差异无统计学意义
B 0.057 2 0.028 3.226 ＞0.05
C 0.393 2 0.197 22.404 ＜0.05 （P＞0.05），即醇沉处理后提取物药效并未受到影响，因
D（误差） 0.007 2 0.004 1.000 ＞0.05 此选择水提醇沉法作为本方的最佳提取工艺。
由表 7、表 8 可见，以浸膏得率为考察指标，各因素 3 讨论
影响作用大小排序为B＞A＞C，但这3个因素对醇沉效 3.1 药效学模型的建立
果的影响均无统计学意义（P＞0.05）；以岩白菜素含量 本研究在前期药效学预实验中尝试过不同造模剂
为考察指标，各因素影响作用大小排序为 C＞A＞B，其 诱导的高尿酸血症小鼠模型 [23-24] ：腺嘌呤联合乙胺丁醇、
中因素C对醇沉效果的影响有统计学意义（P＜0.05），而 次黄嘌呤联合氧嗪酸钾、酵母膏联合氧嗪酸钾；也比较
因素 A、B 的影响则无统计学意义（P＞0.05）。综合考 过诱导7 d和诱导14 d对小鼠尿酸水平的影响。经过对
虑，优选出最佳醇沉工艺为 A2B1C1，即水提液浓缩至相 比后发现，酵母膏联合氧嗪酸钾诱导 7 d 可复制出较为
对密度为 1.0 g/mL，药液含醇量为 60％，醇沉时间为 稳定的高尿酸小鼠模型，且对小鼠肾功能影响较小，因
12 h。 此本研究最终选择酵母膏灌胃联合氧嗪酸钾腹腔注射
2.4.3 醇沉工艺验证 按照处方比例，称取药材混合物 的造模方法。
100 g，按“2.3”项下优选的最佳水提工艺进行提取后，再 3.2 工艺优化中评价指标的选择
按“2.4.2”优选的最佳醇沉工艺进行醇沉处理后，抽滤， 柏金方中含有黄酮类、生物碱类、香豆素类等多种
将滤液旋转减压蒸发浓缩至清膏后转入已称定质量的 类型化学成分 [25-27] ，但是有关其治疗高尿酸血症的有效
蒸发皿中，在80 ℃下烘干成干浸膏，置于干燥器中冷却 成分研究较少。根据文献记载，目前比较明确的是矮地
1 h，称定质量，计算浸膏得率并按“2.1.11”项下方法测定 茶中的岩白菜素和土茯苓中的落新妇苷为降尿酸的主
岩白菜素含量。平行操作3次。结果，平均浸膏得率为 要有效成分 ，二者对黄嘌呤氧化酶均有抑制活性，能促
[7]
11.01％（RSD＝1.77％，n＝3），平均岩白菜素含量为 进肾脏尿酸排泄、改善肾功能，而黄嘌呤氧化酶是尿酸
3.634 mg/g（RSD＝1.60％，n＝3），表明优选的醇沉工艺 生成的关键酶 [8，28] 。然而前期研究发现，本方中含有落

·924 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 8 中国药房 2020年第31卷第8期