Page 59 - 《中国药房》2026年8期

2.3 大鼠神经功能评估 转 膜 后 封 闭 ，加 入 Gas6、Bcl-2、Bax、p-Axl、Axl 和
给药结束后 24 h 进行 Zea-Longa 神经功能评分，并 GAPDH一抗（稀释比例分别为1∶1 000、1∶1 000、1∶5 000、
进行 Morris 水迷宫实验，记录大鼠逃避潜伏期、目标象 1∶1 000、1∶1 000、1∶50 000），于 4 ℃下孵育过夜；次日，
限滞留时间以及穿越平台次数。 加入相应二抗（稀释比例为1∶5 000），室温孵育2 h；使用
2.4 样本采集 ECL 化学发光试剂显影，通过成像系统采集信号，并采
神经功能评估完毕后，各组大鼠经腹腔注射 3% 戊 用 Image J 1.53t 软件分析条带灰度值，以 GAPDH 为内
巴比妥钠溶液麻醉，取腹主动脉全血样本1 mL，以3 000 参计算目的蛋白的相对表达量。实验重复3次。
r/min离心 10 min 后分离上层血清，分装于无菌 EP 管中 2.11 统计学分析
并置于－80 ℃保存。随后处死大鼠，立即断头取脑，脑 采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。计量资
组织经液氮速冻后转移至－80 ℃保存。 料以 x±s 表示，多组间比较时，先经 Levene 检验验证方
2.5 血清中炎症因子含量检测 差齐性：若方差齐，采用单因素方差分析，进一步两两比
每组随机选取“2.4”项下 6 只大鼠的血清适量，按 较采用 SNK‑q 检验；若方差不齐，则采用 Welch 校正方

ELISA试剂盒说明书操作，使用酶标仪在450 nm波长处 差分析。检验水准α＝0.05。
测定吸光度，计算IL-6、TNF-α及IL-1β含量。 3 结果
2.6 脑梗死面积检测 3.1 SPS对大鼠神经功能的影响
每组随机选取“2.4”项下6只大鼠的脑组织适量，定 与 Sham 组比较，Model 组大鼠 Zea-Longa 神经功能
位切取连续冠状切片（厚度2 mm），经TTC染色后，采集 评分、逃避潜伏期均显著升高/延长，目标象限滞留时间、
全脑断面图像，通过Image‑Pro Plus 6.0图像分析软件计 穿越平台次数均显著缩短/减少（P＜0.01）。与Model组
算脑梗死面积百分比（%）。 比较，SPS-L 组、SPS-H 组和 SPS-H+Nim 组大鼠 Zea-
2.7 海马组织形态学变化观察 Longa 神经功能评分、逃避潜伏期均显著降低/缩短，目
每组随机选取“2.4”项下6只大鼠的脑组织适量，经 标象限滞留时间、穿越平台次数均显著延长/增加（P＜
4% 多聚甲醛 PBS（pH 7.4）固定 72 h 后，用梯度乙醇脱 0.05或P＜0.01）。结果见图1。
水，石蜡包埋，切片（5 μm，包含完整海马结构）。切片经 b b
4 b 50 b
b a b a
二甲苯脱蜡后，采用HE染色，中性树胶封片。使用正置 3 40
显微镜进行全视野扫描成像，观察海马组织病理形态学 2 逃避潜伏期/s 30
变化。 Zea-Longa评分/分 20
2.8 海马神经元凋亡检测 1 10
0 0
取“2.7”项下的脑组织石蜡切片，经二甲苯脱蜡及梯 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
A. Zea-Longa神经功能评分 B.逃避潜伏期
度乙醇水化后，按TUNEL检测试剂盒说明书操作，使用
60 b 20
激光共聚焦显微镜系统（激发波长488 nm/发射波长530 b b b
nm）采集海马 CA1 区全层荧光图像，通过 Image J 1.53t 40 b b 15 b b
软件计数并分析凋亡细胞，阳性判定标准为：绿色荧光 目标象限滞留时间/s 穿越平台次数/次 10
2
颗粒（FITC 通道）面积＞50 μm 且荧光强度＞背景值的 20 5
3倍标准差。
0 0
2.9 海马组织中MDA、SOD和BDNF含量检测 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
C.目标象限滞留时间 D.穿越平台次数
每组随机称取6只大鼠的海马组织100 mg，制成匀 Ⅰ：Sham组；Ⅱ：Model组；Ⅲ：SPS-L组；Ⅳ：SPS-H组；Ⅴ：SPS-H+
浆液，于 4 ℃下以 3 000×g 离心 10 min，取上清液分装 Nim组；a：P＜0.05；b：P＜0.01。
至预冷 EP 管中，于－80 ℃冻存。取上清液适量，按 图1 各组大鼠神经功能评估结果比较（x±s，n＝10）
ELISA试剂盒说明书操作，检测海马组织中MDA、SOD 3.2 SPS对大鼠血清中炎症因子含量的影响
和BDNF含量。 与 Sham 组比较，Model 组大鼠血清中 IL-6、TNF-α
2.10 海马组织中 Gas6/Axl 信号通路及凋亡相关蛋白 和 IL-1β 含量均显著升高（P＜0.01）；与 Model 组比较，
表达检测 SPS-L 组、SPS-H 组和 SPS-H+Nim 组大鼠血清中 IL-6、
精密移取“2.9”项下匀浆上清液50 μL，按BCA法测 TNF-α 和 IL-1β 含量均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。
定蛋白浓度后，煮沸变性。取变性蛋白，经电泳、分离、 结果见图2。

中国药房 2026年第37卷第8期 China Pharmacy 2026 Vol. 37 No. 8 · 1017 ·