Page 53 - 《中国药房》2026年8期
P. 53

入蒸馏水 600 mL，按相同方法煮沸后用文火煎煮 20                       assessment  of  insulin  resistance，HOMA-IR）：HOMA-
                                                                                               [5]
          min，滤出煎液；合并两次煎液，浓缩至生药含量为 1.11                      IR＝FBG（mmol/L）×FINS（mU/L）/22.5 。另每组随机
          g/mL，置于4 ℃冷藏保存。                                    选取“2.4”项下 6 只大鼠的卵巢组织，制备成匀浆液，以
          2.2 来曲唑药液制备                                        4 000 r/min离心10 min后收集上清液，按照ELISA试剂
              称取羧甲基纤维素钠对照品1.0 g，加入蒸馏水搅拌                      盒说明书进行操作，检测卵巢组织中TNF-α、IL-18和IL-
          至完全溶解，定容至 100 mL，配制成 1% 羧甲基纤维素                     1β水平。
          钠溶液。取来曲唑对照品25 mg，混悬于100 mL上述溶                      2.7 卵巢组织形态观察
          液中，充分混匀，配制成质量浓度为 0.25 mg/mL 的来曲                        取“2.4”项下各组剩余 6 只大鼠的卵巢组织，置于
          唑药液。                                               4% 多聚甲醛溶液中固定 24 h，随后经磷酸盐缓冲液漂
          2.3 分组、建模与给药                                       洗、梯度乙醇脱水、二甲苯透明及浸蜡处理，最后进行石
              将大鼠按随机数字表法分为正常（Con）组、PCOS                      蜡包埋、切片（厚度 5 μm）并进行 HE 染色，于光学显微
          组、JPHTF 低剂量（JPHTF-L）组、JPHTF 高剂量（JPHTF-             镜下观察卵巢组织形态，并统计视野内囊性卵泡和黄体
          H）组、JPHTF-H+rHMGB1 组和二甲双胍组，每组 12 只。                数量，取5个视野的平均值。囊性卵泡表现为：卵泡腔异
          除Con组外，其余各组大鼠均建立PCOS模型：采用来曲                        常扩张，直径显著大于同期正常卵泡，颗粒细胞层变薄、
          唑药液（4 mL/kg）灌胃，同时喂食高脂饲料（脂肪 45%、                    排列紊乱甚至脱落，无明显卵母细胞或仅存退化卵母细
                                                  [8]
          碳水化合物 35%、蛋白质 20%），连续造模 21 d 。于造                   胞结构；黄体表现为：由排卵后的卵泡壁塌陷分化形成，
          模第 10 天开始进行阴道涂片观察，并采用 0.1% 亚甲基                     可见体积较大、胞质丰富的黄体细胞，伴有毛细血管增
          蓝染色液对阴道涂片进行染色，连续10 d观察到大鼠阴                         生及结缔组织填充。
          道上皮持续白细胞增多，无规律性动情周期或动情周期                           2.8 卵巢组织中 HMGB1/RAGE 通路相关蛋白表达
          紊乱或失去动情周期，则为造模成功。Con组大鼠灌胃                          检测
          1%羧甲基纤维素钠溶液，同时喂食普通饲料，于造模大                              取“2.6”项下各组大鼠的卵巢组织，加入 RIPA 裂解
          鼠同期（造模第 10 天）进行阴道涂片观察，选取连续 4 d                     液，研磨匀浆后于 4 ℃下以 12 000 r/min 离心 15 min，收
          的阴道涂片进行染色镜检。                                       集上清液并测定蛋白浓度，随后于 95 ℃水浴中变性 5
              造模成功后，JPHTF-L组和JPHTF-H组大鼠分别灌                   min。取变性蛋白，电泳分离后转膜，用 5% 脱脂牛奶封
                         [5]
          胃 5.54、11.07 g/kg 的 JPHTF 药液；JPHTF-H+rHMGB1        闭2 h，加入HMGB1、RAGE、p-NF-κB、NF-κB、β-actin一
          组大鼠灌胃 11.07 g/kg 的 JPHTF 药液，同时尾静脉注射                抗（稀释比例均为1∶1 500），于4 ℃孵育过夜；洗膜后加
                          [7]
          8 μg/kg 的 rHMGB1 ；二甲双胍组大鼠灌胃 0.27 g/kg 的            入相应二抗（稀释比例为 1∶4 000），室温孵育 2 h；采用
                  [9]
          二甲双胍 ；Con组和PCOS组同法给予生理盐水，每日1                       ECL 化学发光法显影，使用 Image-Pro Plus 软件分析条
          次，连续干预4周。干预期间，Con组大鼠全程喂食普通                         带的灰度值，以目的蛋白与内参蛋白（β-actin）的灰度值
          饲料，其余各组大鼠均持续喂食高脂饲料。                                比值作为目的蛋白的表达水平，以p-NF-κB与NF-κB的
          2.4 样本采集                                           比值作为NF-κB蛋白的磷酸化水平。
              干预结束24 h后，称量全部大鼠体重，然后连续5 d                     2.9 统计学方法
          对大鼠进行阴道涂片观察，以监测各组大鼠动情周期变                               采用 GraphPad Prism 8.0.1 软件对数据进行统计分
          化，选择动情间期进行取样。采用尾尖取血，直接用血                           析。计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素方差
          糖 仪 检 测 全 部 大 鼠 空 腹 血 糖（fasting  blood  glucose，   分析，进一步两两比较采用 SNK-q 检验。检验水准
          FBG）；然后麻醉大鼠，取腹动脉血 3 mL，待测。取血结                      α＝0.05。
          束后，采用颈椎脱臼法处死所有大鼠，开腹取完整卵巢                           3 结果
          组织，待检。                                             3.1 大鼠动情周期变化
          2.5 卵巢系数测定                                             通过对大鼠阴道涂片进行连续 10 d 的动态观察发
              取“2.4”项下各组大鼠卵巢组织，除去表面脂肪，称                      现，Con组大鼠呈现规律的动情周期变化，其阴道上皮细
          量卵巢湿重，计算卵巢系数：卵巢系数＝双侧卵巢湿重                           胞形态随动情阶段不同而发生典型演变：动情前期以有
          之和（mg）/体重（g）。                                      核上皮细胞为主，动情期转变为大量无核角质化上皮细
          2.6 血清中激素水平及卵巢组织中炎症因子水平检测                          胞，动情后期可见有核上皮细胞、角质化上皮细胞及白
              取“2.4”项下各组大鼠血液，以 3 500 r/min 离心 10             细胞，动情间期则以白细胞为主。PCOS 大鼠的阴道涂
          min后分离血清，按照ELISA试剂盒说明书进行操作，检                       片持续呈现动情间期或动情后期的细胞学特征，未见正
          测血清中 FINS、FSH、LH、T、E2水平，并计算 LH/FSH 比               常的动情阶段演进，表明大鼠的动情周期完全紊乱。结
          值和胰岛素抵抗稳态模型评估指数（homeostasis model                  果见图1。


          中国药房  2026年第37卷第8期                                                China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 8    · 1011 ·
   48   49   50   51   52   53   54   55   56   57   58