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用小动物呼吸机机械通气并行心电监护;经左侧开胸, 值,用以表示目标蛋白的相对表达量。
暴露心脏,结扎左心室回旋支末梢,直至观察到结扎下 2.8 统计学方法
方心肌颜色逐渐变灰白(缺血区)及心电图出现S-T段抬 采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。计数资
高0.2 mm或者出现增高、增宽的QRS波后,用生理盐水 料以率(%)表示,两组间比较采用卡方检验。计量资料
浸湿的纱布覆盖于伤口处;缺血 30 min 后剪开结扎线, 以 x±s 表示,多组间比较采用单因素方差分析;对差异
观察直至心脏颜色由灰白逐渐变成正常、心电图 S-T 段 有统计学意义的再采用 Bartlett 检验进行两组间方差齐
下降,则视为再灌注开始;再灌注 60 min 后,缝合切口, 性检验,若方差齐则采用LSD-t检验进行组间两两比较,
置于笼中饲养。于所有大鼠的大腿处肌内注射青霉素 若方差不齐则采用非参数秩和检验。P<0.05为差异有
钠80万单位(每日1次,连续3 d)以预防感染。术后第1 统计学意义。
天起,对照组、模型组大鼠均灌胃等体积水,壮通饮水提 3 结果
物低、中、高剂量组大鼠分别按体质量以 6.8、13.6、27.2 3.1 各组大鼠心律失常情况
与对照组比较,模型组大鼠术后第7、14、21、28天时
g/kg(以浸膏质量计,剂量参考文献[8]设置)灌胃给药,
心律失常发生率均显著升高,分别为 87%、87%、80%、
每日1次,连续28 d。
73%(P<0.01)。与模型组比较,壮通饮水提物中、高剂
2.3 大鼠心律失常情况观察
量组大鼠在术后第 14、21、28 天时心律失常发生率均显
分别在术后第 7、14、21、28 天时使用心电图机记录
著降低(P<0.05或P<0.01),详见表1。
大鼠心律失常发生情况,并计算发生率。
表1 各组大鼠的心律失常发生率比较(x±±s,n=15)
2.4 大鼠血液流变学指标检测
Tab 1 Comparison of the incidence of arrhythmia of
于末次给药后 4 h 开始,分离大鼠颈动脉并放置刺
rats in each group(x±±s,n=15)
激电极和记录电极,采用血栓检测仪测定体内血栓的形
心律失常,只(%)
成时间;测定完毕后,于其腹主动脉采血,采用血流变测 组别
术后第7天 术后第14天 术后第21天 术后第28天
试仪测定其全血比黏度(低切变率、高低变率)、血细胞 对照组 0 0 0 0
比容(HCT)、体内血栓形成时间、体外形成血栓长度和 模型组 13(87) ** 13(87) ** 12(80) ** 11(73) **
壮通饮水提物低剂量组 13(87) 12(80) 10(67) 10(67)
质量、血小板聚集率、红细胞滤过指数(IF)。 壮通饮水提物中剂量组 11(73) 7(47) # 5(33) # 2(13) ##
2.5 大鼠血清血脂指标含量检测 壮通饮水提物高剂量组 10(67) 7(47) # 7(47) # 6(40) #
**
##
#
按“2.4”项下时间点于大鼠腹主动脉采血,以 4 000 注:与对照组比较, P<0.01;与模型组比较,P<0.05,P<0.01
#
r/min离心10 min后取血清。采用全自动生化分析仪以 Note:vs. control group, * * P<0.01;vs. model group,P<0.05,
## P<0.01
分光光度法检测 TC、TG、LDL-C、HDL-C 含量。严格按
3.2 大鼠血液流变学指标检测结果
相应试剂盒说明书操作。
3.2.1 全血比黏度和HCT 与对照组比较,模型组大鼠
2.6 大鼠心肌组织形态学变化观察
全血比黏度、HCT均显著升高(P<0.01或P<0.05)。与
按“2.4”项下时间点于大鼠腹主动脉采血后,取大鼠
模型组比较,除壮通饮水提物低剂量组大鼠HCT的降低
左心室心尖部分组织,以生理盐水洗净,于4%多聚甲醛
不具有统计学意义外(P>0.05),壮通饮水提物其余各
溶液中固定24 h;常规梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡
剂量组的上述指标均显著降低(P<0.01或P<0.05),且
包埋、切片(厚度 5 μm),常规脱蜡复水后,进行苏木精- 与对照组指标水平较为接近,详见表2。
伊红(HE)染色;梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶 表2 各组大鼠全血比黏度和HCT比较(x±±s,n=15)
封片,置于显微镜下观察心肌组织形态学变化并拍照。 Tab 2 Comparison of blood viscosity and HCT of rats
2.7 大鼠心肌组织中FAS和FAS-L蛋白相对表达量检测 in each group(x±±s,n=15)
采用 Western blotting 法进行检测。按“2.6”项下时 全血比黏度,cm/s
组别 HCT,%
间点取大鼠左心室心尖部分组织,加入5倍体积(g/mL) 低切变率 高切变率
对照组 15.17±1.86 10.35±2.26 32.48±8.24
的裂解液冰浴裂解 30 min;4 ℃下以 12 000 r/min 离心
模型组 68.11±3.26 ** 49.02±5.68 * 56.02±11.03 *
20 min,取上清液,经蛋白定量、变性、聚丙烯酰氨凝 壮通饮水提物低剂量组 26.13±2.86 # 18.24±3.83 # 44.06±10.86
胶电泳、转膜、封闭后加入 FAS、FAS-L、β-actin 一抗 壮通饮水提物中剂量组 22.29±2.16 ## 16.55±3.76 # 33.06±8.79 #
壮通饮水提物高剂量组 24.32±2.65 ## 15.22±3.43 # 37.45±9.29 #
(1 ∶ 600),4 ℃孵育过夜;再加入二抗(1 ∶ 2 000),室温下
#
*
* *
注:与对照组比较, P<0.05, P<0.01;与模型组比较,P<
孵育 1 h,增强化学发光法显影;采用凝胶系统拍摄图
0.05,P<0.01
##
像。采用Image J 1.48图像分析软件分析所得蛋白条带 Note:vs. control group, P<0.05, P<0.01;vs. model group,
* *
*
的灰度值(条带面积×条带密度),并以β-actin 为内参对 # P<0.05,P<0.01
##
照,计算各目标蛋白灰度值与β-actin 条带灰度值的比 3.2.2 其他血液流变学指标 与对照组比较,模型组大
·410 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 4 中国药房 2020年第31卷第4期