Page 19 - 2020年1月第31卷第2期

表3 11批啤酒花药材样品HPLC图谱共有峰的相对保 木萨尔县红旗农场1采集的啤酒花（编号：S4）抗氧化能
留时间 力最强。
Tab 3 Relative retention time of common peaks in 表5 抗氧化活性测定结果
HPLC chromatograms for 11 batches of H. lu- Tab 5 Antioxidant activity results of H. lupulus
IC50，mg/mL IC50，mg/mL
pulus 编号 编号
清除DPPH自由基 清除ABTS自由基 清除DPPH自由基 清除ABTS自由基
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 RSD，％ S1 1.14 4.51 S7 0.38 1.31
1 0.325 0.324 0.325 0.324 0.323 0.323 0.323 0.321 0.316 0.316 0.314 0.40 S2 0.18 0.87 S8 0.42 1.40
2 0.412 0.412 0.412 0.411 0.411 0.410 0.410 0.406 0.403 0.403 0.401 0.42 S3 0.24 1.10 S9 0.59 2.04
3 0.459 0.459 0.459 0.458 0.458 0.457 0.456 0.452 0.448 0.448 0.446 0.50 S4 0.22 0.94 S10 0.39 1.51
4 0.499 0.499 0.499 0.498 0.498 0.499 0.497 0.491 0.490 0.488 0.487 0.49 S5 0.63 1.99 S11 0.35 1.70
5 0.554 0.554 0.554 0.553 0.552 0.552 0.551 0.545 0.543 0.543 0.541 0.50 S6 0.76 2.71
6 0.784 0.785 0.784 0.784 0.785 0.785 0.785 0.775 0.784 0.784 0.784 0.30 2.5.2 ABTS 自由基清除率 精密称取 ABTS 38.41
7 0.876 0.876 0.876 0.877 0.876 0.877 0.877 0.868 0.877 0.877 0.877 0.26
8 0.897 0.911 0.911 0.912 0.911 0.912 0.912 0.905 0.913 0.912 0.912 0.47 mg，加水溶解并定容至 10 mL 量瓶中，制成浓度为 7
9 0.911 0.927 0.927 0.928 0.927 0.928 0.927 0.922 0.928 0.927 0.928 0.50 mmol/L 的 ABTS 水溶液，与 2.45 mmol/L 的过硫酸钾
10 0.941 0.941 0.941 0.942 0.941 0.940 0.941 0.937 0.941 0.941 0.942 0.12 （K2S2O8 ）水溶液混合，于暗处放置 12 h 以上，使用前加
11（对照） 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0 甲醇稀释，使其在 734 nm 波长处的吸光度为 0.78～
12 1.047 1.048 1.056 1.056 1.043 1.044 1.056 1.058 1.044 1.056 1.047 0.59
13 1.432 1.433 1.433 1.431 1.433 1.432 1.432 1.436 1.431 1.431 1.431 0.13 0.82，即得 ABTS 自由基溶液。取“2.5.1”项下系列质量
14 1.589 1.589 1.588 1.586 1.588 1.588 1.587 1.590 1.586 1.586 1.586 0.14 浓度的供试品溶液各 10 μL、ABTS 自由基溶液 200 μL，
15 1.619 1.635 1.633 1.631 1.632 1.632 1.632 1.634 1.629 1.630 1.630 0.43 先后加入至96 微孔板中，置于室温反应10 min，采用酶
16 1.873 1.872 1.872 1.868 1.869 1.868 1.869 1.868 1.868 1.870 1.868 0.19
17 2.207 2.207 2.207 2.204 2.208 2.206 2.205 2.199 2.205 2.204 2.201 0.29 标仪于734 nm 波长处测得ABTS自由基溶液+系列质量
18 2.446 2.446 2.446 2.444 2.445 2.444 2.444 2.433 2.444 2.443 2.441 0.38 浓度供试品溶液的吸光度（As ）；取系列质量浓度的供试
19 2.500 2.504 2.500 2.498 2.491 2.498 2.498 2.485 2.492 2.499 2.497 0.54 品溶液10 μL、甲醇200 μL，同法反应并测得系列质量浓
表4 11批啤酒花药材样品HPLC图谱共有峰的相对峰 度供试品溶液的吸光度（Ac）；取 ABTS 自由基溶液 200
面积 μL、50％乙醇溶液10 μL，同法反应并测得ABTS自由基
Tab 4 Relative peak area of common peaks in HPLC 溶液的吸光度A0。上述试验均平行操作3次，取平均值，
chromatograms for 11 batches of H. lupulus 按“2.5.1”项下公式计算 ABTS 清除率并预测 IC50，结果
见表 5。由表 5 可知，11 批啤酒花药材样品均具有清除
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 RSD，％
1 0.022 0.074 0.261 0.618 0.151 0.060 0.312 0.199 0.382 0.084 0.164 17.52 ABTS 自由基的能力，其中以阿勒泰市云母二矿采集的
2 0.145 0.325 0.210 0.407 0.130 0.165 0.146 0.147 0.240 0.084 0.588 15.01 啤酒花（编号：S2）抗氧化能力最强。
3 0.013 0.033 0.069 0.114 0.021 0.048 0.092 0.037 0.072 0.009 0.093 3.55 2.6 谱效关系分析
4 0.162 0.311 0.040 0.061 0.010 0.102 0.021 0.014 0.029 0.006 0.095 9.13
5 0.064 0.164 0.035 0.072 0.016 0.120 0.033 0.024 0.034 0.008 0.260 7.74 以表 5 中 11 批啤酒花药材样品的抗氧化活性数据
6 0.075 0.044 0.024 0.045 0.019 0.051 0.032 0.028 0.048 0.039 0.067 1.72 为因变量，峰面积为自变量，采用SIMCA 14.1软件进行
7 0.243 0.056 0.064 0.095 0.065 0.179 0.098 0.018 0.096 0.069 0.078 6.27 偏最小二乘回归分析。结果，啤酒花药材样品HPLC指
8 0.326 0.176 0.094 0.116 0.208 0.205 0.150 0.067 0.329 0.104 0.137 8.80 纹图谱中的4～12、14、16～18号峰面积与其清除DPPH
9 0.099 0.051 0.056 0.061 0.049 0.135 0.062 0.021 0.062 0.034 0.118 3.49
10 0.254 0.085 0.060 0.149 0.102 0.132 0.074 0.107 0.133 0.171 0.222 6.07 和ABTS自由基的能力呈正相关，即相应成分的相对含
11（对照） 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0. 量越高，其清除DPPH和ABTS自由基的能力越强，提示
12 0.079 0.037 0.030 0.026 0.064 0.071 0.039 0.023 0.080 0.023 0.027 2.33 该成分是啤酒花清除DPPH和ABTS自由基作用的物质
13 0.467 0.465 1.250 1.183 0.382 0.822 1.249 1.069 0.543 1.364 0.334 40.17
14 0.835 0.641 1.403 1.286 0.936 1.229 1.238 1.073 0.926 1.117 0.483 28.34 基础，结果见图4。
15 0.259 0.533 0.719 0.713 0.298 0.489 0.592 0.583 0.430 0.705 0.325 16.87 变量投影（VIP）可解释自变量对因变量的贡献程
16 0.350 0.007 0.025 0.019 0.083 0.044 0.039 0.031 0.074 0.028 0.035 9.67 度，VIP 值越大，说明该自变量对因变量的贡献越大，
17 0.015 0.227 0.808 1.196 0.019 0.030 1.047 0.993 0.008 0.850 0.492 47.38 VIP＞1 时表示对因变量有显著贡献 。以 DPPH 和
[15]
18 0.341 0.183 0.378 0.528 0.054 0.323 0.292 0.364 0.063 0.275 0.338 13.95
19 0.347 0.050 0.121 0.152 0.050 0.156 0.115 0.138 0.042 0.135 0.149 8.34 ABTS自由基的清除率为药效指标，对VIP进行分析，筛
选出对啤酒花药材样品抗氧化能力影响较大的色谱峰
法反应并测得DPPH自由基溶液的吸光度（A0 ）。上述试
（以VIP＞1为标准）。结果，啤酒花药材样品对DPPH和
验均平行操作 3 次，取平均值，按公式计算 DPPH 清除
ABTS 自由基的清除能力从大到小依次分别为黄腐酚
率：DPPH 清除率＝[A0－（As－Ac ）]/A0×100％ [12-14] ；采用 （11号峰）＞葎草酮（14号峰）＞类蛇麻酮（17号峰）和葎
GraphPad Prism 5 软件进行非线性回归，预测半数抑制 草酮（14 号峰）＞黄腐酚（11 号峰）＞类蛇麻酮（17 号
浓度（IC50 ），结果见表 5。由表 5 可知，11 批啤酒花药材 峰），提示相应成分在清除DPPH和ABTS自由基过程中
样品均具有清除DPPH自由基的能力，其中以昌吉市吉 具有重要作用，且与啤酒花抗氧化能力呈正相关，进一

中国药房 2020年第31卷第2期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 2 ·141 ·