Page 60 - 2019年10月第30卷第19期
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膏量计）的母液：三脉菝葜醇提物为200 mg/mL、醇提物                      只小鼠腹腔注射 0.5 mL 细胞悬液。饲养 7 d 后，观察发
        石油醚萃取部位和醇提物乙酸乙酯萃取部位均为 50                           现小鼠腹部膨隆如球状，说明腹水生长旺盛。颈椎脱臼
        mg/mL、醇提物正丁醇萃取部位为100 mg/mL、醇提物水                    处死小鼠，无菌操作抽取腹水，生理盐水调整小鼠腹水
                                                                                     －1
        层部位为 200 mg/mL。取上述母液，用 0.22 μm 微孔过                 中 S180 细胞密度为 2×10 mL 。另取 80 只小鼠，于每
                                                                                 7
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        滤器过滤后，置于4 ℃冰箱中保存，备用。临用前，取适                         只小鼠腋下接种 0.2 mL 腹水细胞悬液 复制 S180 实体
        量溶液用完全培养基（含 1％青链霉素混合液和 10％胎                        瘤小鼠模型。24 h后，按体质量随机将80只小鼠随机分
        牛血清的高糖DMEM培养基）稀释到所需质量浓度。                           为模型组（生理盐水，20 mL/kg）、环磷酰胺（阳性药物）
        2.3 细胞培养                                           组（0.025 g/kg），三脉菝葜醇提物高、中、低剂量组（0.1、
            从－80 ℃冰箱中取出各细胞株，将冻存管置于                         0.05、0.025 g/kg，以浸膏计）和醇提物乙酸乙酯萃取部位
        37 ℃水浴锅中水浴约 1 min，完全解冻后，转入含 5 mL                   高、中、低剂量组（0.1、0.05、0.025 g/kg，以浸膏计），每组
        完全培养基的离心管中，以1 000 r/min离心3 min，弃上                  10只。除环磷酰胺组小鼠每天腹腔注射给药1次外，其
        清液，加入6 mL完全培养基，置于37 ℃、含5％CO2培养                     余各组小鼠均每天灌胃2次相应药液/生理盐水，各组小
        箱中培养，复苏后 24 h 更换培养基，之后每 2～3 d 对细                   鼠均连续给药 14 d（参考相关文献            [5，13] ，根据体表面积换
        胞进行一次传代，细胞传代2次以上可用于试验。                             算法和生药量折算，三脉菝葜醇提物及其乙酸乙酯萃取
        2.4 MTT法检测三脉菝葜提取物及其不同极性萃取部                         部位高、中、低剂量组小鼠的给药量分别相当于成人日
        位的体外抗肿瘤活性                                          给药 25、12.5、6.25 g，与菝葜的临床日用量 10～15 g 符
            取对数期生长期细胞，使用胰酶消化后用完全培养                         合；环磷酰胺组小鼠给药量亦根据成人临床常用量折算
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        基调整混悬液中细胞密度为5×10 mL ，按每孔100 μL                     得到），给药期间各组小鼠自由饮食。末次给药后，予以
        的量将细胞悬液接种至96孔板中，板周围一圈加入100                         各组小鼠禁食处理 12 h，之后处死小鼠，剥离其瘤组织
        μL磷酸盐缓冲液（PBS），以防止边缘效应。将细胞置于                        和肝、脾及胸腺组织，称质量，计算抑瘤率和脏器（脾、胸
        37 ℃、含5％ CO2培养箱中培养24 h后，吸除上清液，加                    腺）指数，计算方法如下：抑瘤率（％）＝（模型组瘤质
        入相应的含药培养基。根据预试验结果，三脉菝葜醇提                           量－给药组瘤质量）/模型组瘤质量×100％；脏器（脾、胸
        物及其不同极性萃取部位分别设定 5 个给药质量浓度                          腺）指数（％）＝脏器（脾、胸腺）质量/体质量×100％。
       （均按浸膏量计）：三脉菝葜醇提物和醇提物正丁醇萃取                           2.6  统计学方法
        部位均为 1 000、500、400、300、200 μg/mL，醇提物石油                 采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析。数据用
        醚萃取部位为 200、150、100、75、50 μg/mL，醇提物乙酸               x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两
        乙酯萃取部位为 200、100、75、50、37.5 μg/mL，醇提物水              比较采用t检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。
        层部位为 2 000、1 500、1 000、500、250 μg/mL，每个质量          3 结果
        浓度均设5个复孔，每孔加入含药培养基100 µL。并另                        3.1  三脉菝葜醇提物及其不同极性萃取部位对 6 种肿
        设立阳性药物（顺铂）对照（分别用完全培养基将顺铂制                          瘤细胞的体外增殖抑制作用测定结果
        成质量浓度为16、4、1、0.25、0.062 5 μg/mL的溶液，每个                  三脉菝葜醇提物及其不极性萃取部位对6种肿瘤细
        质量浓度设 5 个复孔，每孔加入含药培养基 100 µL）和                     胞的抑制作用均呈现明显的量-效关系。其中以三脉菝
        空白对照（每孔加入 100 μL 完全培养基，即单孔细胞不                      葜醇提物乙酸乙酯萃取部位对肿瘤细胞的增殖抑制作
        给药，作常规培养）。给药后继续培养48 h，吸除上清液，                       用最强，对各肿瘤细胞的IC50在40～210 μg/mL之间，其
        每孔加入含MTT溶液（5 mg/mL）10 μL的无血清培养基                    对 MCF-7 细胞的 IC50 为 70.56 μg/mL，对 MDA-MB-231
        110 μL，继续孵育 4 h 后终止培养并吸除上清液，加入                     细胞的 IC50为 83.58 μg/mL，对 HeLa 细胞的 IC50为 44.67
        DMSO溶液100 μL，振荡10 min，使结晶充分溶解（整个                   μg/mL，这提示三脉菝葜的抗肿瘤有效成分可能集中在
        过程避光），然后使用酶标仪于490 nm波长处测定各孔吸                       醇提物乙酸乙酯萃取部位。但与传统的抗肿瘤药物顺
        光度（A）值，记录结果，按照以下公式计算细胞增殖抑制                         铂相比，三脉菝葜醇提物及其各极性萃取部位对6种肿
        率：细胞增殖抑制率（％）＝（1－A 给药孔/A 空白对照孔 ）×100％。              瘤细胞的IC50均较高。三脉菝葜醇提物及其不同极性萃
        并使用SPSS 22.0软件计算三脉菝葜醇提取物及其各极                       取部位对肿瘤细胞的增殖抑制率测定结果见表1，IC50测
        性萃取部位对肿瘤细胞的半数抑制浓度（IC50 ）。                          定结果见表2。
        2.5  三脉菝葜醇提物及其乙酸乙酯部位对S180实体瘤                       3.2  三脉菝葜醇提物及其乙酸乙酯萃取部位对S180荷
        小鼠的体内抗肿瘤活性                                         瘤小鼠的抑瘤作用测定结果
            常规操作复苏肉瘤S180细胞，并进行传代培养至对                       3.2.1  三脉菝葜醇提物及其乙酸乙酯萃取部位对 S180
                                                   －1
        数生长期。用生理盐水调整细胞密度为2×10 mL ，每                        荷瘤小鼠肿瘤生长的影响              三脉菝葜醇提物提物及其
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        中国药房    2019年第30卷第19期                                             China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 19  ·2647  ·
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