Page 105 - 2019年10月第30卷第20期
P. 105

HCT型质谱仪、AVANCE-500 MHz型超导核磁共振波谱                     亚流分A1～A5；亚流分A1经硅胶柱色谱，以石油醚-乙
        仪（美国 Bruker Daltonics 公司）；YRT-3 型熔点仪（天津             酸乙酯（6 ∶ 1，V/V）洗脱，得化合物Ⅵ（13 mg）和化合物Ⅶ
        市精拓仪器科技有限公司）；RE-52AA型旋转蒸发仪（上                       （20 mg）；亚流分 A3 经聚酰胺薄层色谱，以氯仿-甲醇
        海亚荣生化仪器有限公司）。                                      （8 ∶ 1，V/V）为展开剂，得化合物Ⅷ（9 mg）。流分 H6
        1.2 药材与试剂                                          （1 200 mg）经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇（50∶1～1∶1，V/V）
            糯米风药材于 2014 年 10 月采于广西凭祥市，经广                    梯度洗脱，得亚流分 M1～M4；亚流分 M2 经 Sephadex
        西健丰药业有限公司梁可文副研究员鉴定为菊科植物                             LH-20柱色谱，以氯仿-甲醇（1∶1，V/V）洗脱，得化合物Ⅸ
        岩 穴 千 里 光 [C. spelaeicola（Vant）C. Jeffrey et Y. L.  （15 mg）；亚流分M2经聚酰胺柱色谱，以二氯甲烷-甲醇
        Chen]的地上部分。标本保存于桂林益天成生物科技有                         （100∶0～3∶1，V/V）梯度洗脱，其中二氯甲烷-甲醇（20∶1，
        限公司。                                                V/V）洗脱液中析出淡黄色结晶，经甲醇重结晶后，得化
            SephadexLH-20 凝胶（18～111 μm，美国 Pharmacia         合物Ⅹ（17 mg）。流分 H8（700 mg）经 Sephadex LH-20
        公司）；硅胶（100～200、200～300目，青岛海洋化工厂）；                   柱色谱，以氯仿-甲醇（1 ∶ 1，V/V）洗脱，洗脱组分再经硅
        AB-8 大孔树脂（0.3～1.25 mm，大连美仑生物科技有限                    胶柱色谱，以氯仿-甲醇（100 ∶ 1～1 ∶ 1，V/V）梯度洗脱，
        公司）；聚酰胺（30～60、80～100 目，国药集团化学试剂                     得亚流分 D1～D3；亚流分D3经硅胶柱色谱，以石油醚-
        有限公司）；β-胡萝卜苷对照品（批号：474-58-8，纯度：                     丙酮（20 ∶ 1，V/V）洗脱，再经聚酰胺薄层色谱，以乙醇-
        98％）、β-谷甾醇对照品（批号：83-46-5，纯度：98％）均购                  水-甲酸（4∶1∶0.1）为展开剂，得化合物Ⅺ（18 mg）。
        自上海广锐生物科技有限公司；其余试剂均为分析纯，                                取正丁醇部位 100 g，经 AB-8 大孔树脂柱色谱，以
        水为纯化水。                                              水和95％乙醇依次洗脱以除糖，得浸膏46 g。将上述浸
        2 提取与分离                                             膏经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇（100 ∶ 1～0 ∶ 1，V/V）梯度
            取干燥的糯米风药材 10 kg，粉碎，加入 10 倍量                     洗脱，经TLC鉴别后合并，得7个流分（即D1～D7）。其
        （L/kg）75％乙醇回流提取3次，每次2 h，过滤，合并提取                     中，流分 D2（900 mg）经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇（8 ∶ 1，
        液，减压回收溶剂，得醇提物浸膏 1 035 g。浸膏加水搅                       V/V）洗脱，洗脱液析出淡黄色结晶（106 mg），该结晶再
        拌、混悬，依次用石油醚（60～90 ℃，下同）、乙酸乙酯、正                      进聚酰胺薄层色谱，以甲醇-甲酸（100 ∶ 2，V/V）为展开
        丁醇各萃取3次，分别合并各萃取部位，回收溶剂，得石                           剂，得化合物Ⅻ（10 mg）。
        油醚部位185 g、乙酸乙酯部位235 g、正丁醇部位126 g。                   3 结构鉴定
            取石油醚部位 100 g，拌样于 200 g 硅胶（100～200                   化合物Ⅰ～Ⅻ的结构见图 1。
        目），经硅胶柱（200～300目，下同）色谱分离，以石油醚-                          化合物Ⅰ：白色结晶（石油醚），熔点（mp）：136～
        丙酮（10∶1、8∶1、4∶1、6∶4、1∶1，V/V）梯度洗脱，经薄层色               137 ℃。分子式：C29H50O，电喷雾质谱（ESI-MS）：m/z
        谱法（TLC）鉴别后合并，得 5 个流分（即 S1～S5）。其                     413.3[M－H] 。Liebermen-Buchard反应呈阳性，与β-谷
                                                                       －
        中，流分 S2 有白色结晶析出，将其以石油醚反复重结                          甾醇对照品共行 TLC，经 3 种不同极性展开系统[石油
        晶，得化合物Ⅰ（22 mg）；流分S4经硅胶柱色谱，以石油                       醚-乙酸乙酯（4∶1，V/V）、石油醚-二氯甲烷-丙酮（10∶1∶1，
        醚-乙酸乙酯（50∶1，V/V）洗脱，得化合物Ⅱ（19 mg）。                    V/V）、石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯（6 ∶ 1 ∶ 1，V/V）]展开后
            取乙酸乙酯部位150 g，拌样于200 g硅胶（100～200                 比移值（Rf）均一致，混合后mp不下降，故鉴定该化合物
        目），经硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮（100 ∶ 0、50 ∶ 1、                 为β-谷甾醇。
        20∶1、8∶1、5∶1、1∶1，V/V）梯度洗脱，经TLC鉴别后合并，                    化合物Ⅱ：白色粉末（石油醚），mp：144～145 ℃。
                                                                                                    1
                                                                                                 +
        得12个流分（即H1～H12）。取流分H3（750 mg）经硅胶                    分 子 式 ：C29H48O，ESI-MS：m/z 413[M + H] 。 H-NMR
        柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯（50 ∶ 1～5 ∶ 1，V/V）梯度洗                 （CDCl3，500 MHz）δ ：3.53（1H，m，H-3），5.14（1H，m，
        脱，得 72 个流分，经 TLC 鉴定后合并，得浸膏 92 mg；将                  H-6），0.66（3H，s，13-CH3 ），1.01（3H，s，20-CH3 ），0.98
        上述浸膏经硅胶柱色谱，以乙酸乙酯-甲醇（50 ∶ 1～3 ∶ 1，                  （3H，s，10-CH3 ），5.15（1H，dd，J＝15.2，7.8 Hz，H-22），
        V/V）梯度洗脱，其中以乙酸乙酯-甲醇（5 ∶ 1，V/V）洗脱得                   5.01（1H，dd，J＝15.2，7.8 Hz，H-23），0.84～0.81（6H，m，
        化合物Ⅲ（16 mg）。流分H4（900 mg）经硅胶柱色谱，以                    H-26，27），0.83（3H，t，J＝7.2 Hz，H-29）。 C-NMR（CD-
                                                                                                13
        氯仿-甲醇（50 ∶ 1～5 ∶ 1，V/V）梯度洗脱，经TLC鉴定后合                Cl3，125 MHz）δ：37.2（C-1），31.7（C-2），71.8（C-3），42.2
        并，回收溶剂，得亚流分C1～C4；亚流分C2经硅胶柱色                        （C-4），140.6（C-5），121.7（C-6），31.7（C-7），31.9（C-8），
        谱，以乙酸乙酯-甲醇（1 ∶ 1，V/V）洗脱，得化合物Ⅳ（17                    50.1（C-9），36.6（C-10），21.0（C-11），39.7（C-12），42.3
        mg）；亚流分 C3 经硅胶柱色谱，以乙酸乙酯-甲醇（5 ∶ 1，                  （C-13），56.9（C-14），24.3（C-15），28.7（C-16），56.4
        V/V）洗脱，得化合物Ⅴ（12 mg）。流分 H5（670 mg）经                 （C-17），12.1（C-18），19.2（C-19），40.3（C-20），19.8
        Sephadex LH-20柱色谱，以氯仿-甲醇（1∶1，V/V）洗脱，得              （C-21），138.3（C-22），129.2（C-23），51.1（C-24），31.6


        ·2836  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 20                                中国药房    2019年第30卷第20期
   100   101   102   103   104   105   106   107   108   109   110