Page 52 - 2019年8月第30卷第16期
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雪 上 一 枝 蒿 为 毛 茛 科 植 物 短 柄 乌 头（Aconitum         混匀、乳化，制成质量浓度为2.5 mg/mL的牛Ⅱ型胶原蛋
        brachypodum Diels）、铁棒锤（A. pendulum Busch）和宣威       白乳剂。于大鼠左足皮下注射上述乳剂 0.1 mL 进行免
        乌头（A. subrosullatum H-M.）的干燥块根，具祛风除湿、              疫，14 d 后避开上次免疫部位再以相同剂量注射 1 次以
        通利关节之功效，是贵州、云南等地的民间用药，收载于                          加强免疫。
       《贵州省中药材、民族药材质量标准》 。生物碱类成分                           2.2 大鼠分组与给药
                                        [1]
        是该药材的有效组分，也是其毒性成分，故其治疗量与                               所有大鼠均适应性饲养1周后，随机分为空白组、模
                      [2]
        中毒量十分相近 。经皮给药为含有毒性成分药材的常                           型组、阳性组（复方醋酸地塞米松软膏，0.2 g/kg）和雪总
        用给药方式，具有无肝脏首关效应、生物利用度高、给药                          碱低、中、高剂量组（56.26、112.50、225.00 mg/kg，以提取
        方便等优势。本课题组前期药理研究表明，雪总碱具有                           物中雪总碱的质量计），每组10只。各给药组给药剂量
                            [3]
                                                                          [4]
        显著的镇痛、抗炎作用 ，但尚未见其对类风湿关节炎                           经查阅相关文献 并参照本课题组前期急性毒性试验                        [5]
       （RA）治疗作用的相关报道。为此，本研究以胶原诱发                           确定。除空白组外，其余各组大鼠均按“2.1”项下方法复
        关节炎（CIA）模型大鼠为对象，通过检测其足肿胀度以                         制 CIA 大鼠模型。自造模当日（即第 1 次注射后，下同）
        及血液中相关炎症因子的含量和关节滑膜组织中 c-fos                        起，各给药组大鼠均于左足涂抹相应药物（阳性组药物
        基因表达产物FOS蛋白的表达水平，从炎症因子和分子                          为直接涂抹，雪总碱各剂量组药物以65％乙醇稀释后涂
        蛋白水平等方面探讨雪总碱对 CIA 模型大鼠的改善作                         抹），空白组和模型组大鼠均于左足涂抹等容65％乙醇，
        用及可能机制，并借助信息熵理论综合评价不同剂量雪                           每日3次，连续28 d。
        总碱对上述指标的影响，以期为其外用新剂型的研发和                           2.3 大鼠足肿胀度检测
        临床应用提供实验依据。                                            分别于造模前和给药第 7、14、21、28 天时用游标卡
        1 材料                                               尺测量各组大鼠左后足趾厚度并计算足肿胀度，足肿胀
        1.1  仪器                                            度＝（给药后足趾厚度－造模前足趾厚度）/给药后足趾
            Multlskan Mk3型酶标仪[赛默飞世尔科技（中国）有                 厚度。
        限公司]；BX51T-PHD-J11 型显微镜（日本 Olympus 公               2.4  大鼠血清炎症因子含量检测
        司）；CMIA98A 型图像分析仪（美国 Media Cybermetics                 末次给药1 h后，于大鼠腹主动脉取血适量，以5 000
        公司）；HC-2062型高速离心机（安徽中科中佳科学仪器                       r/min 离心 10 min，分离血清。使用 ELISA 法以酶标仪
        有限公司）；AUY220 型分析天平[梅特勒-托利多仪器                       检测各组大鼠血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。严格
       （上海）有限公司]。                                          按照相应试剂盒说明书操作。
        1.2  药品与试剂                                         2.5  大鼠滑膜组织中FOS蛋白表达水平检测
            雪总碱提取物（本实验室自制；每100 g药材共提取                          取血后，将大鼠固定，用75％乙醇擦拭膝关节后，沿
        雪总碱 1.32 g，提取率为 1.32％）；复方醋酸地塞米松软                   膝关节正中切开皮肤，暴露并打开关节腔，用眼科镊将
        膏（阳性对照，华润三九医药股份有限公司，批号：                            滑膜组织轻轻夹住，用刀片将其完整切下，置于4％多聚
        1718004H，规格：复方）；不完全弗氏佐剂、牛Ⅱ型胶原蛋                     甲醛溶液中固定 72 h 后，包埋、切片（3～5 μm）、脱蜡。
        白（北京博蕾德生物科技有限公司，批号分别为150514、                       切片滴加鼠源C-FOS抗体适量，经DAB显色、苏木精复
        150374）；鼠源 C-FOS 抗体（圣克鲁斯生物技术有限公                    染后，封片，于显微镜下观察。在滑膜组织切片中分别
        司，批号：00058736）；大鼠白细胞介素 1β（IL-1β）、IL-6、             选取左上、左下、右上、右下、中央等5个视野，采用图像
        肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫吸附测定（ELISA）试                     分析仪进行FOS阳性颗粒计数（阳性颗粒呈浅棕色或深
        剂盒（批号：1218E18）和苏木精染色剂均购自南京赛博                       棕色），并以免疫组化评分（HIS）表示FOS蛋白的表达水
        生物科技有限公司；DAB 显色剂（北京索莱宝科技有限                         平（HIS＝阳性颗粒评分×阳性细胞染色程度，式中，阳性
        公司）；其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。                               颗粒评分标准——0 分为阴性，1 分为弱阳性，2 分为阳
        1.3 动物                                             性，3 分为强阳性；染色程度量化标准（以染色面积百分
            SPF 级 SD 大鼠 60 只，雄性，体质量（200±20）g，购             比计）——0 分为染色面积百分比 0～1％，1 分为＞
        自长沙市天勤生物技术有限公司，动物生产许可证号：                           1％～10％，2分为＞10％～50％，3分为＞50％～80％，4
        SCXK（湘）2014-0011。所有大鼠均分笼饲养，自由摄                     分为＞80％～100％ ）。
                                                                            [6]
        食、饮水。                                              2.6 统计学方法
        2 方法                                               2.6.1  方差分析      采用 SPSS 19.00 软件对数据进行统
        2.1  大鼠造模                                          计分析。计量资料均以x±s表示，多组间比较采用单因
            将牛Ⅱ型胶原蛋白溶于醋酸溶液中，4 ℃搅拌过夜，                       素方法分析，两组间比较采用 LSD 分析。P＜0.05 为差
        待其充分溶解后，加入等体积的不完全弗氏佐剂，充分                           异有统计学意义。


        中国药房    2019年第30卷第16期                                            China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 16  ·2207  ·
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