Page 25 - 《中国药房》2026年10期

HepG2 cells， significantly up-regulated the mRNA expression of DEPTOR and the protein expression of PTEN， and significantly
down-regulated the protein expression of PI3K and the phosphorylation level of Akt protein （except for 0.25 mg/mL isochlorogenic
acid A） （P＜0.05）. A total of 304 differential metabolites and 212 differentially expressed genes were screened by multi-omics
analysis. KEGG pathway enrichment analysis suggested that isochlorogenic acid A regulated key signaling of HepG2 cell growth
mainly by inhibiting the PI3K/Akt signaling pathway， synergizing with metabolic reprogramming such as mTOR signaling
pathway， ferroptosis， pentose phosphate pathway and purine/pyrimidine metabolism. CONCLUSIONS The anti-hepatocellular
carcinoma effect of isochlorogenic acid A is associated with the blockade of abnormal activation of the PI3K/Akt/mTOR signaling
pathway. In addition， it may also be related to the inhibition of the pentose phosphate pathway and purine/pyrimidine metabolism，
as well as the induction of ferroptosis，etc.
KEYWORDS isochlorogenic acid A； hepatocellular carcinoma； PI3K/Akt/mTOR signaling pathway； metabolic reprogramming；
metabolomics； transcriptomics

肝癌是全球范围内发病率和致死率均位居前列的 Imagequant 800 型多功能凝胶成像系统（美国 Cytiva 公
恶性肿瘤，其治疗（尤其是晚期患者）面临靶向药物耐药 司）、Heal Force HF240 型 CO2培养箱（力康生物医疗科
与毒副作用等严峻挑战 [1―2] 。天然产物因其多样的化学 技控股有限公司）等。
[3]
结构和生物活性，已成为抗肿瘤药物研发的重要来源 。 1.2 主要药品与试剂
异绿原酸 A 是一种天然的酚类化合物，具有抗氧化、抗 异绿原酸 A 标准品（批号 A0025，纯度≥98%）购自
炎、抗病毒等生物活性，在结直肠癌等模型中已展现出 成都曼斯特生物科技有限公司；RNA 快速提取试剂盒
[4]
明确的抗肿瘤活性 ，且在肝癌相关研究中表现出优于 （批 号 R001-100T）、反 转 录 试 剂 盒（货 号 SB-RT001-
[5]
绿原酸的细胞生长抑制能力 ，但其在抗肝癌中的具体 100T）、高效RIPA裂解液（货号SB-BR040）、ECL发光液
分子机制，尤其是与关键信号通路的关联，尚缺乏系统 （货号 SB-WB004）均购自上海圣尔生物科技有限公司；
阐释。 CCK-8 试剂盒（货号 C0038）、磷酸化 Akt1（phosphory‐
磷脂酰肌醇 3 激酶/蛋白激酶 B/哺乳动物雷帕霉素 lated Akt1，p-Akt1）（Ser473）兔 单 克 隆 抗 体（货 号
靶 蛋 白（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/ AF1546）、Akt1 兔单克隆抗体（货号 AF1777）、mTOR 兔
mammalian target of rapamycin，PI3K/Akt/mTOR）信号通 单克隆抗体（货号 AF1648）、辣根过氧化物酶标记的山
路是调控细胞生长、增殖与代谢的核心通路，在约 50% 羊抗兔IgG（H+L）二抗（货号A0208）均购自上海碧云天
的肝癌患者中被发现异常激活，与肿瘤的发生、发展及 生物技术股份有限公司；PI3K抗体（货号4249）、人第10
不良预后密切相关 [6―8] 。近年来研究表明，部分天然产 号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物（phosphatase
[9]
物可通过干预该通路发挥抗肝癌作用 。然而，异绿原 and tensin homologue deleted on chromosome ten，PTEN）
酸 A 的抗肝癌效应是否与抑制 PI3K/Akt/mTOR 信号通 抗体（货号 9559）均购自美国 Cell Signaling Technology
路有关，目前尚未见明确报道；且现有研究多停留在表 公司；甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate
型观察，难以深入揭示其复杂的分子调控网络。多组学 dehydrogenase，GAPDH）兔单克隆抗体（货号 AB0037）
技术（如转录组学、代谢组学）能够从基因表达和代谢重 购自上海埃必威生物技术有限公司。
编程等多个维度系统性地解析药物对细胞生命活动的 1.3 实验细胞
影响，突破传统单一分子靶点研究的局限。基于此，本 人肝癌HepG2细胞株（货号CL0103）购自武汉普诺

研究基于多组学技术和 PI3K/Akt/mTOR 信号通路探讨 赛生命科技有限公司，并经短串联重复序列鉴定。
了异绿原酸A抗肝癌的作用机制，以期为阐明异绿原酸 2 方法
A的抗肝癌作用机制及肝癌的治疗提供参考。 2.1 细胞培养
1 材料 HepG2细胞培养于含10%胎牛血清和1%青链霉素
1.1 主要仪器 的 MEM 培养基中，置于 37 ℃、5%CO2细胞培养箱内培
本研究所用仪器包括Epoch型酶标仪（美国Agilent 养。当细胞密度达到80%～90%时进行传代，传代时弃
公司）、DMIL LED 型倒置显微镜（德国 Leica 公司）、 原培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤 1 次，加入 0.25%
QuantStudio5 型实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR） 胰酶，消化2 min，待细胞变圆、间隙增大后，立即加入含
仪（美 国 Thermo Fisher Scientific 公 司）、Amersham 血清的完全培养基终止消化，制成单细胞悬液，接种到

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