Page 56 - 2019年8月第30卷第16期
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        致疾病 。                                              mL，即得桃核承气汤水提液，备用。
            目前，《古代经典名方目录（第一批）》中详细记载了                       2.2 HPLC法测定4种指标性成分的含量
                                             [3]
        桃核承气汤的方名、出处、处方、制法及用法 ，但由于古                         2.2.1  大黄酸、甘草酸含量测定色谱条件                  色谱柱：
        今制剂方式的更迭变化和现代市场应用的需要，对其现                           Diamonsil C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈
        代提取工艺的优化已成为该方剂进一步开发应用亟待                            （A）-0.1％磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～20 min，10％
        解决的关键问题。现代药理研究表明，桃仁、大黄、桂                           A→40％ A；20～30 min，40％ A→50％ A；30～70 min，
        枝、甘草的主要活性成分分别为苦杏仁苷、大黄酸、桂皮                          50％A→10％A）；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；柱
        醛、甘草酸    [5-8] 。基于此，本课题组以上述 4 种成分含量                温：30 ℃；检测波长：250 nm。
        为指标，在单因素试验的基础上，采用响应面试验设计                      [9]  2.2.2  苦杏仁苷、桂皮醛含量测定色谱条件                  色谱柱：
        进一步优化工艺，根据信息熵理论               [10-12] 对该方中 4 种主    Diamonsil C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈
        要指标性成分的含量赋予权重系数并计算综合评分，同                           （A）-水（B），梯度洗脱（0～10 min，10％A；10～20 min，
        时对各因素的交互作用进行分析，最终确定该方的最佳                           10％A→20％A；20～30 min，20％A；30～60 min，20％
        水提取工艺，为桃核承气汤以及相关经典名方的现代工                           A→45％ A；60～70 min，45％ A→10％ A）；流 速 ：1.0
        艺研究提供参考。                                           mL/min；进样量：10 μL；柱温：30 ℃；检测波长：210 nm
        1 材料                                               （苦杏仁苷）、290 nm（桂皮醛）。
                                                           2.2.3  混合对照品溶液制备           称取大黄酸、苦杏仁苷、
        1.1 仪器
                                                           甘草酸、桂皮醛对照品各适量，精密称定，分别置于5 mL
            e2695 型高效液相色谱（HPLC）仪，包括 2489 型紫
                                                           量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成上述成分
        外-可见光检测器（美国Waters公司）；TG328B型电子分
                                                           质量浓度分别为1 340、160、880、290 μg/mL的单一对照
        析天平（上海精科仪器厂）；KQ-100E 型超声波清洗器
                                                           品贮备液。精密吸取上述各贮备液适量，置于同一 10
       （昆山市超声仪器有限公司）；RE-52型旋转蒸发器（上海
                                                           mL 量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，制成上述
        亚荣生化仪器厂）；SAS 67120型超纯水系统（法国Milli-
                                                           成分质量浓度分别为 340、120、220、70 μg/mL 的混合对
        pore公司）。
                                                           照品溶液。
        1.2  药品与试剂
                                                           2.2.4  供试品溶液制备         精密吸取“2.1”项下桃核承气
            大 黄 酸 对 照 品（批 号 ：MUST-11032801，纯 度 ：
                                                           汤水提液样品1 mL，置于5 mL量瓶中，加甲醇稀释并定
        98％）、甘草酸对照品（批号：MUST-17032205，纯度：
                                                           容至刻度，摇匀，静置，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤
        99.55％）均购自成都曼斯特生物科技有限公司；苦杏仁
                                                           液，即得。
        苷 对 照 品（成 都 草 源 康 生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 ：
                                                           2.2.5  专属性试验       取“2.2.3”项下单一对照品贮备液、
        Z1709131，纯度：98％）；桂皮醛对照品（上海源叶生物科
                                                          “2.2.4”项下供试品溶液，分别按“2.2.1”“2.2.2”项下色谱
        技有限公司，批号：H02M6Q1，纯度：98％）；乙腈、甲醇
                                                           条件进样测定，色谱见图1。结果显示，在上述色谱条件
        为色谱纯，磷酸为分析纯，水为自制超纯水。
                                                           下，理论板数以苦杏仁苷峰计不低于 3 000，4 种待测成
        1.3  药材
                                                           分之间及其与杂质峰之间的分离度均大于 1.5，能实现
            各药材饮片均购于河北省石家庄市乐仁堂药店。
                                                           基线分离，且互不干扰，表明本方法专属性均良好。
        经河北中医学院药学院侯芳洁副教授鉴定，桃仁为蔷薇
                                                           2.2.6  线性关系考察        分别称取大黄酸、苦杏仁苷、甘
        科植物桃[Prunus persica（L.）Batsch]的干燥成熟种子，
                                                           草酸、桂皮醛对照品适量，以甲醇配制成系列线性梯度
        大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）的干燥                  溶液，按“2.2.1”“2.2.2”项下色谱条件进样不同体积进行
        根及根茎，桂枝为樟科植物肉桂（Cinnamomum cassia                   测定。以待测成分进样量（x，μg）为横坐标、峰面积（y）
        Presl）的干燥嫩枝，甘草为豆科植物甘草（Glycyrrhiza                  为纵坐标进行线性回归，结果表明上述成分在相应进样
        uralensis Fisch.）的干燥根及根茎，芒硝为硫酸盐类矿物                 量范围内线性关系良好。回归方程与线性范围详见
        芒硝族芒硝经加工精制而成的结晶体。                                  表1。
        2 方法与结果                                            2.2.7  精密度试验       精密吸取“2.2.3”项下混合对照品
        2.1 桃核承气汤水提液制备                                     溶液适量，按“2.2.1”“2.2.2”项下色谱条件连续进样测定
                           [1]
            按原方处方比例 称取桃仁 1.5 g、大黄 6 g、桂枝 3                 6 次，记录峰面积。结果，大黄酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂
        g、炙甘草 3 g、芒硝 3 g；前 4 味药混合后，按一定料液比                  皮 醛 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 0.79％ 、0.77％ 、0.92％ 、
        加入水浸泡，在首次煎煮前补足饮片吸水量，煎煮3次，                          0.87％（n＝6），表明仪器精密度良好。
        滤过；合并滤液，加入芒硝后继续煎煮约1 min使其充分                        2.2.8  稳定性试验       取同一供试品溶液（水提液制备日
        溶解；采用旋转蒸发器在 70 ℃减压浓缩上述滤液至 50                       期：20180615）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8、12 h


        中国药房    2019年第30卷第16期                                            China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 16  ·2211  ·
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