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用小动物呼吸机机械通气并行心电监护;经左侧开胸,                            值,用以表示目标蛋白的相对表达量。
        暴露心脏,结扎左心室回旋支末梢,直至观察到结扎下                            2.8 统计学方法
        方心肌颜色逐渐变灰白(缺血区)及心电图出现S-T段抬                              采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。计数资
        高0.2 mm或者出现增高、增宽的QRS波后,用生理盐水                        料以率(%)表示,两组间比较采用卡方检验。计量资料
        浸湿的纱布覆盖于伤口处;缺血 30 min 后剪开结扎线,                       以 x±s 表示,多组间比较采用单因素方差分析;对差异
        观察直至心脏颜色由灰白逐渐变成正常、心电图 S-T 段                         有统计学意义的再采用 Bartlett 检验进行两组间方差齐
        下降,则视为再灌注开始;再灌注 60 min 后,缝合切口,                      性检验,若方差齐则采用LSD-t检验进行组间两两比较,
        置于笼中饲养。于所有大鼠的大腿处肌内注射青霉素                             若方差不齐则采用非参数秩和检验。P<0.05为差异有
        钠80万单位(每日1次,连续3 d)以预防感染。术后第1                        统计学意义。
        天起,对照组、模型组大鼠均灌胃等体积水,壮通饮水提                           3 结果
        物低、中、高剂量组大鼠分别按体质量以 6.8、13.6、27.2                    3.1 各组大鼠心律失常情况
                                                                与对照组比较,模型组大鼠术后第7、14、21、28天时
        g/kg(以浸膏质量计,剂量参考文献[8]设置)灌胃给药,
                                                            心律失常发生率均显著升高,分别为 87%、87%、80%、
        每日1次,连续28 d。
                                                            73%(P<0.01)。与模型组比较,壮通饮水提物中、高剂
        2.3 大鼠心律失常情况观察
                                                            量组大鼠在术后第 14、21、28 天时心律失常发生率均显
            分别在术后第 7、14、21、28 天时使用心电图机记录
                                                            著降低(P<0.05或P<0.01),详见表1。
        大鼠心律失常发生情况,并计算发生率。
                                                             表1 各组大鼠的心律失常发生率比较(x±±s,n=15)
        2.4 大鼠血液流变学指标检测
                                                            Tab 1 Comparison of the incidence of arrhythmia of
            于末次给药后 4 h 开始,分离大鼠颈动脉并放置刺
                                                                   rats in each group(x±±s,n=15)
        激电极和记录电极,采用血栓检测仪测定体内血栓的形
                                                                                     心律失常,只(%)
        成时间;测定完毕后,于其腹主动脉采血,采用血流变测                           组别
                                                                        术后第7天     术后第14天  术后第21天    术后第28天
        试仪测定其全血比黏度(低切变率、高低变率)、血细胞                           对照组           0        0        0        0
        比容(HCT)、体内血栓形成时间、体外形成血栓长度和                          模型组          13(87) **  13(87) **  12(80) **  11(73) **
                                                            壮通饮水提物低剂量组   13(87)   12(80)   10(67)   10(67)
        质量、血小板聚集率、红细胞滤过指数(IF)。                              壮通饮水提物中剂量组   11(73)    7(47) #  5(33) #  2(13) ##
        2.5  大鼠血清血脂指标含量检测                                   壮通饮水提物高剂量组   10(67)    7(47) #  7(47) #  6(40) #
                                                                            **
                                                                                                     ##
                                                                                              #
            按“2.4”项下时间点于大鼠腹主动脉采血,以 4 000                       注:与对照组比较, P<0.01;与模型组比较,P<0.05,P<0.01
                                                                                                     #
        r/min离心10 min后取血清。采用全自动生化分析仪以                          Note:vs. control group, * *  P<0.01;vs. model group,P<0.05,
                                                            ## P<0.01
        分光光度法检测 TC、TG、LDL-C、HDL-C 含量。严格按
                                                            3.2  大鼠血液流变学指标检测结果
        相应试剂盒说明书操作。
                                                            3.2.1  全血比黏度和HCT        与对照组比较,模型组大鼠
        2.6  大鼠心肌组织形态学变化观察
                                                            全血比黏度、HCT均显著升高(P<0.01或P<0.05)。与
            按“2.4”项下时间点于大鼠腹主动脉采血后,取大鼠
                                                            模型组比较,除壮通饮水提物低剂量组大鼠HCT的降低
        左心室心尖部分组织,以生理盐水洗净,于4%多聚甲醛
                                                            不具有统计学意义外(P>0.05),壮通饮水提物其余各
        溶液中固定24 h;常规梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡
                                                            剂量组的上述指标均显著降低(P<0.01或P<0.05),且
        包埋、切片(厚度 5 μm),常规脱蜡复水后,进行苏木精-                       与对照组指标水平较为接近,详见表2。
        伊红(HE)染色;梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶                           表2   各组大鼠全血比黏度和HCT比较(x±±s,n=15)
        封片,置于显微镜下观察心肌组织形态学变化并拍照。                            Tab 2 Comparison of blood viscosity and HCT of rats
        2.7 大鼠心肌组织中FAS和FAS-L蛋白相对表达量检测                              in each group(x±±s,n=15)
            采用 Western blotting 法进行检测。按“2.6”项下时                                全血比黏度,cm/s
                                                            组别                                      HCT,%
        间点取大鼠左心室心尖部分组织,加入5倍体积(g/mL)                                        低切变率        高切变率
                                                            对照组           15.17±1.86  10.35±2.26  32.48±8.24
        的裂解液冰浴裂解 30 min;4 ℃下以 12 000 r/min 离心
                                                            模型组           68.11±3.26 **  49.02±5.68 *  56.02±11.03 *
        20 min,取上清液,经蛋白定量、变性、聚丙烯酰氨凝                         壮通饮水提物低剂量组    26.13±2.86 #  18.24±3.83 #  44.06±10.86
        胶电泳、转膜、封闭后加入 FAS、FAS-L、β-actin 一抗                   壮通饮水提物中剂量组    22.29±2.16 ##  16.55±3.76 #  33.06±8.79 #
                                                            壮通饮水提物高剂量组    24.32±2.65 ##  15.22±3.43 #  37.45±9.29 #
        (1 ∶ 600),4 ℃孵育过夜;再加入二抗(1 ∶ 2 000),室温下
                                                                                                         #
                                                                             *
                                                                                     * *
                                                               注:与对照组比较, P<0.05, P<0.01;与模型组比较,P<
        孵育 1 h,增强化学发光法显影;采用凝胶系统拍摄图
                                                            0.05,P<0.01
                                                                ##
        像。采用Image J 1.48图像分析软件分析所得蛋白条带                         Note:vs. control group, P<0.05, P<0.01;vs. model group,
                                                                                       * *
                                                                                *
        的灰度值(条带面积×条带密度),并以β-actin 为内参对                      # P<0.05,P<0.01
                                                                   ##
        照,计算各目标蛋白灰度值与β-actin 条带灰度值的比                        3.2.2  其他血液流变学指标          与对照组比较,模型组大
        ·410  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 4                                   中国药房    2020年第31卷第4期
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