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肝胆疾病    [6-7] 、心绞痛 [8-9] 等。                        照品均购自于四川省维克奇生物科技有限公司（质量分
            柴胡疏肝散传统用药形式为水煎液，但这种方式具                         数：均不低于98％）；阿魏酸对照品（批号：C10088544，上
        有煎煮不便、水煎液体积大、不利于保存、有效成分浓度                          海麦克林生化科技有限公司，质量分数：＞98％）；甲酸
        低、易腐败变质等缺点，使其在临床上使用受到一定限                           为分析纯，水为超纯水。
        制。因此，本文在遵循古法制备的基础上，采用真空冷                           2 方法与结果
        冻干燥法将水煎液中的水分除去，获得了性质均一、可                           2.1 柴胡疏肝散水煎液冻干物的制备
        长期保存的冻干物，使其有效成分富集，有望提高水煎                               称取中药饮片陈皮 30 g、柴胡 30 g、川芎 22.5 g、醋
        液的稳定性，有利于从源头上提高研究的质量。                              香附 22.5 g、枳壳 22.5 g、白芍 22.5 g、甘草 7.5 g，合并粉
            国内对柴胡疏肝散各组方药材的活性成分进行了                          碎后置于3 000 mL烧杯中，分别加入4倍量、3倍量水各
        较多的研究，药效物质基础基本得以明确                  [10-14] 。如柴胡   煎煮 30、20 min，药液纱布过滤，合并滤液。滤液 5 000
        疏肝散中柴胡的主要成分为柴胡皂苷A、柴胡皂苷B、柴                          r/min 离心（离心半径 9.16 cm）10 min；取上清液置于冻
        胡皂苷C、柴胡皂苷D等；芍药活性成分有芍药内酯苷、                          干机托盘中，－80 ℃预冻过夜。预冻过后样品利用冷冻
        芍药苷、苯甲酰芍药苷；川芎活性成分有阿魏酸；枳壳、                          干燥机放于温度为－80 ℃、真空度为1 Pa的条件下冻干
        陈皮活性成分为柚皮苷、橙皮苷；甘草活性成分为甘草                           48 h，取出置于干燥器中备用，每份冻干物约85.76 g。
        酸；香附活性成分为α-香附酮等。目前，关于柴胡疏肝                          2.2 混合对照品溶液的制备

        散柴胡皂苷类成分质量检测的文献报道较多，但关于其                               分别精密称取芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、柚皮
        他活性成分同步检测的报道相对较少                 [15-16] 。鉴于此，本    苷、橙皮苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、α-香附酮对照品适
        文 在 文 献 研 究 的 基 础 上 ，建 立 超 高 效 液 相 色 谱 法           量，置于适宜的量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀后得各对
       （UPLC）同时测定柴胡疏肝散水煎液冻干物中芍药内酯                          照品母液。精密移取芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、柚皮
        苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、甘                         苷、橙皮苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、α-香附酮对照品母
        草酸、α-香附酮 8 个成分含量的方法，以加强其质量控                        液适量置于同一量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇
        制，同时为柴胡疏肝散的相关研究提供参考。                               匀备用，得混合对照品溶液。混合对照品溶液中芍药内
        1 材料                                               酯苷、芍药苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、苯甲酰芍药苷、
        1.1  仪器                                            甘草酸、α-香附酮质量浓度分别为 12.02、79.96、4.06、
            岛津 LC-30AD 型 UPLC 仪，包括 SIL-30AC 型自动            119.88、40.03、3.98、12.03、8.82 μg/mL。所有的溶液均用
        进样器、CTO-20AC型柱温箱、SPD-M30A型二极管阵列                    棕色量瓶制备并储存于4 ℃中。
        检测器（PDA）和Labsolution色谱工作站、ELB200型百                 2.3  供试品及阴性供试品溶液的制备
        分之一电子天平（日本岛津公司）；Sartorius SQP 十万分                      称取柴胡疏肝散水煎液冻干物 1.00 g，加入 20 mL
        之一电子天平（德国赛多利斯公司）；DL-I-15 型台式封                      甲醇，超声（功率：50 W，频率：30 kHz）10 min，静置 5
        闭电炉[泰勒斯（天津）仪器有限公司]；TGL-16A 型高速                     min，4 ℃ 11 000 r/min 离心（离心半径 9.16 cm）15 min；
        离心机（湖南平凡科技有限公司）；LGJ-12型真空冷冻干                       吸取上清液，取上清液转移至 25 mL 量瓶中，用甲醇定
        燥机（北京松源华兴科技发展有限公司）；KQ5200DE型                       容至刻度线，即得供试品母液。精密吸取供试品母液 1
        超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；MDF-193型                       mL 至 10 mL 量瓶中，用甲醇定容，0.22 μm 微孔滤膜过
        医用超低温冰箱（日本Panasonic公司）。                            滤，取续滤液即为供试品溶液。
        1.2 药品与试剂                                              分别按照上述方法制备缺柴胡、白芍、陈皮、川芎、
            中 药 饮 片 柴 胡（批 号 ：180601）、白 芍（批 号 ：             香附、枳壳、甘草的阴性冻干物样品，即得阴性供试品
        180702）、枳壳（批号：180801）、陈皮（批号：180801）、醋              溶液。
        香附（批号：180301）、川芎（批号：180601）、甘草（批号：                 2.4 色谱条件
        180801）均购于广州至信药业股份有限公司（由广州中                            色谱柱为 Phenomenex（250 mm×4.6 mm，5 μm），流
        医药大学张英丰副教授鉴定为真品）；芍药苷（批号：                           动相为 0.1％甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脱，检测时间
        wkq16062205）、芍药内酯苷（批号：wkq16060804）、苯甲              为 35 min，流速为 1 mL/min，柱温为 30 ℃，检测波长为
        酰 芍 药 苷（批 号 ：wkq15122904）、橙 皮 苷（批 号 ：              250 nm，进样体积为10 μL。梯度洗脱程序见表1。
        wkq15123105）、柚皮苷（批号：wkq16051305）、甘草酸               2.5 系统适用性试验
       （批号：wkq16032502）、α-香附酮（批号：wkq16072701）对                 分别吸取混合对照品溶液、供试品溶液及阴性供


        中国药房    2020年第31卷第1期                                                China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 1  ·43  ·
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