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0.24 g）。                                            3 结果
        2.3 离体蛙心标本的制备                                       3.1  黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位对离体蛙心心率、心肌
            采用斯式蛙心插管法 。取牛蛙，破坏脑和脊髓，                          平均收缩力的影响
                               [14]
        背位固定于蛙板上暴露心脏，在左、右主动脉下穿一线，                               在任氏液灌流下，往制备好的蛙心套管中加入任氏
        将心脏翻至头端，在背面结扎前后腔静脉，在左主动脉                            液后，离体蛙心心率和心肌平均收缩力无明显变化（P＞
        下穿一线，距动脉圆锥 2～3 mm 处结扎，再从左右主动                        0.05）。加入1.74 mg/mL或3.48 mg/mL的黑骨藤醇提物
        脉下方穿一线打活结留作固定插管用。持眼科剪在动                             乙酸乙酯部位后，离体蛙心心率变化不大或略减慢，差
        脉圆锥前端处向心脏剪一斜口，将盛有任氏液的蛙心插                            异均无统计学意义（P＞0.05）；但心肌收缩曲线呈现典
        管由此口插入心室腔内，连同近旁血管一起结扎固定，                            型的下降趋势，心肌平均收缩力明显降低（P＜0.001），
        将心脏离体，任氏液反复冲洗心室内余血，至插管内灌                            1.74、3.48 mg/mL 黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位对离体蛙
        流液完全澄清无色，然后保持插管内的灌流液为1 mL，                          心 的 心 肌 平 均 收 缩 力 抑 制 率 分 别 达 到 47.89％ 和
        划线作标记。蛙心经蛙心夹和丝线与张力换能器相连，                            54.42％。黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位灌流蛙心的心肌
        丝线保持垂直。用BL-420生物机能实验系统记录心肌                          收缩曲线见图1～图3，黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位对离
        收缩曲线。                                               体蛙心心率和心肌平均收缩力的影响结果见表1、表2。
        2.4 给药
                                                              16     任氏液
            向制备好的各组蛙心插管内均先加入 1 mL 任氏                          12
                                                             g
        液，蛙心自主活动，待心肌收缩曲线稳定后，描记收缩曲                              8 4
        线，作为各组给药前数据。然后，空白对照组加入 100                           心肌收缩力，  -4 0
        μL任氏液，描记5 min收缩曲线，作为给药后数据；黑骨                          -8
                                                              -12
        藤醇提物乙酸乙酯部位低、高剂量组分别加入 1.74                               0  25  50  75  100  125  150  175  200  225  250  275  300
                                                                                    时间，s
        mg/mL 或 3.48 mg/mL 黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位 100
                                                                   图1 任氏液灌流蛙心的心肌收缩曲线
        μL，描记5 min收缩曲线，作为给药后数据；阿托品/异丙
                                                            Fig 1 Myocardial contraction curve of frog heart af-
        肾上腺素+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低剂量组先加入
                                                                   ter perfused with Ren’s solution
        10 mg/L 的阿托品或异丙肾上腺素 20 μL，描记 5 min 收
        缩曲线，再加入1.74 mg/mL黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位
                                                               20    1.74 mg/mL黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位
        100 μL，描记5 min收缩曲线，然后加入1.74 mg/mL的黑                  g  16
        骨藤醇提物乙酸乙酯部位100 μL，描记5 min收缩曲线，                       心肌收缩力，  12 8
        作为给药后数据。每次加药前取出等量灌流液，以保证                               4 0
        心室外容积固定为1 mL。                                          -4
                                                               -8
                                                              -12
        2.5  指标检测
                                                                0  25  50  75  100  125  150 175  200  225  250 275  300
        2.5.1  心率、心肌平均收缩力            应用 BL-420 生物机能                                时间，s
        实验系统记录离体蛙心的心肌收缩曲线，统计每组离体                            图2   低剂量黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位灌流蛙心的心
        蛙心给药前后的心率、心肌平均收缩力变化，并计算心                                 肌收缩曲线
        肌平均收缩力抑制率[心肌平均收缩力抑制率（％）＝                            Fig 2 Myocardium contraction curve of frog heart af-
        （给药前心肌平均收缩力－给药后心肌平均收缩力）/给                                 ter perfused with low dose of ethyl acetate part
        药前心肌平均收缩力×100％]。                                          from ethanol extract of P. forrestii
                                   2+
                                        2+
                        +
        2.5.2  心肌 Na -K -ATP 酶、Ca -Mg -ATP 酶、AChE 活         3.2  黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位在阿托品、异丙肾上腺
                     +
        性检测      取空白对照组、黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位                        素作用下对离体蛙心心肌平均收缩力的影响
        低、高剂量组蛙的心肌组织，液氮保存。根据测试盒说                                在任氏液灌流下，加入阿托品后，离体蛙心的心肌
        明书操作，测定组织中蛋白浓度，并检测Na -K -ATP酶、                      平均收缩力无明显变化（P＞0.05）；之后再加入 1.74
                                                +
                                             +
               2+
           2+
        Ca -Mg -ATP酶和AChE活性。                                mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位，离体蛙心的心肌
        2.6 统计学方法                                           平均收缩力明显降低（P＜0.001），其对心肌平均收缩力
            采用SPSS 17.0统计学软件进行数据处理分析。结                      的抑制率为 35.60％。在任氏液灌流下，加入异丙肾上
        果用 x±s 表示，组间酶活性差异采用单因素方差分析                          腺素后，离体蛙心的心肌平均收缩力显著升高（P＜
        和 LSD 检验，组内给药前后的心率、心肌收缩力差异变                         0.05）；之后再加入 1.74 mg/mL 的黑骨藤醇提物乙酸乙
        化采用配对t检验分析。P＜0.05为差异有统计学意义。                         酯部位，离体蛙心的心肌平均收缩力又显著降低（P＜


        ·2652  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 19                                中国药房    2019年第30卷第19期
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