Page 80 - 2019年8月第30卷第16期

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“2.2.1”项下混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样 的紫外吸收来定位待测成分色谱峰 。本研究以芍药苷
不同体积进行测定，计算相对校正因子（fk/s ），并取其平 为内参物，参照“2.1”项下色谱条件，在不同色谱系统和
均值用于QAMS法定量分析。相对校正因子计算公式： 不同色谱柱条件下考察其余各待测成分的相对保留时
fk/s＝（Ws×Ak ）/（Wk×As ），式中 Ws为内参物进样量，As为内 间的重现性。结果显示，芦丁、木蝴蝶苷B、黄芩苷、肉桂
参物峰面积，Wk为成分 k 的进样量，Ak为成分 k 的峰面 酸与内参物芍药苷的相对保留时间的 RSD 均小于
积。内参物芍药苷（a）的含量采用外标法计算，其他4种 5％。这表明在不同色谱系统和不同色谱柱条件下各待
成分即芦丁（b）、木蝴蝶苷 B（c）、黄芩苷（d）、肉桂酸（e） 测成分的相对保留时间重现性良好，详见表 6（注：内参
的含量则采用各自与内参物的 fk/s进行计算。各待测成 物芍药苷的相对保留时间略去）。
分相对校正因子计算结果见表4（注：内参物芍药苷的相 表6 不同仪器和色谱柱条件下4种待测成分的相对保
对校正因子略去）。 留时间
表4 4种待测成分的相对校正因子 Tab 6 Relative retention time of 4 components to be
Tab 4 RCFs of 4 components to be measured measured under different instruments and co-
混合对照品进样体积，μL fb/a fc/a fd/a fe/a lumns
2 0.551 9 1.817 1 2.470 2 5.487 1
4 0.553 0 1.800 6 2.530 2 5.462 2 色谱仪 色谱柱 rb/a r c/a r d/a r e/a
6 0.552 1 1.823 5 2.503 1 5.342 7 Agilent1260 Hypersil GOLD-C18 1.894 1.984 2.703 2.768
8 0.549 5 1.810 6 2.495 2 5.392 2 Inertsil ODS-3 1.921 1.965 2.752 2.792
10 0.560 7 1.828 0 2.420 9 5.402 1 Agilent1200 Hypersil GOLD-C18 1.895 1.911 2.653 2.831
12 0.556 2 1.806 2 2.513 6 5.436 8 Inertsil ODS-3 1.812 1.920 2.736 2.753
16 0.558 5 1.823 3 2.492 2 5.439 3 Shimadzu LC-2030 Hypersil GOLD-C18 1.806 2.052 2.625 2.701
相对校正因子平均值 0.554 6 1.815 6 2.489 3 5.423 2 Inertsil ODS-3 1.865 2.033 2.661 2.728
RSD，％ 0.73 0.56 1.43 0.89 相对保留时间平均值 1.866 1.978 2.688 2.762
RSD，％ 2.54 2.91 1.87 1.67
2.9.2 相对校正因子的重现性考察 在一定范围内改
2.10 QAMS法测定咽炎片中5种指标性成分含量及其
变流动相比例、流速、柱温，考察分析条件的变化对相对
与外标法测定结果的比较
校正因子的影响。结果显示，流动相比例、流速和柱温
分别采用外标法测定 10 批咽炎片中芍药苷、芦丁、
在±5％范围内变化时各待测成分的相对校正因子的
木蝴蝶苷B、黄芩苷、肉桂酸的含量；同时，以芍药苷为内
RSD 均小于 5％，表明其对各待测成分相对校正因子的
参物，采用QAMS法对其他4种成分进行定量分析。以
影响较小。同时，分别采用不同品牌的色谱系统（Agi-
相对误差[RE，计算公式：RE＝（QAMS法测得含量－外
lent 1260、Agilent 1200、Shimadzu LC-2030）和 色 谱 柱
标法测得含量）/外标法测得含量×100％]对两种方法测
[Hypersil GOLD-C18 （250 mm × 4.6 mm，5 μ m）、Inertsil
定结果进行比较。结果显示，两种方法测得含量的 RE
ODS-3（250 mm×4.6 mm，5 μm）]，考察其对相对校正因
绝对值均小于1％，表明其测定结果一致，详见表7（注：
子的影响，结果各待测成分的相对校正因子的RSD均小
内参物芍药苷的两种方法测定结果数据相同）。
于 5％，表明在不同色谱系统和色谱柱条件下各待测成
3 讨论
分相对校正因子具有良好的重现性，详见表 5（注：内参
物芍药苷的相对校正因子略去）。 本研究前期考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸水
表5 不同仪器和色谱柱条件下4种待测成分的相对校 溶液等流动相系统的分离效果，结果表明甲醇-0.35％磷
正因子 酸水溶液对5种待测成分的分离效果最佳、分析时间也
Tab 5 RCFs of 4 components to be measured under 较短，故确定甲醇-0.35％磷酸水溶液为流动相。此外，
different instruments and columns 分别对5种待测成分在190～400 nm波长范围内的紫外
吸收情况进行考察，结果显示芍药苷在230 nm波长处有
色谱仪 色谱柱 fb/a fc/a fd/a fe/a
Agilent1260 Hypersil GOLD-C18 0.560 7 1.828 0 2.420 9 5.402 1 吸收峰，木蝴蝶苷B、黄芩苷、肉桂酸在280 nm波长处有
Inertsil ODS-3 0.551 3 1.913 2 2.405 1 5.562 0 吸收峰，芦丁在 258、354 nm 波长处均有吸收且在 280
Agilent1200 Hypersil GOLD-C18 0.562 3 1.821 7 2.521 2 5.362 2
Inertsil ODS-3 0.586 2 1.776 4 2.423 7 5.462 7 nm波长处有较强吸收，综合考虑后，选择230 nm作为芍
Shimadzu LC-2030 Hypersil GOLD-C18 0.579 7 1.753 9 2.582 2 5.632 2 药苷的检测波长，280 nm 作为其余 4 种成分的检测波
Inertsil ODS-3 0.582 7 1.806 2 2.625 0 5.623 0
相对校正因子平均值 0.570 5 1.816 6 2.496 4 5.507 4 长。在本研究色谱条件下，咽炎片中5种指标性成分的
RSD，％ 2.50 3.03 3.76 2.09 出峰顺序分别为芍药苷、芦丁、木蝴蝶苷B、黄芩苷、肉桂
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2.9.3 待测成分色谱峰定位 色谱峰的准确定位一般 酸。根据相关文献对内参物选择的要求 ，芍药苷出峰
采用相对保留时间，同时结合色谱图整体特征和特征峰 附近干扰成分少、出峰时间快、廉价易得，故选择其作为

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