Page 39 - 2020年2月第31卷第3期
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干燥根。黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂                          制的烘制黄芪粉末各约 1 g，精密称定，分别置于 50 mL
        苷Ⅳ、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素                          具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声（功
        对照品（成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-                         率：250 W，频率：40 kHz）1 h，取出放至室温，再次称定
        16012906、MUST-16031010、MUST-16090204、MUST-         质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，溶液经 0.22 μm 微
        16022804、MUST-16031205、MUST-16120911、MUST-         孔滤膜滤过，取续滤液，即得           [9-10] 。
        16031111、MUST-16031005，纯度均不低于 98％）；2′-羟            2.4.2  对照品溶液       精密称取黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷
        基-3′，4′-二甲氧基异黄烷葡萄糖苷（黄芪异黄烷苷）、7，                     Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄
        2′-二羟基-3′，4′-二甲氧基异黄烷（黄芪异黄烷）对照品                     酮、芒柄花苷、芒柄花素、黄芪异黄烷苷、黄芪异黄烷、黄
       （成都普菲德生物技术有限公司，批号：160217、160816，                    芪紫檀烷苷、黄芪紫檀素各对照品适量，用甲醇溶解并
        纯度均不低于 98％）；9，10-二甲氧基紫檀烷葡萄糖苷                       制成质量浓度分别为 0.116 3、0.138 2、0.110 1、0.112 5、
       （黄芪紫檀烷苷）对照品（上海普誉科贸有限公司，批号：                          0.293 6、0.117 2、0.148 4、0.130 1、1.193、1.191、1.135、
        16112732，纯度：≥98％）；3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀烷                1.008 g/L的对照品贮备液。取上述各贮备液等量，以甲
       （黄芪紫檀素）对照品（上海源叶生物科技有限公司，批                           醇制备成8种黄酮类成分（毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、
        号：Y29D7H27839，纯度：≥98％）；甲酸、甲醇、乙腈均为                  芒柄花苷、芒柄花素、黄芪异黄烷苷、黄芪异黄烷、黄芪
        色谱纯，水为超纯水。                                         紫檀烷苷和黄芪紫檀素）的混合对照品溶液 1 以及 4 种
        2 方法与结果                                            黄芪皂苷类成分（黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）的混合对照品

        2.1 色谱条件                                           溶液 2。将以上溶液 4 ℃贮藏备用，使用时用甲醇稀释
            参考文献[5-6]设置色谱条件。色谱柱为 ACQUI-                    至所需质量浓度即可。
                                                           2.5  线性关系考察
        TY UPLC HSS T3 （100 mm×2.1 mm，1.8 μm），预柱为
                                                               精密吸取混合对照品溶液 1、混合对照品溶液 2 适
        ACQUITY UPLC HSS T3 （5 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流动
                                                           量，制备成 5 个质量浓度梯度的混合对照线性溶液，按
        相为 0.1％甲酸水溶液（A）-0.1％甲酸乙腈溶液（B），梯
                                                          “2.1”“2.2”项下条件进行测定，记录峰面积，以各对照品
        度洗脱（0～5 min，18％B→30％B；5～8 min，30％B→
                                                           的进样量（μg）为横坐标（x）、峰面积为纵坐标（y）绘制标
        36％B；8～10 min，36％B；10～12 min，36％B→40％B；
                                                           准曲线。结果表明，各对照品的进样量与峰面积均呈良
        12～13 min，40％B→48％B；13～15 min，48％B→70％
                                                           好的线性关系。黄芪中 12 种成分的标准曲线及线性范
        B；15～16 min，70％ B→90％ B；16～19 min，100％ B；
                                                           围见表1。
        19～22 min，18％B）；检测波长为 260 nm；流速为 0.5
                                                               表1 黄芪中12种成分的标准曲线及线性范围
        mL/min；柱温为30 ℃；进样量为2 μL。
                                                           Tab 1 Standard curves and linear range of 12 compo-
        2.2  MS条件
                                                                  nents in A. membranaceus
            采用电喷雾离子源（ESI），在正离子模式下（ESI ）
                                                      +
                                                           成分              标准曲线             R 2   线性范围，μg
        进行监测扫描，扫描范围为质菏比（m/z）50～1 500；离子
                                                           黄芪皂苷Ⅰ      y＝5 963 279.093 2x+7 527.185 3  0.999 9  0.001 16～0.232
        源温度为 100 ℃；毛细管电压为 2 000 V；脱溶剂温度为                   黄芪皂苷Ⅱ      y＝7 967 977.702 7x－2 408.055 2  0.999 8  0.000 276～0.055 2
                                                           黄芪皂苷Ⅲ      y＝10 680 459.186 4x+532.514 0  0.999 3  0.000 22～0.044 0
        400 ℃；雾化气（N2 ）流速为40 L/h，脱溶剂气（N2 ）流速为
                                                           黄芪皂苷Ⅳ      y＝8 727 882.226 6x+3 395.831 8  0.999 2  0.000 225～0.045 0
        800 L/h；碰撞能量（CE）为 20～30 V，数据采集速率为                  毛蕊异黄酮苷     y＝1 748 801.286 2x+1 862.222 6  0.999 9  0.000 734～0.587
        0.5 s/scan。采用质量锁定（Lock-Mass）技术以亮氨酸-                毛蕊异黄酮      y＝10 172 803.189 8x+14 783.270 6  0.999 9  0.001 17～0.234
                                                           芒柄花苷       y＝2 904 222.824 9x+4 069.706 5  0.999 4  0.000 742～0.148
        脑啡肽（LE，ESI ：m/z 556.277 1）调谐液作为校正溶液，               芒柄花素       y＝7 009 131.058 6x－17 874.841 2  0.999 7  0.001 30～0.260
                      +
        时时校正确保质量数的准确测定，其流速为10 μL/min，                      黄芪异黄烷苷     y＝414 192.176 9x－959.788 5  0.999 6  0.003 98～0.795
                                                           黄芪异黄烷      y＝3 265 080.835 7x－6 483.105 5  0.999 8  0.000 476～0.476
        切换频率为20 s/次     [7-8] 。
                                                           黄芪紫檀烷苷     y＝430 966.634 8x－492.121 2  0.999 7  0.001 89～0.378
        2.3 黄芪样品的制备                                        黄芪紫檀素      y＝12 339 367.482 0x+5 388.947 9  0.999 8  0.000 336～0.336
            生黄芪：取净制黄芪 20 g，粉碎，过 65 目筛，备用。                  2.6 检测限与定量限考察
        烘制黄芪：取净制黄芪 5 份，每份 20 g，分别在 120、140、                    精密量取“2.4.2”项下混合对照品溶液 1、混合对照
        160、180、200 ℃温度下烘制30 min，取出，放凉，粉碎，过                品溶液 2 适量，以甲醇倍比稀释，然后按“2.1”“2.2”项下
        65目筛，备用。                                           条件连续进样测定6次，记录峰面积。当信噪比为3 ∶ 1、
        2.4  溶液的制备                                         10∶1时分别得检测限、定量限。结果显示，黄芪皂苷Ⅰ、
        2.4.1  供试品溶液      称取生黄芪和不同温度下模拟炮                   黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ、毛蕊异黄酮苷、


        中国药房    2020年第31卷第3期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 3  ·289  ·
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