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和疼痛   [4-5] 。流行病学资料显示,有70%~80%的女性患                  供理论依据。
        有不同程度的乳腺增生,且多见于 25~45 岁的女性,其                        1 资料与方法
        癌变率约为10%~20%         [6-7] ,给患者生理和心理健康带来            1.1 药物活性成分的获取
        了严重的危害。                                                 利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP,
            乳腺增生疾病最早见于汉代华佗著《中藏经》,称为                         http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php),分别以“柴胡”“白术”
       “乳癖”。中医认为其发病病机主要是肝气郁结导致肝                            “Bupleurum”“Atractylodes”等为中英文关键词,以OB值
                                                                                                  [16]
        脾两伤、痰气互结,气血双亏导致气血瘀滞 。同时,现                          (口服吸收度)≥30%、DL值(类药性)≥0.18 为限定条
                                              [8]
        代临床研究也发现,肝气郁结是乳腺增生的常见发病机                            件检索,获得该药对具有抗乳腺增生作用的活性成分。
          [9]
        制 。因此,对于乳腺增生,中医的主要治法是疏肝健脾                           1.2 药物活性成分的预测靶标及对应基因的获取
        疗法,以达到调理肝脾、舒畅气机的目的。“柴胡-白术”                              利用Chembiodraw Ultra 12.0软件绘制“柴胡-白术”
        是疏肝健脾疗法中的常用药对,本课题组通过临床实践                            药对活性成分的 3D 结构图,并将其结构文件上传至
        观察发现,运用“柴胡-白术”药对治疗乳腺增生可取得                           DRAR-CPI 服务器(https://omictools.com/drar-cpi-tool),
                                                                                     [17]
                   [10]
        良好的效果 。现代药理学研究表明,以柴胡、白术为                            选取“Z-score<-0.5”的蛋白 ,剔除重复部分后,将所
        君臣药组方的逍遥散对雌性小鼠具有拟雌激素样作用,                            得结果作为“柴胡-白术”药对活性成分的预测靶标。在
        可增加正常小鼠子宫的质量,提高其雌二醇水平;而对                            Uniprot 数据库(https://www.uniprot.org/)中输入各预测
        于某些由于雌激素过高导致的疾病,如乳腺增生和子宫                            靶标的具体名称,限定物种为“Human”,获取预测靶标
                                                            的对应基因。
        肌瘤,逍遥散又能发挥拮抗雌激素的作用,降低血清中
                                                            1.3 “柴胡-白术”药对治疗乳腺增生的潜在作用靶标的
        雌二醇水平,并调节孕酮含量              [11-12] 。因此,本团队认为
                                                            获取
       “柴胡-白术”药对对雌激素水平具有双向调节作用,这
                                                                分别以“Hyperplasia of mammary glands”“Mamma-
        可能与其治疗乳腺增生的作用机制相关。然而,目前对
                                                            ry hyperplasia”“Breast hyperplasia”为关键词,在 Gene-
       “柴胡-白术”药对的药理作用机制研究尚不够深入,即
                                                            cards 数据库(https://www.genecards.org/)和 OMIM 数据
        使有较多关于其抗乳腺增生方面的机制研究,却只停留
                                                            库(https://www.omim.org/)中检索获得乳腺增生的疾病
        在该药对调节内分泌以及改善乳腺组织形态结构层面,
                                                            相关靶标及其对应基因。采用Excel 2013软件录入所获
        而关于该药对如何减轻乳腺组织对高浓度雌激素的反
                                                            疾病相关靶标和“1.2”项下获得的“柴胡-白术”药对活性
        应,调节血清中雌激素、孕酮、雌二醇水平等机制尚未阐
                                                            成分预测靶标的对应基因,并进行两者对比,筛选出交
        明,也未对该药对中的有效成分在体内抗乳腺增生的多
                                                            集部分,根据交集基因筛选出对应的靶标,作为“柴胡-
        靶点整合协同作用机制进行深入探讨。
                                                            白术”药对治疗乳腺增生的潜在作用靶标(下文中均以
            一般认为,中药具有“多成分、多靶点、低亲和力、低
                                                            非斜体的基因名代表其对应的靶标)。
        选择性”的作用特点 ,所以使用现代药理学理论阐述
                          [13]
                                                            1.4  活性成分-潜在作用靶标网络的构建与分析
        中药的药效物质基础和作用机制一直是研究的难点和
                                                                将“1.3”项下获得的“柴胡-白术”药对活性成分治疗
        关键点。网络药理学是基于系统生物学理论对生物系
                                                            乳腺增生的潜在作用靶标导入 Cytoscape 3.6.0 软件,构
        统进行网络分析,选取特定信息节点进行多靶点药物分
                                                            建活性成分-潜在作用靶标网络。通过网络图直观展示
        子设计的新学科,其融合了系统生物学、多向药理学、生
                                                            活性成分与潜在作用靶标之间的关系,并分析“柴胡-白
        物信息学、计算机科学等多学科的技术和内容,能够进                            术”药对治疗乳腺增生的作用特点。
        行“疾病表型-基因-靶点-药物”等多层次网络的构建,探                         1.5 潜在作用靶标的相互作用网络构建与分析
                                                [14]
        索药物与疾病间的关联性,阐明药物作用机制 。其整                                将“1.3”项下获得的“柴胡-白术”药对活性成分治疗
        体性、系统性及复杂性的研究角度和研究方法,正好与                            乳腺增生的潜在作用靶标导入 String 数据库(https://
        中医药的作用特点相符合 。                                       string-db.org),将物种限定为“Homo sapiens”,获取潜在
                              [15]
            本研究基于网络药理学方法,以“柴胡-白术”药对                         作用靶标的相互作用关系。将该关系文件导入 Cyto-
        中具有抗乳腺增生作用的主要活性成分为研究对象,通                            scape 3.6.0软件,绘制潜在作用靶标相互作用网络,并利
        过构建“药物-成分-靶点-疾病”网络,全面系统地预测和                         用 Cytoscape 3.6.0 软件中的“NetworkAnalyzer”工具对
        挖掘其作用靶点,同时结合基因本体(Gene ontology,                     该网络进行分析,获取潜在作用靶标之间的连接度(De-
        GO)分类富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyo-                         gree 值),并根据 Degree 值绘制最终的潜在作用靶标相
        to encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集      互作用网络图。
        分析,对“柴胡-白术”药对治疗乳腺增生的潜在作用机                           1.6 核心靶标的筛选及验证
        制进行分析和预测,以期为该药对的进一步开发利用提                                基于“1.5”项下构建的潜在作用靶标相互作用网络,


        ·2526  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 18                                中国药房    2019年第30卷第18期
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