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之功能，可治疗“疮疥疽瘤、乳痈溃烂、牙齿虫龋、小儿腹                         化生产，为新型抗菌剂的开发奠定基础。
        泻、赤白带下、慢性淋浊、遗精遗尿等症”。现代研究也                          参考文献
        证实，银杏内含有的银杏黄酮、银杏内酯、银杏多糖、白                          [ 1 ]  荆贝贝.银杏种仁抗菌肽的分离纯化、性质鉴定及其总
        果酸、果仁蛋白等多种生物活性物质，具有抑菌、防治心                               RNA提取[D].杨凌：西北农林科技大学，2006.
        脑血管疾病、对抗血小板活化因子、预防老年痴呆、抗炎                          [ 2 ]  郑加兰.抗菌肽的研究与应用[J].江西饲料，2010（1）：
                       [22]
        及抗肿瘤等作用 。已有报道显示，银杏中含有抗菌                                 14-18.
                   [1]
        肽，如荆贝贝 通过提取银杏种仁的总 RNA，通过建立                         [ 3 ]  HOFFMANN JA，HETRU C. Insect defensive：inducible
        反转录体系表达纯化得到具有抗细菌和真菌作用的活                                 antibacterial peptide [J]. Immunol Today，1992，13（10）：
                                                                411-415.
        性蛋白；高宁宁 将银杏种仁抗菌肽基因Gnk2-1转化甜                        [ 4 ]  杨小明，叶允荣，王萍，等.银杏叶提取物和银杏酸的抗菌
                     [23]
        瓜和西瓜的研究也提示其可增强植物的抗菌能力。
                                                                活性研究[J].食品科学，2004，25（4）：68-71.
            已有研究证实，抗菌肽与微生物的相互作用机制是                         [ 5 ]  曾献，龚玉子，王焕娇.银杏叶的药理作用[J].湖南林业科
        通过抗菌肽所带正电荷残基与微生物细胞膜表面负电                                 技，2008，35（1）：6-8.
        荷静电相互吸引结合后，与细胞膜发生相互作用而破坏                           [ 6 ]  曲晓华，辛玉峰.银杏提取物抑菌效果的研究[J].黑龙江
                    [24]
        细胞膜完整性 ，而原核细胞和真核细胞膜间的电荷区                                农业科学，2008，31（1）：25-26.
        别正是抗菌肽能选择性作用于微生物，而对真核细胞几                           [ 7 ]  刘缙，王亚红，王强，等.银杏果仁抗菌蛋白的分离纯化及
        乎无毒性或低毒性、不易造成耐药的重要原因之一。抗                                其基因克隆和原核表达初步研究[J].农业生物技术学
        菌肽的抗菌谱广、起效快速、不易产生蓄积中毒，因此可                               报，2010，18（2）：246-253.
        用于食品防腐、农业生产、愈合剂等，并有望成为新一代                          [ 8 ]  谢坤，谭玉婷，王靖，等.家蚕抗菌肽基因 BmCecropinD
                                               [25]
        的抗菌、抗病毒药物，有广泛的开发应用前景 。然而，                               的克隆及重组蛋白的自诱导表达[J].动物医学进展，
                                                                2018，39（5）：13-17.
        天然抗菌肽的来源少、分离提取成本高，无法满足基础
                                                           [ 9 ]  GAVIT P，BETTER M. Production of antitungal recombi-
        研究及临床使用需求，而利用 DNA 重组技术开发稳定
                                                                nant peptides in Escherichia coli[J]. J Biotechnol，2000，
        性更高、杀菌活性更强、杀菌谱更广、毒副作用更小的抗
                                                                79（2）：127-136.
                             [26]
        菌肽逐渐成为关注热点 。本研究通过人工合成 GBA                          [10]  APIWATTANAKUL N，THOMAS PG，KUHN RE，et al.
        基因序列，将其插入pET32a（+）表达载体后再以大肠杆                            Helminth infections predispose mice to pneumococcal
        菌进行诱导表达，获得了重组蛋白（分子量约 32 kDa）。                           pneumonia but not to other pneumonic pathogens[J]. Med
        对该重组蛋白进行体外药敏试验和MIC/MBC的测定后                              Microbiol Immunol，2014，203（5）：357-364.
        显示，其对金黄色葡萄球菌的抑制效果明显，对大肠杆                           [11]  PENG L，XU Z，FANG X，et al. High-level expression of
        菌和绿脓杆菌有一定的抑制作用，对鼠伤寒沙门氏菌抑                                soluble human defensin-2 in Escherichia coli[J]. Process
        制作用较弱；在小鼠体内实验结果显示，该重组蛋白高                                Biochem，2004，39（12）：2199-2205.
        剂量给药能显著降低金黄色葡萄球菌感染导致的小鼠                            [12]  RAO X，HU J，LI S，et al. Design and expression of pep-
        死亡率，且与抗生素青霉素的效果比较差异无统计学意                                tide antibiotic hPAB-β as tandem muhimers in Escherchia
                                                                coli[J]. Peptides，2005，26（5）：721-729.
        义；而中、低剂量重组蛋白给药对小鼠的保护作用不明                           [13]  MOON JY，HENZLER-WILDMAN KA，RAMAMOOR-
        显。考虑到抗菌肽抑菌机制主要是通过与细胞膜结合
                                                                THY A. Expression and purification of a recombinant LL-
        引起膜破损而发挥作用，故细胞膜的不同组成对抗菌肽
                                                                37 from Escherichia coli[J]. Biochim Biophys Acta，2006，
        的活性和选择性毒性有很大影响，且抗菌肽在细胞膜                                 1758（9）：1351-1358.
        上形成孔的能力主要与抗菌肽的浓度和环境 pH 值有                          [14]  李珍，李从荣.细菌快速药敏试验方法研究进展[J].检验
        关  [27-30] ，因此笔者认为这也是本研究所测得重组蛋白对                        医学与临床，2016，13（8）：1142-1144.
        不同菌种的体外抑菌效果有所不同、高剂量给药对金黄                           [15]  谭瑶，赵清，舒为群，等.K-B 纸片扩散法药敏试验[J].检
        色葡萄球菌感染小鼠的保护作用更强的原因所在。                                  验医学与临床，2010，7（20）：2290-2291.
            本研究由于受试菌种较少，故尚未充分明确其对革                         [16]  王辉，徐英春，陈民钧.简要介绍美国NCCLS药敏试验纸
        兰氏阴性或阳性菌抑制作用的抗菌谱。同时，由于抗菌                                片扩散法法规（1993年12月版）[J].中华医学检验杂志，
                                                                1995，18（1）：60-62.
        肽的抗菌活性与肽分子的空间结构密切相关，体外合成
                                                           [17]  李国旺，苗志国，赵恒章.大黄的体外抑菌实验[J].光谱实
        的抗菌肽与天然抗菌肽虽然一级结构一致，但空间结构
                                                                验室，2011，28（1）：67-68.
        却不尽相同，因此活性可能存在差异；此外，还存在可引起
                                                           [18]  李汉浠，任赛赛，李勇，等.枫杨萘醌对常见菌的抗菌谱、
                                                  [31]
        宿主细胞发生“自杀”而导致抗菌肽产量低的现象 。后
                                                                最低抑菌浓度和最低杀菌浓度研究[J].时珍国医国药，
        续研究中，本课题组拟对 GBA 基因采用真核表达获取                              2012，23（6）：1422-1424.
        蛋白，与大肠杆菌原核表达所获重组蛋白以及银杏中天                           [19]  刘富来，冯翠兰. 1株产肠毒素金黄色葡萄球菌致死小鼠
        然抗菌蛋白的活性进行比较；同时，采用更多表达载体                                的初步研究[J].中国动物检疫，2010，27（4）：50-51.
        进行考察，探寻更合适的载体用于后续重组蛋白的规模                           [20]  秦文艳，赵金明，齐越，等.射干提取物体内体外抑菌作用


        中国药房    2019年第30卷第18期                                            China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 18  ·2517  ·
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