Page 84 - 2019年8月第30卷第16期

续表1 300 300 2
250 250
Continued tab 1 200 200
mV 150 2 mV 150
编号 产地 收集日期 药用部位 U， 100 U， 100 1
S51 吉林省抚松县 2018年3月20日 根及根茎 50 1 50
S52 吉林省抚松县 2018年3月20日 根及根茎 0 0 5 10 15 20 25 30 35 0 0 5 10 15 20 25 30 35
S53 吉林省抚松县 2018年3月20日 根及根茎 t，min t，min
S54 吉林省抚松县 2018年3月20日 根及根茎 A.混合对照品 B.供试品
300
2 方法与结果 250
200
mV
2.1 含量测定 U， 150
100
2.1.1 色谱条件 色谱柱：Ascentis Express C18 （50 mm× 50
0
3.0 mm，2.7 μm）；流动相：0.1％磷酸水溶液（A）-乙腈 0 5 10 15 t，min 20 25 30 35
（B），梯度洗脱（洗脱程序见表 2）；流速：0.4 mL/min；柱 C.阴性对照
注：1.马钱酸；2.龙胆苦苷
温：30 ℃；检测波长：240 nm；进样量：1 μL。
Note：1.loganic acid；2.gentiopicrin
表2 梯度洗脱程序 图1 高效液相色谱图
Tab 2 Gradient elution procedure Fig 1 HPLC chromatograms
t，min A，％ B，％ 表3 回归方程与线性范围
4～8 95 5 Tab 3 Regression equation and linear range
8～12 96 4
12～18 91 9 待测成分 回归方程 r 线性范围，mg/mL
18～25 10 90 龙胆苦苷 y＝710 199.242 9x+2 670.566 7 0.999 9 0.5～3.0
25～35 90 10 马钱酸 y＝4 149 546.013 2x+893.678 6 0.999 9 0.05～0.50
2.1.2 混合对照品溶液的制备 取龙胆苦苷对照品、马 测限分别为0.082、0.081 μg/mL。
钱酸对照品适量，置于同一 10 mL 量瓶中，加甲醇溶解 2.1.8 精密度试验 取“2.1.2”项下混合对照品溶液适
并定容，制成龙胆苦苷、马钱酸质量浓度分别为 1.0、0.2 量，按“2.1.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面
mg/mL的混合对照品溶液。 积。结果，龙胆苦苷、马钱酸峰面积的 RSD 分别为
2.1.3 供试品溶液的制备 取药材样品粉末（过四号 1.64％、1.25％（n＝6），表明仪器精密度良好。
筛）约 0.5 g，精密称定，置于 50 mL 具塞锥形瓶中，加甲 2.1.9 稳定性试验 取“2.1.3”项下供试品溶液（编号：
醇 20 mL，称定质量，超声（功率：250 W，频率：40 kHz） S35）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8、10、12、24 h时
处理30 min，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质 按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，
量，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 龙胆苦苷、马钱酸峰面积的 RSD 分别为 0.56％、1.04％
2.1.4 阴性对照溶液 以甲醇为阴性对照溶液。 （n＝8），表明供试品溶液室温下放置 24 h 内稳定性
2.1.5 系统适用性试验 分别取上述混合对照品溶液、 良好。
供试品溶液、阴性对照溶液适量，按“2.1.1”项下色谱条 2.1.10 重复性试验 取药材样品粉末（编号：S35）适
件进样测定，记录色谱，详见图 1。由图 1 可知，各成分 量，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，共 6 份，再按
基线分离良好，分离度均大于 1.5，理论板数均不低于 “2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按外标法
3 000，阴性对照对测定无干扰。 计算样品中龙胆苦苷、马钱酸的含量。结果，龙胆苦苷、
2.1.6 线性关系考察 取龙胆苦苷对照品、马钱酸对照 马 钱 酸 的 平 均 含 量 为 5.23、0.88 mg/g，RSD 分 别 为
品适量，按“2.1.2”项下方法制成龙胆苦苷质量浓度分别 1.34％、0.99％（n＝6），表明本方法重复性良好。
为 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/mL、马钱酸质量浓度分 2.1.11 加样回收率试验 取已知含量的药材样品粉末
别为 0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mg/mL 的系列线性 （编号：S35）适量，共6份，精密称定，加入一定量的混合
关系工作溶液，取适量按“2.1.1”项下色谱条件进样测 对照品粉末，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按
定，记录峰面积。以待测成分质量浓度（x，mg/mL）为横 “2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样
坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，结果见表3。 回收率，结果见表4。
2.1.7 定量限与检测限考察 取“2.1.2”项下混合对照 2.1.12 样品含量测定 取 54 批药材样品粉末适量，按
品溶液，倍比稀释，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，分 “2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱
别以信噪比为10 ∶ 1、3 ∶ 1计算定量限、检测限。结果，龙 条件进样测定，记录峰面积并按外标法计算样品中龙胆
胆苦苷、马钱酸的定量限分别为 0.295、0.289 μg/mL，检 苦苷、马钱酸的含量，结果见表5。

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