Page 42 - 2019年10月第30卷第19期
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CONCLUSIONS：SNFE can improve hemorheological abnormalities and vascular endothelial injury in rats with acute blood stasis.
        KEYWORDS     Naked fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus； Acute blood stasis model； Hemorheology； Vascular
        endothelium；Rats

            光裸方格星虫（Sipunculus nudus）俗称“沙虫”，为星              科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：
        虫门科海洋无脊椎软体动物，分布于无污染的浅海或潮                           SCXK（桂）2014-0002，实验动物使用许可证号：SYXK
        间带的泥沙中，在我国以广西北部湾产量最大，质量最                           （桂）2014-0003。本实验操作符合广西医科大学动物伦
        优。方格星虫性平，味甘、咸，肉质鲜美脆嫩，营养丰富，                         理相关规章规定。
        是食补中的佳品 。据报道，方格星虫虫体含有多糖、氨                          2 方法
                      [1]
        基酸、脂肪酸等多种成分，有延缓衰老、抗疲劳、提高免                          2.1 血瘀模型建立
        疫力、抗辐射、抗病毒、护肝、提高记忆力等作用                   [2-3] 。本      将SD大鼠随机分为对照组、模型组、阿司匹林组和
        课题组前期从方格星虫的内脏中提取出一种纤维蛋白                            SNFE 高、低剂量组，每组 10 只。SNFE 高、低剂量组大
        溶解酶——方格星虫纤溶酶（SNFE），其为丝氨酸蛋白                         鼠分别给予5 000、2 500 U/kg的SNFE（根据预实验结果
        酶，具有良好的溶栓和抗凝血活性，且该纤溶酶无溶血                           显示，剂量为 2 500 U/kg 时血瘀模型大鼠的血流变指数
        作用和致出血活性，其作为一种潜在的抗血栓药物，表                           发生改变，因此以该剂量为SNFE的低剂量，高剂量为低
        现出良好的开发前景         [4-6] 。                          剂量的2倍）；阿司匹林组大鼠给予100 mg/kg的阿司匹
            血瘀证是由机体内气机逆乱、气血运行不畅所致的                         林 [12-13] ，对照组和模型组大鼠均给予生理盐水，每天灌胃
        瘀积凝滞，或离开经脉的血液无法及时消散以致停留一                           给药1次，连续给药7 d，第6天药后1 h，除对照组外，其
        处所致的多种病症的总称，临床表现为瘀血内阻所引起                           余各组大鼠皮下注射 0.8 mg/kg 的盐酸肾上腺素，2 h 后
        疼痛、肿块、舌紫、脉涩、出血等各种症候，为中医常见病                         将大鼠放入冰水中游泳5 min，取出大鼠擦干皮毛，2 h后
          [7]
        症 。血瘀证主要特点为血流不畅，《实用血瘀证诊断标                          再次皮下注射 0.8 mg/kg 的盐酸肾上腺素，建立血瘀模
           [8]
        准》 中也以血液流变、凝血、纤溶、微循环检测提示血液                         型 [12-13] 。
        瘀滞作为血瘀证诊断的一个重要的实验室指标。研究                            2.2  血液流变学指标测定
        表明，血瘀证涉及多个复杂的病理生理变化，不仅与血                               造 模 次 日 末 次 给 药 后 2 h，用 10％ 水 合 氯 醛（3
        液流变改变有关，与血管内皮细胞损伤、血脂代谢异常                           mL/kg）麻醉大鼠，腹主动脉采血，采用肝素抗凝采血管
        也有着密切的联系        [9-11] 。本研究通过大鼠皮下注射大剂              采血5 mL，使用全自动血流变仪测定各组大鼠的全血黏
        量肾上腺素加冰水浴刺激引起“暴怒”和“寒邪”，造成急                         度（高、中、低切变率：200/s、50/s、1/s）、血浆黏度、红细胞
        性血瘀模型，研究 SNFE 对该模型血液流变异常及血管                        比容、红细胞聚集指数以及红细胞变形指数。
        内皮损伤的影响，并测定血浆中舒血管因子——一氧化                           2.3  血浆中NO和ET-1的含量测定
        氮（NO）及缩血管因子——内皮素1（ET-1）的含量，初步                          肝素抗凝管采血完毕后，换乙二胺四乙酸（EDTA）
        探讨SNFE活血化瘀及抗血栓的机制。                                 抗凝采血管继续采血约 2 mL，以 3 000 r/min 离心 15
        1 材料                                               min，取血浆至 EP 管放置，－80 ℃冰箱保存。采用酶联
        1.1  仪器                                            免疫吸附法测定各组大鼠血浆中NO和ET-1的含量，具
            SA9000 全自动血流变仪（北京赛科希德科技发展                      体操作严格按照试剂盒说明书进行。使用酶标仪测定
        有限公司）；TGL-16A冷冻离心机（长沙平凡仪器仪表有                       吸光度，数据处理采用 ELISACalc 软件进行数据处理，
        限公司）；Spectramax Plus384连续波长酶标仪（美国MD                并拟合曲线，计算含量。
        公司）；BHS光学显微镜（日本Olympus公司）。                         2.4  主动脉血管病理形态学观察
        1.2 药品与试剂                                              采血完毕后，处死大鼠，分离并摘取心脏主动脉，用
            SNFE（广西医科大学药学院药学实验中心提供，批                       生理盐水漂洗后保存于10％中性福尔马林，常规石蜡包
        号：20180916，经纤维蛋白平板法测定活性为50 U/mg）；                  埋、制作切片并进行苏木精-伊红（HE）染色，于显微镜下
        阿司匹林肠溶片（拜耳医药保健有限公司，批号：BJ27607，                     观察血管内膜及主动脉壁各层结构的完整程度。
        规格：0.1 g）；盐酸肾上腺素注射液（广州明兴制药厂，批                      2.5 统计学方法
        号：161201，规格：1 mL∶ 1 mg）；伊红染液（韩国Biosharp                实验数据均以 x±s 表示 ，组间比较采用 SPSS 16.0
        公司，批号：XH184601）；苏木精染液（北京索莱宝科技                      软件进行单因素方差分析，P＜0.05 表示差异有统计学
        有限公司，批号：329D0312）；NO、ET-1 酶联免疫试剂盒                  意义。
       （美国 R&D Systems 公司，批号：335566、221475）；水合             3 结果
        氯醛为分析纯，实验用水均为蒸馏水。                                  3.1 血液流变学指标变化
        1.3  动物                                                与对照组比较，模型组大鼠的高、中、低切变率的全
            SD大鼠，♀（有研究表明♀大鼠的血流变指标变化                        血黏度以及血浆黏度、红细胞聚集指数均显著升高，红
                        [12]
        较♂大鼠更为明显 ），体质量为（200±20）g，由广西医                      细胞变形指数显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.05

        中国药房    2019年第30卷第19期                                             China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 19  ·2629  ·
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