Page 88 - 2019年8月第30卷第16期

柱前衍生 HPLC/FLD-APCI/MS 法同时测定藏药悬钩木中 6 种三

萜酸类成分的含量 Δ

1，2＊
1，2 #
马志良 ，赛桑杰 ，多 杰 （1.藏药新药开发国家重点实验室/青海省藏药新药开发重点实验室，西宁 810016；
1，2
2.青海省藏医药研究院，西宁 810016）

中图分类号 R284.1；R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2019）16-2243-05
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.16.16

摘 要 目的：建立同时测定藏药悬钩木中山楂酸、科罗索酸、桦木酸、路路通酸、齐墩果酸、熊果酸等6种三萜酸类成分含量的方
法。方法：采用柱前衍生高效液相色谱-荧光检测/质谱联用法。选择2-（7H-二苯并[a，g]咔唑）乙基对甲苯磺酸酯为荧光衍生化试
剂。色谱柱为 Hypersil C18，流动相为 5％乙腈水溶液-乙腈（梯度洗脱），流速为 1.0 mL/min，荧光激发波长为 300 nm，发射波长为
395 nm，柱温为35 ℃，进样量为10 μL；采用大气压化学电离源、正离子模式，喷雾压力为60 psi，干燥气流量为9 L/min，干燥气温
度为350 ℃，气化温度为450 ℃，毛细管电压为3 500 V。结果：山楂酸、科罗索酸、桦木酸、路路通酸、齐墩果酸、熊果酸检测质量浓
度线性范围均为 0.025～6.4 μg/mL（r≥0.999 6）；定量限分别为 5.11、4.78、4.42、4.22、4.29、4.51 ng/mL，检测限分别为 1.42、1.27、
1.30、1.28、1.16、1.22 ng/mL；精密度试验的RSD 均小于5％，稳定性、重复性试验的RSD均小于2％（路路通酸未检出）；加样回收
率分别为 97.90％～100.55％（RSD＝1.00％，n＝6）、97.95％～102.95％（RSD＝1.74％，n＝6）、96.00％～101.20％（RSD＝2.00％，n＝
6）、93.25％～104.20％（RSD＝4.25％，n＝6）、92.20％～103.30％（RSD＝3.58％，n＝6）、97.80％～103.50％（RSD＝2.03％，n＝6）。
结论：该方法准确、可靠，专属性好，可用于同时测定藏药悬钩木中6种三萜酸类成分的含量。
关键词 悬钩木；三萜酸；山楂酸；科罗索酸；桦木酸；路路通酸；齐墩果酸；熊果酸；柱前衍生化；高效液相色谱-荧光检测/质谱联
用；含量测定

Content Determination of 6 Kinds of Triterpene Acid in Tibetan Medicine Rubus biflorus by Pre-column
Derivatization HPLC/FLD-APCI /MS
MA Zhiliang 1，2 ，SAI Sangjie 1，2 ，DUO Jie 1，2 （1. State Key Laboratory of Tibetan Medicine Research and
Development/Qinghai Province Key Laboratory of Tibetan Medicine Research and Development， Xining
810016，China；2. Qinghai Tibetan Medicine Research Institute，Xining 810016，China）

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for content determination of 6 kinds of triterpene acids such as haw acid，
corosolic acid，betula acid，betulonic acid，oleanolic acid and ursolic acid in Tibetan medicine Rubus biflorus. METHODS：
Pre-column devrivatization HPLC-FLD-APCI/MS method was adopted. 2-（7H-dibenzo[a，g]carbazol-7-yl） ethyl-4-methylbenzene-
sulfonate was used as the pre-column derivatization reagent．Hypersil C18 column was used with the mobile phase consisted of 5％
acetonitrile water solution-acetonitrile（gradient elution）at the flow rate of 1.0 mL/min. The excitation wavelength of fluorescence
was 300 nm and the emission wavelength was 395 nm. The column temperature was 35 ℃，and sample size was 10 μL. Under
atmospheric-pressure chemical ionization（APCI）source in positive-ion mode，pressure was 60 psi，the drying gas flow rate was 9
L/min，the dry gas temperature was 350 ℃，the gasification temperature was 450 ℃，and the capillary voltage was 3 500 V.
RESULTS：The linear range of haw acid，corosolic acid，betula acid，betulonic acid，oleanolic acid and ursolic acid were 0.025-6.4
μg/mL（r≥0.999 6）. The quantitative limits were 5.11，4.78，4.42，4.22，4.29，4.51 ng/mL；and detection limits were 1.42，1.27，
1.30，1.28，1.16，1.22 ng/mL，respectively. RSD of precision test was less than 5％，stability and repeatability tests were all less
than 2％（no betulonic acid detected）. The recovery rates were 97.90％-100.55％（RSD＝1.00％，n＝6），97.95％-102.95％（RSD＝
1.74％ ，n＝6），96.00％ -101.20％（RSD＝2.00％ ，n＝6），93.25％ -104.20％（RSD＝4.25％ ，n＝6），92.20％ -103.30％（RSD＝
3.58％ ，n＝6），97.80％ -103.50％（RSD＝2.03％ ，n＝6），respectively. CONCLUSIONS：The method is accurate，reliable and
exclusive，and can be used for simultaneous determination of 6 kinds of triterpene acids in Tibetan medicine R. biflorus.
KEYWORDS Rubus biflorus；Triterpene acid；Haw acid；
Δ 基金项目：藏药新药开发国家重点实验室项目（No.2015DQ87-
Corosolic acid；Betula acid；Betulonic acid；Oleanolic acid；
0717）；青海省科技计划项目（No.2017-ZJ-Y15）
Ursolic acid；Pre-column derivation；HPLC-FLD-APCI/MS；
＊助理研究员。研究方向：藏药质量标准研究。电话：0971-
8271096。E-mail：mzl3205@126.com Content determination
# 通信作者：主任医师。研究方向：藏医药基础研究。电话：
0971-8271096。E-mail：duojie0302@sina.com

中国药房 2019年第30卷第16期 China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 16 ·2243 ·