Page 64 - 2019年10月第30卷第19期

acetate part form ethanol extract of P. forrestii，but had no significant on heart rate（P＞0.05）. With the increase of extracellular
Ca 2 + concentration，the inhibitory effect of ethyl acetate part from ethanol extract of P. forrestii on isolated frog heart contraction
also increased gradually. After adding atropine and isoproterenol，the inhibitory effect of the ethyl acetate part form ethanol extract
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of P. forrestii on isolated frog heart contraction decreased to some certain. The activity of Na -K -ATPase in cardiac tissue was not
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significantly changed（P＞0.05），the activity of Ca -Mg -ATPase was significantly increased（P＜0.05），and the activity of AChE
was significantly decreased（P＜0.05）after perfused with 1.74，3.48 mg/mL ethyl acetate part form ethanol extract of P. forrestii.
CONCLUSIONS：The ethyl acetate part from the ethanol extract of P. forrestii can inhibit the contractile activity of the isolated frog
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heart and has a certain negative inotropic effect. The mechanism may be related to the increase of Ca -Mg -ATPase activity，
inhibition of AChE activity，blocking of calcium channel in the cell membrane，the activation of M receptor and blocking of β
receptor.
KEYWORDS Miao medicine；Ethanol extract of P. forrestii；Ethyl acetate part；Isolated frog heart；Myocardial contractility

黑骨藤（Periploca forrestii Schltr.）为萝藦科植物黑 20190228）、腺 苷 三 磷 酸（ATP）酶 测 试 盒（批 号 ：
龙骨的干燥根或全株 ，又名黑龙骨、滇杠柳等，性热，味 20190723）、总蛋白定量试剂盒（批号：20190309）均购自
[1]
苦，具有活血、通经、祛风、强心、解毒等作用，主治肢体 南京建成生物工程研究所；任氏液、低钙任氏液（1 000
麻木疼痛、跌打损伤、月经不调等症，苗族民间广泛将其 mL 纯水中含 CaCl2 0.06 g，其余成分同任氏液）、高钙任
[2]
用于治疗闭合性软组织损伤、风湿与类风湿等疾病 。 氏液（1 000 mL 纯水中含 CaCl2 0.24 g，其余成分同任氏
黑骨藤中主要含有强心苷类、C21甾类、多糖类、黄酮类 液）由贵州中医药大学基础医学院生理实验室按照标准
和三萜皂苷类等成分 [3-7] 。已有研究表明，黑骨藤有抗类 配方自制；实验所用试剂均为分析纯。
风湿性关节炎、强心以及抗肿瘤等活性 [8-13] 。目前，黑骨 1.3 动物
藤对心脏活性的研究报道极少。本研究拟通过离体蛙 牛蛙84只，♀♂兼备，体质量300～400 g，精神状态
心心脏灌流实验，初步探讨黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位 良好，购自贵州中医药大学动物所。
对离体蛙心心率和心肌收缩力的影响，并对其作用机制 2 方法
进行初步探讨，以期为苗药黑骨藤在治疗心血管系统疾 2.1 黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位的制备
病中发挥新作用奠定基础，也为黑骨藤的进一步开发利 称取黑骨藤药材粗粉 6 kg，按料液比 1 ∶ 8（kg/L）加
用提供实验依据。 入 70％乙醇加热回流提取 3 次，每次提取时间为 3 h，纱
1 材料 布趁热过滤，合并3次过滤液，在60 ℃、－0.08 MPa下减
1.1 仪器 压浓缩回收溶剂，得浸膏。将浸膏用温水适量混悬，将
蛙类通用实验器械、肌张力换能器、BL-420 生物机 混悬液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进
能实验系统（四川成都泰盟科技有限公司）；FA2204B电 行萃取，合并相应萃取液，减压浓缩回收溶剂，然后于
子天平（上海天美天平仪器有限公司）；SB-4200DTD 超 70 ℃水浴上蒸干，分别得石油醚（56 g）、氯仿（21.136
声波清洗仪（宁波新怡超声设备有限公司）；N-1300旋转 g）、乙酸乙酯（85.348 g）、正丁醇（249.068 g）和水（113 g）
蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；HH-S2 恒温水浴锅 共 5 个萃取部位浸膏。取乙酸乙酯部位浸膏适量，加入
（河南金博仪器制造有限公司）；L600 台式低速离心机 任氏液，在功率为 400 W、频率为 40 kHz 下超声 15 min
（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；DNM-9606 酶标 溶解，制备成所需质量浓度，溶液需现用现配。
分析仪（北京普朗新技术有限公司）。 2.2 动物分组
1.2 药品与试剂 将84只牛蛙随机分为空白对照组、黑骨藤醇提物乙
黑骨藤药材于 2018 年 3 月购自贵州省贵阳市南明 酸乙酯部位低剂量组、黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位高剂
区花果园药材市场，经贵州中医药大学魏升华教授鉴定 量组、阿托品+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低剂量组、异
为萝藦科杠柳属植物黑骨藤（P. forrestii Schltr.）的干燥 丙肾上腺素+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低剂量组、低
根，药材样品保存于贵州中医药大学植物化学实验室； 钙任氏液+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低剂量组、高钙
盐酸异丙肾上腺素注射液（上海禾丰制药有限公司，批 任氏液+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低剂量组 7 个组，
号：41170303，规格：2 mL∶1 mg）；硫酸阿托品注射液（河 每组12只。其中，阿托品的给药浓度为10 mg/L，黑骨藤
南润弘制药股份有限公司，批号：161001001，规格：1 醇提物乙酸乙酯部位低、高剂量组的给药浓度分别为
mL ∶ 0.5 mg）；乙酰胆碱酯酶（AChE）测试盒（批号： 1.74、3.48 mg/mL（以浸膏量计，折合生药量分别为0.12、

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