Page 75 - 2020年1月第31卷第2期

0.01）. The acute toxicity test indicated that oral MTD was over 15 g/kg，which was non-toxic. CONCLUSIONS：The optimal
proportion extract of CGIF can significantly enhance the immune function of mice and are non-toxic.
KEYWORDS Ginseng immune-enhancing formula；Couplet medicine；Uniform design method；Mice；Immune function；Acute
toxicity

免疫力是人体自身的一种主动防御机制，对维持生 Hank’s 液、RPMI1640 细胞培养液、台盼蓝染色剂、2-巯
理和生命活动具有十分重要的意义。在正常生理情况 基乙醇、青霉素、链霉素、磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）、
下，机体的免疫系统依赖其先天具有的固有免疫和后天 水杨酸（SA）缓冲液、都氏试剂、Giemsa 染液、豚鼠血清
获得的适应性免疫共同发挥免疫作用，使机体的生理功 均购自北京索莱宝科技有限公司；NO 检测试剂盒以及
能保持在相对稳定的状态；若机体免疫功能出现异常将 IL-6、TNF-α、IL-2、血清免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA）酶联
会导致如过敏反应、自身免疫性疾病等不良后果，免疫 免疫吸附（ELISA）试剂盒均购自北京博奥森生物技术
力低下的人群更容易受到疾病的侵袭 [1-2] 。因此，研究开 公司；盐酸、异丙醇、丙酮、甲醇等试剂均购自北京化工
发安全、高效的具有免疫调节功效的药物以提高人们的 厂；其余试剂均为分析纯或实验室常用规格；水为蒸
免疫力，具有重要的临床意义。 馏水。
中医药临床及实验研究证明，人参、黄芪、灵芝、枸 1.3 药材饮片
杞、当归、黄精、川芍等多种中药具有良好的免疫调节作 人参饮片（批号：20170328）购自吉林省仙草医药药
用，可调节机体免疫过程的多个环节 [3-7] 。多种中药活性 材有限公司；黄芪饮片（批号：20170605）、枸杞饮片（批
成分均具有免疫调节作用，包括糖类、苷类、生物碱类、 号：20170713）、黄精饮片（批号：20171026）均购自酒泉
挥发油类、有机酸类等 [8-12] 。复方人参免疫增强方是本 市培丰中药材有限公司。
课题组与长春中医药大学附属医院多位免疫学、中药学 1.4 细胞
等领域的专家共同协商，根据中医临床经验及相关文献 小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞株购自长沙赢润生
组方而得的方剂 [13-16] 。该方中人参和黄芪作为补气药 物技术有限公司；鸡红细胞（上海源叶生物科技有限公
对，两者共用具有补五脏之气、扶卫阳之气、清心内固的 司）；绵羊血红细胞（SRBC，北京索莱宝科技有限公司）。
功效；枸杞和黄精作为补血药对，两者共用可达到补气 1.5 动物
生血的功效 [7-9] 。复方人参免疫增强方由两组药对联合 SPF 级昆明种小鼠 260 只，雌雄各半，体质量 18～
配伍而成，以期达到气血双补、增强机体免疫力的功效。 22 g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司，动物生产许
本研究采用均匀设计法分组设计，以 RAW264.7 巨 可证号：SCXK（辽）2015-0001。
噬细胞中一氧化氮（NO）、白细胞介素 6（IL-6）、肿瘤坏 2 方法
死因子α（TNF-α）含量为指标筛选复方人参免疫增强方 2.1 药材提取物制备
各组方药材的最佳配比；建立小鼠免疫低下模型，考察 复方人参免疫增强方的4味组方药材的单味提取物
该方最佳配比提取物对小鼠各免疫指标的影响，以评价 由长春中医药大学中药保健食品科技创新中心制备：取
其免疫增强活性；同时，考察该提取物对小鼠的急性毒 人参饮片50 g，水煎3次，每次1 h，合并3次水煎提取液，
性，旨在为开发一种高效、安全的增强免疫力的中药复 浓缩，减压干燥，粉碎，即得人参提取物粉末；同法制备
方制剂提供依据。 黄芪、黄精、枸杞饮片提取物粉末。人参、黄芪、黄精、枸
1 材料 杞4味饮片提取物得率分别为12％、14％、15％、20％。
1.1 仪器 2.2 组方药材生药量浓度范围筛选
3111型CO2培养箱（美国Thermo Fisher Scientific公 2.2.1 细胞培养 取 RAW264.7 细胞，以含 100 U/mL
司）；Infinite M200PRO 型全自动酶标仪（瑞士 Tecan 公 青霉素-链霉素双抗、10％胎牛血清的 DMEM 高糖培养
司）；ALB-224 型万分之一分析天平（德国 Sartorius 公 基（以下简称“完全培养基”）在 37 ℃、5％CO2的培养箱
司）；Stemi 508型倒置显微镜（德国Zeiss公司）；BPZ-LC 中培养，隔日传代。
型真空干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；DZTW型 2.2.2 提取物药液配制 取“2.1”项下各味药材提取物
电子调温电热套（北京市永光明医疗仪器有限公司）。 粉末适量，以DMEM高糖培养基为溶剂配制人参提取物
1.2 药品与试剂 质量浓度分别为 0.12、0.18、0.36、0.54、0.72、0.90、1.08、
环磷酰胺原料药（上海金穗生物科技有限公司，批 1.44、1.80、2.40 mg/mL，黄芪提取物质量浓度分别为
号：20180601，纯度：＞98％）；盐酸左旋咪唑片（北流市 0.14、0.21、0.42、0.63、0.84、1.05、1.26、1.68、2.10、2.80
铜州药业有限公司，批号：170701，规格：25 mg）；胎牛血 mg/mL，黄精提取物质量浓度分别为 0.15、0.225、0.45、
清（澳洲Cellmax公司）；脂蛋白（LPS，批号：320V0313）、 0.675、0.90、1.125、1.35、1.80、2.25、3.00 mg/mL，枸杞提
DMEM 高糖培养基、刀豆蛋白（ConA）、噻唑蓝（MTT）、 取物质量浓度分别为 0.2、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.4、

中国药房 2020年第31卷第2期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 2 ·197 ·