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花酸干预后细胞多为死菌，生物膜结构被破坏。变异链 100
球菌生物膜激光共聚焦扫描图见图2。 90
％ 80 ＊＊
对水不溶性EPS抑制率， 60 ＊＊
70
50
鞣花酸组 40 ＊＊
30
20
10 ＊＊
0
阴性1/8MIC1/4MIC 1/2MIC MIC
对照 鞣花酸
阴性对照组 A.水不溶性EPS

100
90
％ 80
SYTO9染色图 PI染色图 叠加图 70
图2 变异链球菌生物膜激光共聚焦扫描图 60
Fig 2 Confocal laser scanning micrograms of S. mu- 对水不溶性EPS抑制率， 50 ＊＊
tans biomembrane 40
30
3.5 细菌中EPS生成抑制率测定结果 20 ＊＊ ＊＊
10 ＊＊
结果显示，鞣花酸对变异链球菌中水不溶性EPS和 0
阴性 1/8MIC1/4MIC 1/2MIC MIC
水溶性EPS的生成均有显著抑制作用，不同质量浓度鞣 对照
鞣花酸
花酸对 2 种多糖的生成抑制率均较阴性对照显著升高 B.水溶性EPS
（P＜0.01），且该抑制作用随着鞣花酸质量浓度的增大
＊＊
注：与阴性对照比较， P＜0.01
而增强，但鞣花酸对变异链球菌水不溶性EPS的抑制作 Note：vs. negative control， P＜0.01
＊＊
用强于其对水溶性 EPS 的抑制作用。EPS 的生成抑制 图3 EPS的生成抑制率测定结果
率测定结果见图3。 Fig 3 Inhibitory rate of bacterial EPS
3.6 细菌细胞外基质中LDH活力的测定结果 0.6
结果显示，不同质量浓度鞣花酸作用后，细菌细胞
0.5
外基质中LDH活力均有所提高，且呈剂量依赖趋势。与
阴性对照组比较，1/4MIC、1/2MIC、MIC 鞣花酸组细菌 U/mL 0.4
细胞外基质中 LDH 活力均显著升高（P＜0.01）。LDH LDH活力， 0.3 ＊＊
活力测定结果见图4。 0.2 ＊＊ ＊＊
4 讨论 0.1
龋病是口腔内的慢性多因素疾病，寻找安全、有效、 ＊＊
0
经济的防龋药品一直是龋病防治研究的重点 。天然 阴性对 1/8MIC 1/4MIC 1/2MIC MIC
[12]
照组
鞣花酸组
药物因其毒副作用小、取材方便和经济等特点，在龋病
＊＊
注：与阴性对照组比较， P＜0.01
[13]
防治中的作用日益受到重视 。细菌的存在是龋病发 Note：vs. negative control group， P＜0.01
＊＊
生的第一要素，细菌在口腔中的存在形式主要为生物膜 图4 细胞外基质中LDH活力测定结果
状态，当浮游细菌黏附团聚形成生物膜后，能快速适应 Fig 4 LDH activity in extracellular matrix
新的生长环境，这种由细菌和基质搭建的紧密生物膜结
还具有生物屏障作用，可以限制生物膜内外各种物质的
构，成为了阻碍药物穿透的有力屏障 。在这种状态
[14]
出入 。水溶性EPS是细菌在生物膜内的能量补充剂，在
[16]
下，生物膜结构的细菌比浮游状态下的同种细菌耐药性
外源性糖缺乏时，其可以降解成单糖而提供能量 。
[6]
更强，并且其致毒力和对抗宿主免疫防御的能力也更
强 。因此，在研究中除了研究浮游状态下细菌的生长 LDH以高浓度存在于细菌细胞内，是变异链球菌中的固
[15]
[17]
变化外，对于生物膜状态下细菌的生长、代谢的研究显 有酶，可以调节细菌的酸代谢 。由于LDH主要存在细
得更加重要。EPS 是细菌以蔗糖为底物分泌出的紧密 菌细胞内，故可以通过测定细胞外基质中LDH活力来判
[18]
围绕菌体细胞的荚膜或者黏质层，可以参与生物膜的基 定药物对细菌细胞壁及细胞膜的影响 ，从而推测药物
质组成。其中，水不溶性EPS能够促进细菌的蔗糖依赖 可能的抑菌机制。因此，关于药物对口腔内致龋细菌的
性细胞黏附，加快生物膜的形成和龋病的发展；并且，其 作用研究需要从药物对细菌的生长、生物膜的形成、代
·610 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 5 中国药房 2020年第31卷第5期